四物汤基于雌激素受体亚型介导的雌激素样效应及其分子机理的研究

目的:利用在体动物实验和体外雌激素受体(ER)阳性MCF7细胞培养实验研究四物汤的雌激素样效应及其分子机理。方法:40只未性成熟SD大鼠,体质量50 g,21 d,按照随机分组的原则分为4组:正常对照组、雌激素组、四物汤高剂量组和四物汤低剂量组。灌胃给药,2次/d,持续4 d后取材,称量子宫重量,计算子宫系数,并制备药理血清。用四物汤药理血清作用于MCF7细胞,并分别加入ERα和ERβ特异性拮抗剂MPP和PHTPP作为工具药,通过MTT法检测四物汤对MCF7细胞增殖的影响; Western blot法检测四物汤对MCF7细胞ERα、ERβ蛋白表达的影响。结果:四物汤可发挥雌激素样效应,增加未性成熟大鼠的子宫系数(P 0. 05或0. 01);四物汤药理血清可促进细胞增殖(P 0. 05或0. 01),该促增殖作用在加入MPP或PHTPP后均被减弱,且加入PHTPP后拮抗作用更显著(P 0. 01)。Western blot检测发现四物汤药理血清可提高MCF7细胞ERα、ERβ的表达水平,并可降低ERα与ERβ比值(P 0. 01)。结论:四物汤在整体动物水平可表现出雌激素样效应;体外实验进一步证实四物汤可通过ER通路,特别是ERβ途径影响ER阳性细胞的增殖活性,并可改变ERα与ERβ比值。     

二仙汤含药血清通过AKT途径介导顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制

目的：探讨二仙汤含药血清通过AKT途径介导顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的防护作用及分子机制。方法本实验采用大鼠原代卵巢颗粒细胞体外培养及顺铂造模的方法。通过选取22-24 d的SD大鼠提取 原代卵巢颗粒细胞,进行细胞培养并建立顺铂致卵巢颗粒细胞凋亡模型,将成模卵巢颗粒细胞随机分为：模型组、阳性对照组、二仙汤组,加入相应药理血清连续培养48 h后,用TUNEL法检测各组颗粒细胞凋亡情况;蛋白印迹法检测各组akt、p-akt蛋白的表达情况;RT-PCR检测各组akt基因表达情况。结果：通过TUNEL法对各实验组卵巢颗粒细胞凋亡形态学观察发现：与正常组相比,模型组凋亡情况十分明显。阳性对照组与模型组相比凋亡情况改善;二仙汤组与模型组相比较凋亡情况也得到了缓解。蛋白印迹分析显示：akt、p-akt蛋白表达量总体趋势走向、强度、结果相似。顺铂造模后的各实验组中的akt、p-akt蛋白表达量均减少,模型组akt、p-akt蛋 白表达量最少;和模型组比较,各治疗组均akt、p-akt蛋白表达量表达增多,其中二仙汤组akt、p-akt蛋白表达量 略低于补佳乐组akt、p-akt蛋白表达量。RT-PCR检测akt基因表达情况,与蛋白表达大体一致。结论二仙汤 能明显减轻顺铂引起的卵巢颗粒细胞凋亡,其作用机制与激活AKT信号通路有关。     

红花及其主要成分的药理作用研究进展

红花为活血化瘀的经典中药之一,其供药记载最早见于汉代张仲景的《金匮要略》,常用于治疗高血压、冠心病、脑血栓等疾病。目前,国内外学者对红花及其主要成分红花黄色素、羟基红花黄色素A等在抗脑缺血、抗心肌损伤、抗血栓、抗氧化、抗细胞凋亡、抗炎、抗肿瘤等方面的药理效应和作用机制进行了广泛而深入的研究,为红花的临床应用提供了依据。本文通过查阅相关文献资料,对红花及其主要成分的药理作用研究进行综述,以期为相关领域科研工作者的理论研究、药物的临床应用及新药开发提供参考。     

牛建昭“补肾调周”法治疗PCOS经验介绍

在多年的临证经验中,牛建昭教授认为多囊卵巢综合征以肾元亏虚为本,涉及肝脾,脾肾阳虚、精亏肝郁是其主要病机特点;治疗以培补肾元为贯穿始终的原则,并根据不同月经分期阴阳消长变化采取中药序贯疗法分期论治本病,取得了令人满意的临床疗效。     

基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的调节机制

目的：通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制。方法：应用H₂O₂诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1μmol·L^-1)组和BBR低剂量(0.5μmol·L^-1)组,模型组与BBR组加入浓度为10μmol·L^-1 H₂O₂,孵育40 min。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BB...     

