体外传代培养对人视网膜色素上皮细胞免疫调控能力的影响

目的:研究体外传代培养对人类视网膜色素上皮(human reti-nal pigment epithelialium,HRPE)细胞免疫调控能力的影响。方法:建立HRPE细胞与异体淋巴细胞共培养系统,采用流式细胞术检测原代及传代HRPE细胞(第1、2、3、4、5、6代)Fas表达以及诱导异体淋巴细胞凋亡能力的差异。结果:HRPE与淋巴细胞体外共培养时,HRPE细胞Fas表达随着传代逐渐减弱,Fas表达与传代代数呈负相关(阳性细胞率r=-0.859,P<0.01;平均荧光强度r=-0.880,P<0.01),HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡随着传代逐渐减弱,淋巴细胞凋亡率与传代代数呈负相关(r=-0.838,P<0.01),共培养时传代HRPE细胞Fas表达迅速下降,至第3代与第4代间Fas表达差异无统计学意义(P>0.05),共培养时传代HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡率迅速下降,至第3代与第4代间淋巴细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:体外传代培养的HRPE细胞,传代数越大细胞变异越大,第3代后细胞的免疫调控能力明显下降。     

自体虹膜色素上皮细胞移植治疗视网膜色素上皮细胞变性研究

目的:研究自体虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelium,IPE)移植治疗视网膜色素上皮细胞变性的效果。方法:采用酶-机械分离-酶消化法获取高纯度、高活力的IPE细胞用于移植,采用外路法将IPE细胞悬液移植入视网膜下腔。结果:IPE移植术后患者眼底移植区色素沉着减少,未见渗出,出血,视网膜平,视力入院时的0.15,术后2wk提高至0.2。多焦ERG显示移植区P1波平均反应密度上升。结论:自体虹膜色素上皮细胞移植有望成为视网膜色素上皮细胞变性疾病治疗的一新方法。     

p21和p27在兔晶状体上皮细胞中的表达

目的:研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21和p27蛋白在不同年龄段兔晶状体上皮细胞（lens epithelial cells,LECs）中的表达规律。方法:分别取10,20,30周龄兔晶状体前囊膜组织,采用RT-PCR和Western-blot检测该组织中p21和p27的mRNA水平和蛋白水平。结果:兔晶状体前囊膜组织中p21与p27的mRNA水平和蛋白水平相似,青年最高,老年次之,中年最低。p21和p27在青年、中年及老年兔LECs中的表达水平有差异（P<0.05）。结论:p21和p27在兔LECs周期调控过程中可能起着平衡作用,对防止PCO的研究具有一定参考价值。     

Nd:YAG激光虹膜切开术对葡萄膜炎继发性青光眼的眼压和前房的影响

目的：评价Nd：YAG激光虹膜切开术治疗葡萄膜炎继发性青光眼的临床效果。

方法：回顾性分析我院35例35眼葡萄膜炎继发瞳孔阻滞型青光眼经Nd：YAG激光虹膜切开术治疗的情况。随诊8～39(平均24.6)mo。

结果：患者35例35眼均一次激光完成虹膜切开术。术后3d,眼压控制在14～23(平均19.8±6.5)mmHg,与术前(43.5±10.3mmHg)相比,差异有统计学意义(t=2.421,P<0.05)。术后前房均明显加深,周边虹膜膨隆消失。术后2wk复查UBM,14眼房角重新开放,与术前相比,差异有统计学意义(χ²=12.78,P<0.01)。

