藏药吉堪明目方对糖尿病视网膜病变大鼠的影响及机制研究

摘要：目的 研究藏药吉堪明目方对糖尿病视网膜病变大鼠肠道菌群、氧化应激、血管异常新生的影响,探讨吉堪明目方治疗糖尿病视网膜病变可能的作用机制。方法 采用高脂饲料喂养合并腹腔注射链脲佐菌素（STZ）50 mg·kg-1诱导糖尿病视网膜病变大鼠模型,模型大鼠随机分为模型对照组、羟苯磺酸钙组、吉堪明目方低、中、高剂量组,另设空白对照组。进行体重、空腹血糖值的常规监测;并于造模成功3个月后连续给药8周,而后测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管紧张素Ⅱ（ANG Ⅱ）的含量;采用苏木素和伊红染色观察视网膜常规病理改变,消化铺片观察微血管变化;采用免疫荧光法观察血管内皮生长因子（ VEGF）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在视网膜组织中的表达情况 ;采用16S rDNA高通量测序技术分析藏药吉堪明目方对大鼠肠道菌群结构的影响。结果 吉堪明目方可降低模型大鼠体重的下降趋势,对血糖无明显影响,可减轻视网膜病理改变,改善视网膜血管紊乱形态。吉堪明目方中剂量组可显著降低ICAM-1含量（P＜0.05）。吉堪明目方各剂量组可显著降低ANG Ⅱ含量（P＜0.05,P＜0.01）。吉堪明目方各剂量组可显著降低VEGF、HIF-1α含量（P＜0.05,P＜0.01）。吉堪明目方可以有效抑制模型对照组大鼠肠道菌群多样性减少的趋势,以吉堪明目方低剂量组的抑制效果最为显著。与正常对照组相比,模型对照组大鼠肠道菌群在属水平上有显著变化;给药后,糖尿病大鼠的肠道菌群开始恢复正常,其中以吉堪明目方中剂量组对大鼠肠道菌群调节作用最好。主成分分析表明,空白对照组与模型对照组比较存在明显差异,阳性药及各给药组对模型大鼠的总体表现均有明显的回调作用,以吉堪明目方中剂量组、吉堪明目方高剂量组效果最佳。结论 吉堪明目方能够减轻糖尿病视网膜病变程度,对糖尿病大鼠视网膜的保护作用机制可能与抑制新生血管的形成、调节肠道菌群有关。     

医学人类学视野下的藏医药浴疗法研究初探

藏医药浴疗法属于藏医外治疗法范畴,是日常洗浴护理与特色藏药治疗的结合,因其独到的藏医学理论、独特的治疗手段和良好的治疗效果,在临床治疗和预防保健中得到了广泛的应用。民族医药本质上属于医学范畴,但具有较多的人文因素,因此对藏医药浴疗法的研究,既要进行藏医学科学研究,又要注意进行藏文化特色研究。医学人类学是用人类学的观点和方法,研究人类的疾病和保健问题及其与生物学因素和社会文化因素的相互关系的一门学科。本文从医学人类学的视角,探索了藏医药浴疗法特色,提出了藏医药浴疗法现代研究中的问题及建议,以期在系统理解藏医药浴疗法的文化内涵基础上,开展具有藏医药文化特色的传承、发展和创新系统研究。     

HPLC法测定藏药巴桑母酥油颗粒中没食子酸的含量

目的建立藏药巴桑母酥油颗粒中没食子酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）测定巴桑母酥油颗粒中没食子酸的含量,色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱Welch Materials,流动相为乙腈—0.1%磷酸水溶液（3∶97）,流速为1.0 ml/min;柱温为30℃,检测波长为215 nm,外标一点法定量。结果没食子酸在0.2~1.6μg范围内,与峰面积积分值线性关系良好（n=6）。该方法的平均回收率为98.34%,相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为1.62%（n=9）。四批样品的含量分别是0.3224 mg/g、0.3354 mg/g、0.3288 mg/g、0.3269 mg/g。结论高效液相色谱法准确、简便、快速,适合于该制剂的质量控制。     

GC-MS分析沙棘果油脂肪酸组成及其亚油酸含量测定

目的分析沙棘果油中脂肪酸组成,采用气相色谱法,建立沙棘果油中亚油酸含量的方法,比较不同提取方法下亚油酸含量.方法采用GC-MS鉴定沙棘果油中脂肪酸成分;以丁二酸二乙二醇聚酯(DEGS)为固定相,涂布浓度为10%;柱温165℃,汽化室215℃,检测器215℃;载气流速:高纯氮150 kpa,氢气70 kpa,空气50 kpa;氢火焰离子化检测器(FID),测定沙棘果油的脂肪酸组成及其亚油酸含量. 结果压榨离心法制备的沙棘果油主要由棕榈酸、棕榈一烯酸、油酸等组成;亚油酸测定方法线性关系、重现性及回收率试验结果良好.结论所建立的质量标准研究方法可行,重复性好,可以作为沙棘果油质量评价方法之一,同时应注意不同提取方法带来的亚油酸含量差异.     

姜黄提取物固体分散体的制备及体外评价

目的 制备共聚维酮-泊洛沙姆姜黄提取物固体分散体[PVP/VA-Poloxamer-Curcumae Longae Rhizoma extract (CLRE)solid dispersion (SD),PAP-CSD]、共聚维酮姜黄提取物固体分散体(PVP/VA CLRE solid dispersion,PA-CS...     

