家蝇抗菌肽Cecropin对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响及其机制

目的探讨家蝇抗菌肽Cecropin对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响及其机制。方法人肝癌细胞BEL-7402经家蝇抗菌肽Cecropin作用后,光学显微镜观察细胞生长情况,PI单染流式细胞术检测各组细胞周期分布情况,并采用间接免疫荧光标记技术通过流式细胞仪检测细胞周期检测点激酶1(CHK1) 和细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)。结果光学显微镜下,对照组细胞形态规则,呈梭形贴壁生长,抗菌肽组细胞部分变圆,贴壁不佳,数量减少;细胞增殖周期发生改变, G₀/G₁与G₂/M期细胞比例降低,S期细胞比例增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05) ,并且细胞周期调控关键蛋白分子CHK1和CDK2的表达增高。结论家蝇抗菌肽Cecropin可通过调节CHK1和CDK2的表达影响BEL-7402细胞增殖周期。     

家蝇抗菌肽基因在家蝇幼虫中的空间转录模式

目的研究家蝇抗菌肽基因attacin、cecropin、defensin在家蝇幼虫体内的空间转录情况。方法采用体外转录方法合成地高辛标记的cRNA探针,通过原位杂交方法检测微生物诱导前后家蝇幼虫体内attacin、cecropin、defensin变化情况。结果在未诱导的家蝇幼虫体内,体壁、中肠组织均没有检测到attacin、cecropin和defensin转录,在脂肪体中仅检测到cecropin和defensin的弱转录信号;在诱导后的家蝇幼虫中,体壁上检测到attacin和defensin强转录信号,cecropin没有转录,脂肪体中检测到attacin、cecropin和defensin强转录信号,而在中肠组织中检测到cecropin和defensin转录,没有attacin转录。结论经微生物诱导后,家蝇幼虫体内抗菌肽基因转录水平大大提高,为进一步研究家蝇抗菌肽在机体免疫中的作用及其机制打下了基础。     

HPLC法同时测定2种返魂草药材中金丝桃苷和绿原酸的含量

目的采用HPLC法同时测定麻叶返魂草和单麻叶返魂草药材中金丝桃苷和绿原酸的质量分数。方法采用Agilent Zorbax SB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-0.1%（体积分数）三氟乙酸溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为30℃,检测波长为280 nm。结果 2种成分均达到基线分离,金丝桃苷和绿原酸的质量浓度分别在1.03～41.02μg·mL^-1、2.70～43.20μg·mL^-1范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.2%、99.2%,RSD值分别为3.9%、3.9%。麻叶返魂草中这2种成分的质量分数均高于单麻叶返魂草。结论该方法准确、简便、分离度好,为返魂草药材的质量评价提供了依据。     

家蝇抗菌肽Cecropin对人源性肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的分析家蝇抗菌肽Cecropin对人源性肿瘤细胞体外生长增殖与凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）MTT比色法测定家蝇抗菌肽Cecropin对人肺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7、人宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株BEL-7402和人正常肝细胞株Changs,Liver生长增殖情况的影响,采用流式细胞术检测家蝇抗菌肽Cecropin作用后4株肿瘤细胞凋亡的情况,对照组不加家蝇抗菌肽Cecropin。结果家蝇抗菌肽Cecropin对4株人源性肿瘤细胞的生长均有抑制作用,并能诱导肿瘤细胞发生凋亡,但对人肝癌细胞BEL-7402作用效果相对较强。结论家蝇抗菌肽Cecropin能够影响人源性肿瘤细胞的生长与凋亡,作用机制需进一步研究。     

中药罗仙子抗动脉粥样硬化活性部位氨基酸HPLC指纹图谱分析

目的：构建中药罗仙子抗动脉粥样硬化活性部位氨基酸指纹图谱,为明确其氨基酸组成及建立其质量控制方法提供实验依据。方法用2,4-硝基氟苯柱前衍生法建立罗仙子抗动脉粥样硬化活性部位水解氨基酸的HPLC指纹图谱,优化衍生条件。结果衍生剂量为1%（体积分数）2,4-二硝基氟苯（2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB ）乙腈溶液1.0 mL、衍生温度为60℃、衍生时间为60 min时,衍生化完全;样品水解氨基酸中谷氨酸和精氨酸的质量分数较高,均大于5%;HPLC指纹谱图共确定24个共有峰,10批样品相似度在0．99-1．00之间。结论本方法稳定、可靠,重复性好,明确了罗仙子抗动脉粥样硬化活性部位的氨基酸组成,并初步建立了该部位的质量控制方法。     

德国小蠊共生菌沃尔巴克氏体的分子检测与分析

目的检测共生菌沃尔巴克氏体（Wolbachia）在德国小蠊体内的感染情况。方法应用沃尔巴克氏体wsp基因的1对通用引物（81F，691R），通过聚合酶链反应、T—A克隆和序列测定，将所得wsp基因序列与GenBank中的已知Wolbachia品系wsp基因进行同源性分析。结果成功地从德国小蠊成虫的总DNA中扩增到一段317bp的wsp基因片段，与GenBank中的已知Wolbachia品系wsp基因同源性最高可达95％。结论沃尔巴克氏体Wolbachia共生菌可能广泛存在于德国小蠊体内，为进一步研究德国小蠊的孤雌生殖与Wolbachia的相关关系等研究奠定了基础。     