结论：Nd：YAG激光虹膜切开术是治疗葡萄膜炎继发性青光眼的一种安全有效的方法,能避免此类患者房角永久性粘连。     

人骨髓间充质干细胞向光感受器样细胞诱导分化的研究

目的:探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)定向分化成光感受器样细胞所需的微环境。方法:采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化人BMSCs,培养第3代的细胞以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及脑源性神经营养因子(BDNF)3种因子首先进行向神经前体细胞诱导分化,应用免疫细胞化学检测巢蛋白及微管相关蛋白-2,当巢蛋白阳性表达率达到最高时更换诱导因子,加入色素上皮衍生因子(PEDF)及牛磺酸(taurine)继续诱导2~3wk,用免疫细胞化学及RT-PCR法检测视紫红质的表达情况。结果:诱导第3d开始能检测到巢蛋白表达,第12d阳性表达率达到最高,达(90.9±2.6)%。微管相关蛋白-2在诱导后第6d检测到阳性表达。部分细胞形态呈神经元细胞样。第12d诱导因子更换为PEDF及taurine继续诱导2~3wk,检测到有视紫红质表达,第2wk阳性率为(20.7±3.8)%,第3wk阳性率为(89.8±3.7)%。结论:采用分阶段诱导法,应用因子bFGF,EGF,BDNF及PEDF,taurine能在体外诱导BMSCs表达光感受器细胞标志物视紫红质。     

折叠式人工晶状体缝线固定术在后囊破裂应用

目的 评价后房型折叠式人工晶状体缝线固定术的疗效.方法 小切口白内障囊外摘除术中后囊破裂患者按随机数字表分为两组:后房型一片式人工晶状体缝线固定术组(对照组)与后房型折叠式人工晶状体缝线固定术组(实验组).对照组11例(11只眼),实验组12例(12只眼).术后随访观察视力、眼压、散光度变化和人工晶状体偏位程度.结果 术后病人裸眼视力均有提高,实验组散光度变化较对照组小,差异有统计学意义(t=3.137;P=0.005).术后实验组人工晶状体偏位程度与对照相近,差异无统计学意义(t=1.083;P=0.291).结论 后房型折叠式人工晶状体缝线固定术治疗效果优于后房型一片式人工晶状体缝线固定术.

Abstract：

Objective To evaluate the therapeutic effect of posterior chamber foldable intraocular lens (IOL) suture fixation. Methods Posterior capsular rupture cases with small incision cataract extraction surgery were randomly divided into two groups: posterior chamber single-piece IOL suture fixation group (the control group) and posterior chamber foldable IOL suture fixation group (the experimental group). The control group included 11 cases ( 11 eyes) and the experimental group included 12 cases ( 12 eyes). Postoperative follow-up observations included visual acuity, intraocular pressure, astigmatism change and IOL deviation. Results Postoperative uncorrected visual acuity improved in all cases. Astigmatism changes in the experimental group were smaller than that in the control group. The difference was statistical significance (t = 3.137, P =0.005). The degree of IOL deviation in the experimental group was similar to that in the control group. The difference had no statistical significance (t= 1.083, P= 0.291). Conclusions The therapeutic effect of posterior chamber foldable IOL suture fixation is better than that of posterior chamber single-piece IOL suture fixation.     

