用组织芯片研究结直肠腺癌组织中nm23 mRNA,CD44s和CD44v6 的表达意义

目的　研究 nm2 3m RNA,CD44 s和 CD44 v6表达与结直肠腺癌发生、发展及转移的关系 .方法　应用组织芯片技术 ,通过原位杂交和免疫组织化学方法分别检测 40例结直肠腺癌标本和 2 2例正常结直肠组织标本中 nm2 3m RNA,CD44 s和 CD44 v6表达情况 .结果　 nm2 3m RNA在结直肠腺癌组织和正常组织中表达无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,且与结直肠腺癌的分化程度无相关性 (P>0 .0 5 ) ,但与癌细胞的侵润及淋巴结转移呈明显负相关 (r=- 0 .49,P<0 .0 1) .CD44 s在结直肠腺癌组织和正常组织中阳性率分别为 42 %(17/ 40 )和 18. 1%(4 / 2 2 ) ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,而CD44 v6只在结直肠腺癌组织中表达 ,阳性率为 5 5 . 8%(2 2 / 40 ) ,且与结直肠腺癌淋巴结转移和癌侵润呈明显正相关(r=0 .47,P<0 .0 1) .在高、中分化腺癌组织中 ,CD44 v6阳性率分别为 45 .8%(11/ 2 4)和 6 8.7%(11/ 16 ) ,有显著性差异(P<0 .0 5 ) ,但在直肠腺癌组织与结肠腺癌组织间表达无显著性差别 (P>0 .0 5 ) .结论　 CD44 s、CD44 v6在结直肠腺癌组织中过量表达伴随 nm 2 3m RNA表达缺失 ,与结直肠腺癌转移和侵润密切相关 ,联合检测 3种基因能更准确判断结直肠腺癌转移和侵润状态 . CD44 v6表达过量与结直肠腺癌分化程度相关 .     

评价中药寒热药性的实验方法研究

目的通过考察寒凉药与温热药对人乳腺癌细胞MCF-7体外生长增殖的影响来建立评价中药寒热药性的实验方法。方法用噻唑蓝比色法(MTT法)考察4种寒凉药和5种温热药对人乳腺癌细胞MCF-7体外生长增殖的影响,倒置显微镜观察寒凉药、温热药对细胞形态特征的影响,台盼蓝染色法分析所选寒凉药和温热药的细胞毒性作用。结果寒凉药(50～800μg/mL黄连、虎杖、竹叶、夏枯草)抑制MCF-7生长增殖,随质量浓度增大抑制作用增强。温热药干姜和白胡椒(50～800μg/mL)促进MCF-7生长增殖,干姜的促进作用随质量浓度增大而增强,白胡椒的促进作用先增大后减小。其余温热药低质量浓度(肉桂与花椒50～200μg/mL、仙茅50～400μg/mL)促进MCF-7生长增殖,促进作用随质量浓度增大而增强;高质量浓度(肉桂与花椒400～800μg/mL、仙茅600～800μg/mL)抑制MCF-7生长增殖,抑制作用随质量浓度增大而增强。形态学观察表明寒凉药(黄连、虎杖、竹叶、夏枯草)在所选质量浓度范围内使MCF-7密度减小,细胞固缩变圆;温热药(干姜、白胡椒、肉桂、仙茅、花椒)在各自起促进作用的质量浓度范围内使MCF-7密度增大,生长旺盛。台盼蓝染色表明各寒凉药与温热药对MCF-7没有细胞毒性作用。结论本方法有可能用于中药寒热药性的实验评价。     