现代生物学发展对中医药现代化的影响

目前,随着我国中医药在临床应用方面的大力推广以及民众对中医药的重视,中医药在治疗和预防疾病方面开始发挥重大的作用。在科学技术高度发展的今天,现代生物学的发展尤其是功能基因组学、蛋白质组学以及系统生物学等的发展,为中医药的现代化奠定了生物学基础。现代生物学技术的发展对解决中医药现代化过程中存在的问题、生物资源保护以及中药新药开发应用等方面具有重要意义,可有效推动中医药的现代化。     

羟基红花黄色素A对雌激素效应相关蛋白表达的影响

目的 探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对雌激素效应相关蛋白表达的影响.方法 培养雌激素受体阳性细胞T47D和特异性雌激素受体(estrogen receptor,ER)阴性细胞SK-BR-3,将1×10-7mol/L-1×10-9mol/L三种梯度浓度的HSYA作用于两种细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测雌激素受体ERα 及ERβ、细胞外调解蛋白激酶1/2(ERK1/2)及p-ERK1/2、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、抑癌基因P27等蛋白的表达情况.结果 与空白对照组相比,在T47D细胞中,高浓度的HSYA促进了ERα、ERβ、ERK1/2、p-ERK1/2、PR的表达,抑制了P27的表达(P<0.01);在SK-BR-3细胞中,HSYA显著抑制了ERK1/2的表达,但对p-ERK1/2的表达影响不明显(P>0.05).结论 HSYA在细胞内影响雌激素效应相关蛋白的表达情况不同,可能是通过调节ER表达及激活ERK信号通路而发挥雌激素样作用.     

中医药院校研究生实验动物学教学模式的探讨

目的 实验动物在中医药相关科学研究中有着重要的地位和作用.实验动物学的基本理论和实验操作技术是中医药院校科研型研究生必须具备的基础知识和基本技能.针对学生的实际情况,我们在教学中选取了适当的教学内容,注重理论与实践相结合,同时特别强调训练和培养学生结合自身专业特点设计并实施动物实验研究的能力.在课程建设中,我们还不断完善课程评价体系,努力提高教学质量和教学效果.     

黄芪和天花粉对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖和迁移及E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响

目的观察黄芪、天花粉及其配伍对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响,探讨其作用机制。方法 MTT法检测B16细胞增殖,根据结果计算细胞生长抑制率为0%时对应的各药物浓度(IC0)、为25%时对应的各药物浓度(IC25)、为50%时对应的各药物浓度(IC50)。设空白组、配伍组(黄芪注射液IC0+天花粉水煎剂IC0、黄芪注射液IC0+天花粉水煎剂IC25、黄芪注射液IC0+天花粉水煎剂IC50、黄芪注射液IC25+天花粉水煎剂IC0、黄芪注射液IC25+天花粉水煎剂IC25)。细胞划痕实验检测B16细胞迁移,Westernblot检测B16细胞迁移相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果 MTT检测结果表明,不同剂量黄芪和天花粉均可抑制B16细胞增殖,具有浓度依赖性;细胞划痕实验结果显示,黄芪和天花粉均影响B16细胞划痕愈合,抑制细胞迁移,具有浓度依赖性;两药不同比例配伍的细胞增殖抑制率明显高于单味中药,差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot检测结果显示,黄芪和天花粉均增加E-cadherin蛋白的表达,降低N-cadherin蛋白的表达。结论黄芪、天花粉及其配伍均可抑制小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移,且两药配伍效果优于单味中药,黄芪和天花粉抑制细胞迁移的机制与E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达相关。     

补骨脂素对人类乳腺癌细胞增殖作用的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,Pso)对人类乳腺癌细胞株增殖的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定补骨脂素对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7和非雌激素依赖性乳腺癌细胞MDA-MB231的细胞增殖作用,并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价补骨脂素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系,流式细胞术对MCF-7细胞的增殖情况进行分析。结果与溶剂对照组相比较,Pso(10～40μmol.L-1)能明显促进MCF-7细胞的增殖,而对雌激素受体阴性MDA-MB231细胞未见影响,并将MCF-7细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且Pso促进MCF-7细胞增殖作用被雌激素受体拮抗剂所拮抗。结论补骨脂素具有雌激素活性,此作用是通过雌激素受体(ER)介导的。