激光周边虹膜成形术中光凝兔青光眼模型不同部位虹膜的效果比较

背景 激光周边虹膜成形术(LPI)能使虹膜收缩变平,房角增宽,在临床上用于青光眼的治疗.但目前临床上对LPI的最佳作用部位尚无定论. 目的 探讨选择不同部位虹膜行LPI对青光眼疗效的影响.方法 取健康成年雄性灰兔40只,用含质量分数0.3％卡波姆和质量分数0.025％地塞米松的复方卡波姆溶液0.1 ml行兔右眼前房注射建立青光眼动物模型,然后将模型眼按随机数字表法随机分为模型对照组、角巩膜缘对应部位组、距角巩膜缘1个光斑对应部位组和距角巩膜缘2个光斑对应部位组,每组各10只.按照分组描述部位应用532 nm激光对角巩膜缘对应部位组、距角巩膜缘1个光斑对应部位组和距角巩膜缘2个光斑对应部位组实验眼行LPI,光斑直径为500 μm,能量为300 mW,曝光时间为0.3s,激光击射24个点,模型对照组未行LPI.用Schi(o)tz眼压计记录术前及术后2、4、7、14、30 d各组兔的眼压并计算房水流畅系数(C值),用超声生物显微镜(UBM)测定上述时间点兔眼前房深度(ACD)、房角开放度数(AA)和距巩膜突500 μm半径内的房角开放距离(AOD500).于术后30 d摘取兔眼球,采用苏木精-伊红染色法观察各组兔眼房角的形态学改变.结果UBM检查显示,与模型对照组比较,LPI各组兔眼房角均明显增宽,以距角巩膜缘1个光斑对应部位组最为明显,距角巩膜缘2个光斑对应部位组效果最不明显.与模型对照组比较,角巩膜缘对应部位组、距角巩膜缘1个光斑对应部位组、距角巩膜缘2个光斑对应部位组兔眼眼压均明显下降,C值均明显增加,AA和AOD500均明显增加,总体比较差异均有统计学意义(眼压:F分组=16.848,P＜0.01;C值:F分组=9.629,P＜0.01;AA:F分组=62.336,P＜0.01;AOD500:F分组=77.779,P＜0.01).与各自LPI组内术前值比较,兔眼术后2、4、7、14、30 d眼压均明显下降,C值、AA和AOD500值均明显增加,总体比较差异均有统计学意义(眼压:F时间=3.041,P=0.011;C值:F时间 =4.311,P＜0.01;AA:F时间=14.627,P＜0.01;AOD500:F时间=20.378,P＜0.01).与模型对照组比较,角巩膜缘对应部位组、距角巩膜缘1个光斑对应部位组兔眼各时间点ACD值均明显增加,而距角巩膜缘2个光斑对应部位组与其相似,总体比较差异有统计学意义(F分组=18.017,P＜0.01),各组兔眼LPI前后不同时间点ACD的总体比较差异无统计学意义(F帅=0.022,P=1.000).苏木精-伊红染色可见各LPI组术后30 d兔眼房角处小梁网和房角粘连均被拉开,房角不同程度增宽.结论 LPI可使青光眼模型兔眼房角增宽,眼压下降.在距离角巩膜缘1个光斑处虹膜上行LPI效果最佳.     

Nd:YAG激光后囊膜切开孔径大小对屈光度、眼压和黄斑厚度的影响

目的探讨Nd：YAG激光后囊膜切开孔径大小对后发性白内障患者术后屈光度、眼压和黄斑厚度的影响。方法回顾性分析Nd：YAG激光后囊膜切开术治疗后发性白内障患者76例（83只眼）,根据后囊膜切开孔径大小,将患者分为两组：A组3.5～4.5 mm,B组4.6～5.5 mm,观察术前以及术后1 d、1周、1个月患者最佳矫正视力（BCVA）、等效球镜（SE）、眼压和黄斑厚度的变化。结果 A组和B组术后BCVA均较术前明显提高（P〈0.05）,而两组间BCVA差异均无统计学意义（P〉0.05）。术后两组SE均较术前增加（P〈0.05）;术后1个月两组SE均高于术后1 d、1周（P〈0.05）,且B组患者SE大于A组（P〈0.05）。术后1 d两组眼压均较术前升高（P〈0.05）;而与术前相比,术后1周、1个月两组眼压差异无统计学意义（P〉0.05）;两组间眼压差异均无统计学意义（P〉0.05）。术后1 d、1周两组黄斑厚度均较术前增加（P〈0.05）;而术后1个月两组黄斑厚度与术前相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;两组间黄斑厚度差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 Nd：YAG激光后囊膜切开孔径的大小与术后眼压、黄斑厚度的改变无关,但较大的切开孔径会引起更多的远视漂移。     