粗茎秦艽组织培养及再生植株

用粉茎秦艽Gentianacrassicaulis子叶和下胚轴为材料。在MS＋2mg／L2，4－D＋0．5mg／LBA的培养基上进行培养，子叶及下胚轴的出愈率为100％。愈伤组织继代培养于MS＋0．5mg／L2，4-D＋0．5mg／LBA＋0．5mg／LNAA＋500mg／LLH＋3倍MS有机物和维生素的培养基上生长旺盛。愈伤组织转入分化培养基MS＋1mg／LNAA＋2mg／LBA＋3mg／LZT＋3mg／LGA＋500mg／LLH＋6％蔗糖＋3倍MS有机物和维生素＋3倍FeSO4（Na2－EDTA）上培养，其中40％形成体细胞胚。体细胞胚在无激素MS培养基上发育成苗。     

怀区地黄遗传多样性的ISSR鉴定

目的利用ISSR标记技术对怀区地黄的8个品种和2个茎尖培养脱毒系进行了遗传多样性分析。方法用44条ISSR引物进行初选，然后用其中适合的10个ISSR引物进行ISSR分析。结果10条ISSR引物共扩增出110条带。基于这些条带，用SPSS10.0软件分析，建立了遗传Jaccard相关系数矩阵，构建了分子树状图，将怀区地黄的8个品种和2个组培系分为2类：其中一类群含有6个材料，包括组培85．5、大田85．5、组培9302、大田9302、金状元和金白地黄；另一类群含有4个材料，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。而且主成分分析结果支持上述的聚类分析结果；用POPGENE32软件分析知，多态性指数为0．3775，有效等位基因数为1．4037，多态性比率为71.82％；用一个ISSR6引物建立了10个供试地黄样品的DNA指纹图谱并且能将其彼此区分出来。结论ISSR标记适合于构建怀区地黄的DNA指纹图谱、品种鉴定和遗传多样性分析。     

用组织芯片研究nm23mRNA和p16在肺癌中的表达意义

目的探讨人肺癌中nm23 mRNA和p16的表达水平与肺癌发生、发展和转移的关系.方法应用组织芯片技术,通过原位杂交和免疫组织化学方法对72例人肺癌组织和23例癌旁正常肺组织中nm23 mRNA和p16的表达水平及其与肺癌分化程度、淋巴结转移的关系进行研究.结果nm23 mRNA在肺癌、癌旁正常肺组织以及有淋巴结转移的肺癌原发灶中的阳性表达率分别为55.6%(40/72)、82.6%(19/23)、25.0%(6/24).而p16的阳性表达率分别为45.8%(33/72)、73.9%(17/23)、25.0%(6/24),nm23 mRNA和p16的表达水平与肺癌淋巴结转移以及肺癌分化程度明显相关(P＜0.01,P＜0.05).此外,p16的表达水平与肺癌组织类型相关(X2=6.75,P＜0.05),而nm23 mRNA的表达与患者年龄、性别、组织类型无关(P＞0.05).结论nm23基因和p16基因与肺癌淋巴结转移以及肺癌分化程度密切相关,nm23 mRNA和p16蛋白表达降低预示着肺癌的转移,两者可能是监测肺癌患者病情发展及评价预后的有用指标.     

怀区地黄遗传多样性的ISSR鉴定

目的利用ISSR标记技术对怀区地黄的8个品种和2个茎尖培养脱毒系进行了遗传多样性分析。方法用44条ISSR引物进行初选，然后用其中适合的10个ISSR引物进行ISSR分析。结果10条ISSR引物共扩增出110条带。基于这些条带，用SPSS10.0软件分析，建立了遗传Jaccard相关系数矩阵，构建了分子树状图，将怀区地黄的8个品种和2个组培系分为2类：其中一类群含有6个材料，包括组培85．5、大田85．5、组培9302、大田9302、金状元和金白地黄；另一类群含有4个材料，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。而且主成分分析结果支持上述的聚类分析结果；用POPGENE32软件分析知，多态性指数为0．3775，有效等位基因数为1．4037，多态性比率为71.82％；用一个ISSR6引物建立了10个供试地黄样品的DNA指纹图谱并且能将其彼此区分出来。结论ISSR标记适合于构建怀区地黄的DNA指纹图谱、品种鉴定和遗传多样性分析。