五谷虫小分子多肽对小鼠腹泻型肠易激综合征的作用机制研究北大核心CSCD

目的研究五谷虫小分子多肽(LMWP)提取物对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)小鼠的作用机制。方法用慢性束缚联合番泻叶灌胃的方法构建IBS-D小鼠模型。按照体重将C57BL/6小鼠随机分为6组:正常组、模型组、阳性药对照组和低、中、高剂量3个剂量实验组,每组8只。正常组与模型组用生理盐水灌胃,阴性药对照组灌胃参苓白术散2 g·kg-1,低、中、高3个剂量实验组灌胃LMWP 0.5,1.0,2.0 g·kg-1。在持续造模4周后开始给药,连续给药1周。用腹壁撤退反射(AWR)实验检测小鼠的内脏敏感性,玻璃珠排出法检测结肠转运功能,旷场实验检测小鼠焦虑抑郁样行为,用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中五羟色胺(5-TH)和脑源性神经营养因子(BDNF)的含量,用实时定量-PCR法检测结肠组织5-HT3A与BDNF基因的表达水平。结果正常组、模型组、阳性药对照组和低、中及高3个剂量实验组的AWR评分(扩张容量为0.50 mL时)分别为2.33±0.44,3.71±0.28,2.33±0.36,3.46±0.36,3.04±0.42和2.62±0.33;这6组的结肠转运时间分别为(213.25±21.82),(133.25±19.75),(210.38±22.30),(143.13±16.29),(159.25±24.72)和(193.13±18.14) s;这6组的中央区域活动路程分别为(454.65±187.12),(21.92±30.16),(425.43±92.34),(35.52±39.56),(196.18±70.44)和(316.78±99.11) cm;这6组的5-HT含量分别为(34.40±4.49),(57.10±9.96),(35.35±7.79),(50.19±4.82),(44.51±7.24)和(36.26±5.68) ng·mL-1;这6组的BDNF含量分别为(29.30±11.73),(64.31±27.34),(34.34±15.06),(52.19±12.54),(48.57±20.39)和(42.46±20.54) pg·mL-1;这6组的5-HT3A基因表达量分别为1.00±0.41,5.29±0.96,1.38±0.37,4.24±0.83,3.47±0.96和1.53±0.84;这6组的BDNF基因表达量分别为1.00±0.33,3.25±0.83,1.32±0.36,2.62±0.76,2.37±0.45和1.69±0.92。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);阳性药对照组、高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LMWP可缓解IBS-D小鼠的内脏高敏感、结肠转运过快及焦虑抑郁样行为,作用机制可能与降低5-HT与BDNF水平相关。     

罗仙子提取物对小鼠脾淋巴细胞的体外增殖及CD4~+/CD8~+比例的影响

目的研究罗仙子提取物(housefly maggots extracts,HME)对正常小鼠脾淋巴细胞的体外增殖,以及对小鼠淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比例的影响。方法不同浓度的罗仙子提取物对刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)体外处理的小鼠脾T淋巴细胞作用,初步确定其发挥作用的最佳浓度。采用MTT法检测罗仙子提取物在不同的时间点对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,运用流式细胞仪检测细胞周期的分布以及CD4+/CD8+比例。结果罗仙子提取物浓度为40μg/mL,作用48h后,能明显促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖,并且能降低G0/G1期细胞的百分比以及升高S期和G2/M期细胞的百分比,并以48 h效果最明显。能使CD4+、CD4+/CD8+比例降低。结论罗仙子可能通过免疫调节作用影响动脉粥样硬化。     

荧光定量PCR检测GⅡ型扎幌样病毒方法的建立

[目的]建立贝类中GⅡ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。[方法]通过用PEG6000对贝类中GⅡ型扎幌样病毒进行浓缩,用Trizol法提取病毒RNA,设计出针对GⅡ型扎幌样病毒保守序列的通用引物与探针,建立GⅡ型扎幌样病毒荧光定量PCR检测方法。[结果]此荧光定量PCR方法对贝类中GⅡ型扎幌样病毒检测呈现高度特异性,与诺瓦克样病毒、GⅠ型扎幌样病毒等无交叉反应,最低检出限可达102拷贝/μl,线性范围为102～106拷贝,标准曲线的相关系数为0.9993。[结论]本研究建立了贝类中GⅡ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。     

基于微生物-代谢组学研究尿毒清颗粒改善大鼠慢性肾病的作用及机制

采用微生物组学结合代谢组学的方法,研究尿毒清颗粒干预SD大鼠慢性肾脏疾病的作用,并初步探究其作用机制。采用腺嘌呤诱导的方法制备SD大鼠慢性肾脏疾病模型,模型构建成功后,将动物随机分为阴性对照组和尿毒清颗粒处理组,同时设立正常对照组,每组8只。给药4周后,分别收取动物粪便及血清,采用16S rDNA测序分析肠道微生物丰度、多样性以及功能预测;采用LC-MS进行高通量测序检测动物血清代谢物;利用MetPA数据库筛选出慢性肾脏疾病大鼠潜在的生物学标志物,并进行代谢通路的富集分析。Spearman法分析2个组学之间的相关性。结果显示,尿毒清颗粒可有效改善慢性肾脏疾病大鼠体质量减轻、肾脏功能相关生化及外观指标。16S rDNA测序结果表明,尿毒清颗粒可调节慢性肾脏疾病大鼠肠道菌群的多样性和组成;肠道微菌群的改变,影响了氨基酸生物合成和代谢、脂类代谢、碳水化合物代谢等功能代谢途径。LC-MS检测结果显示,相对于阴性对照组,尿毒清颗粒处理组动物有15种代谢物发生逆转,其中有11种潜在标志代谢物显著上调,有4种潜在标志代谢物显著下调;主要涉及5条氨基酸代谢通路,且与肠道菌群的改变具有显著相关性。尿毒清...