重症早产儿视网膜病变的高危因素分析

目的探讨重症早产儿视网膜病变(ROP)的发生率及高危因素分析对临床筛查的指导意义。方法回顾性分析2013年1月至2015年12月756例早产儿临床资料,记录其孕周、出生体重、吸氧时间、吸氧浓度、APgar评分(1分钟in)、APgar评分(5 min)、败血症、呼吸暂停、机械通气、输血等。应用t检验、卡方检验以及Logistic回归分析分析重症ROP与孕周(GA)、出生体重(BW)、吸氧时间、吸氧浓度、APgar评分(1 min)、APgar评分(5 min)、败血症、呼吸暂停、机械通气、输血等因素之间的关系。结果 756例早产儿,严重ROP发生3.3%。各因素中,孕周较少、低出生体重、长时间吸氧、高浓度吸氧、APgar评分(5 min)<4分,机械通气、输血是重症ROP的高危因素,统计学有显著差异。结论严重ROP的发生受孕周较少、低出生体重、长时间吸氧、高浓度吸氧、APgar评分(5 min)<4分,机械通气、输血影响。特别是GA≤28周或BW≤1000 g早产儿患严重ROP的危险性显著增加,建议重点对此类早产儿进行及时筛查。     

体外骨髓间充质干细胞对脂多糖活化的视网膜小胶质细胞生物学功能的影响

背景 视网膜小胶质细胞(RMG)的活化在视网膜变性疾病的发病过程中发挥重要作用,趋化因子CX3C模体配体1(CX3CL1)参与小胶质细胞稳态的调节.骨髓间充质干细胞(BMSCs)可通过旁分泌的方式释放可溶性因子,保护中枢神经系统组织细胞的生物功能,但其对治疗视网膜变性疾病的途径和靶细胞是否为RMG尚不清楚. 目的 观察BMSCs对脂多糖(LPS)活化的RMG生物学功能的影响,探讨CX3CL1/CX3CR1信号通路对二者相互作用的影响.方法 采用视网膜胶质细胞混合培养和振荡分离的方法分离培养SD大鼠RMG,采用免疫荧光染色法观察细胞中CD11b、Iba1和谷氨酰胺合成酶(GS)的表达以鉴定培养的RMG.在细胞培养液中添加1 mg/ml的LPS液2μl以刺激RMG 24 h,然后将细胞分为LPS对照组、BMSCs组和CB-BMSCs组,其中BMSCs组将RMG与BMSCs共培养24 h,CB-BMSCs组将RMG与中和性抗体封闭CX3CL1的BMSCs共培养24 h,未予LPS刺激的RMG作为空白对照组.采用ELISA法检测共培养体系中RMG分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的变化;采用EdU法观察各组RMG的增生能力;采用流式细胞术检测RMG吞噬荧光微球后的平均荧光强度(MFI);利用Transwell小室试验检测RMG的迁移细胞数.结果 用视网膜胶质细胞混合培养和振荡分离的方法成功分离和培养出RMG,细胞中CD11b和Iba1阳性表达呈绿色荧光,GS呈阴性表达.空白对照组、LPS对照组、BMSCs组和CB-BMSCs组细胞上清液中TNF-α的分泌量分别为(2.55±0.97)、(24.91±3.07)、(20.38±2.97)和(24.90±1.88) ng/ml,总体比较差异有统计学意义(F=119.90,P＜0.05);IL-1β的分泌量分别为(1.12±0.36)、(10.40±2.76)、(7.00±1.75)和(9.55±1.11)ng/ml,总体比较差异有统计学意义(F=34.96,P＜0.05);其中BMSCs组TNF-α和IL-1 β分泌量均低于LPS对照组(均P＜0.05),而CB-BMSCs组与LPS对照组间TNF-α和IL-1β分泌量的差异均无统计学意义(均P＞0.05).各组间RMG增生率的总体比较差异有统计学意义(F=42.94,P＜0.05),其中BMSCs组RMG增生率明显低于LPS对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),而BMSCs组与CB-BMSCs组间差异无统计学意义(P＞0.05).各组间RMG的MFI值和迁移细胞数量的总体比较差异均有统计学意义(F=70.55、15.49,均P＜0.05),其中BMSCs组MFI值和迁移细胞数量均明显高于LPS对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而CB-BMSCs组与LPS对照组间MFI值和迁移细胞数量的比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 BMSCs能够抑制LPS活化的RMG的增生能力,可能通过CX3CL1/CX3CR1信号通路来抑制活化的RMG分泌促炎性因子,并增强RMG的吞噬和迁移能力.