酶法提取余甘子总多酚的研究

目的:采用酶法优选余甘子多酚类化合物的提取工艺。方法:在单因素试验的基础上,采用正交设计进行提取条件的优化,以总多酚的提取率为考察指标,采用福林-酚比色法进行总多酚的含量测定,确定了提取工艺的最佳参数。结果:确定余甘子中总多酚的最佳提取工艺为:温度60℃,料液比为1∶30,纤维素酶和果胶酶的比例为1∶1,总加酶量为2%,pH值为4.0,恒温振荡(低速r=60~100/min),提取时间4 h,总多酚提取率为13.68%。结论:酶法提取优于传统溶剂提取法,操作简单可行,为余甘子总多酚的提取工艺提供了参考。     

藏药独一味及其制剂质量标准研究

目的:制定藏药独一味制剂的质量标准。方法:采用薄层色谱法以木犀草素为对照品对独一味药材及制剂进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对独一味药材及制剂中的木犀草素进行含量测定。结果:以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板,以苯-醋酸乙酯-冰醋酸(6∶4∶0.5)为展开剂,可进行独一味药材及其制剂的鉴别研究;高效液相色谱法测定中木犀草素在0.2~3.2μg范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率103.0%,RSD=0.43%。结论:该方法能准确可靠地进行定性、定量检测,可有效的控制制剂的质量。     

混合加权法结合响应面试验优化视力舒颗粒煎煮工艺

目的 优选视力舒颗粒最佳煎煮工艺。方法 以金丝桃苷、橙皮苷、葛根素、总多糖得率、干膏得率为考察指标,采用层次分析法(analytic hierarchy process,AHP),基于指标相关性的权重赋权法(criteria importance through inter-criteria correlation,CRITIC)、AHP-CRITIC混合加权法,分别对指标测得数据进行权重分配并综合评分,比较单一赋权法和混合加权法评分结果,以综合评分为响应值进行Box-Behnken响应面试验优化煎煮工艺,并加以验证。结果 AHP-CRITIC混合加权较单一赋权法更科学、合理、全面,视力舒颗粒最优煎煮工艺为加11倍量水,煎煮3次,每次80 min。结论 AHP-CRITIC法可用于视力舒颗粒煎煮工艺多指标权重的确定,经过验证试验证实了优选出的煎煮工艺稳定可行,可用于工业化大生产。     

藏药小檗皮的质量标准研究

为建立藏药小檗皮的质量标准,提高其质量控制水平,该研究参照《中国药典》2010年版附录相关方法,测定小檗皮药材的水分、灰分和浸出物的含量;以主要有效成分木兰花碱、药根碱、巴马汀、小檗碱为指标,分别采用薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)进行定性鉴别和含量测定研究。结果该药材的TLC鉴别斑点清晰、分离度较好;18批药材的测定结果表明水分为8.39%~12.23%,总灰分为4.50%~9.96%,酸不溶性灰分为0.10%~0.69%,浸出物为20.62%~37.13%,药材中木兰花碱、药根碱、巴马汀、小檗碱的平均质量分数分别为5.98%,0.63%,0.30%,2.50%。该研究所建立的方法准确可靠,可用于小檗皮药材的质量控制和质量评价。     

小檗皮水浸膏对db/db糖尿病小鼠视网膜病变的影响(Ⅱ)

目的:观察小檗皮浸膏对基因突变自然发病型db/db糖尿病小鼠视网膜蛋白激酶C-β(PKC-β),缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探索该药防治糖尿病视网膜病变的作用机制。方法:选用18周龄db/db糖尿病小鼠,db/m型同性同窝瘦型小鼠为对照。采用随机方法将db/db小鼠分为db/db组,小檗皮高、中、低剂量组(1.50,0.75,0.38 g·kg~(-1)),羟苯磺酸钙组(0.23 g·kg~(-1)),盐酸小檗碱组(0.135 g·kg~(-1))。相关药物连续ig 2个月,并于ig 2个月末处死小鼠。采用免疫组化方法观察3种因子在视网膜结构的表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测视网膜内3种因子的基因与蛋白表达。结果:与db/m组比较,db/db组视网膜组织PKC-β,VEGF免疫组化反应呈阳性,表达显著增加(P0.01);HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达量有升高趋势,但差异无统计学意义;db/db组三种因子的基因与蛋白表达显著增加(P0.01)。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P0.05),小檗皮高剂量组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P0.01),其他各给药组较db/db组PKC-β表达有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组视网膜组织HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达有降低趋势,但差异无统计学意义;小檗碱组、小檗皮低剂量组视网膜组织VEGF免疫组化反应呈阳性,表达明显降低(P0.01),其他各给药组视网膜组织VEGF有降低趋势,但差异无统计学意义。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组HIF-1α基因表达明显降低(P0.05),其他各给药组PKC-β,HIF-1α,VEGF基因表达有降低趋势,但差异无统计学意义。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、低剂量组PKC-β蛋白表达显著降低(P0.01),小檗皮中剂量组PKC-β蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义;羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、中剂量组HIF-1α蛋白表达显著降低(P0.01),小檗皮低剂量组HIF-1α蛋白表达量有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组VEGF蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:小檗皮浸膏防治db/db糖尿病小鼠视网膜病变的作用机制可能与抑制PKC-β,HIF-1α,VEGF表达有关。