体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法：差速贴壁＋阿糖胞苷＋胰酶法

目的:通过细胞形态学观察及生物学特性鉴定,建立一种经济实用的体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法。方法:实验于2006-06在武汉理工大学完成。①阿糖胞苷(Sigma,批号w10562);胎牛血清(杭州四季青产品);胰蛋白酶(Amresco);多聚赖氨酸(Sigma);胶质纤维酸性蛋白,神经生长因子受体蛋白抗体(博士德)。②选取出生3d内的Wistar大鼠5只,乙醇浸泡后断头处死,取嗅球的最外两层,通过1.25g/L胰蛋白酶消化分离嗅鞘细胞,体外原代培养。③采用Nash差速贴壁 阿糖胞苷 胰酶法纯化嗅鞘细胞。培养18h后将未贴壁的细胞悬液转种于另一未涂层的器皿中,再培养36h,重复上述步骤移入0.1g/L多聚赖氨酸包被的塑料培养瓶中进行培养,纯化后的细胞在24h内陆续贴壁,常规培养2d,加入终浓度为2mg/L的阿糖胞苷,作用48h后,换上新的培养基,继续培养1d,弃去培养基,用无钙镁的Hanks液清洗2次,然后用1.25g/L的胰酶消化10min,待细胞突起回缩、胞体变圆时,立刻加入纯血清终止,其血清终浓度为20%,制备单细胞悬液。④倒置显微镜下观察其形态变化,苏木精-伊红染色,同时行神经生长因子受体蛋白和胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色鉴定嗅鞘细胞,并计算嗅鞘细胞阳性百分率。结果:①活细胞形态观察:分离培养的嗅鞘细胞具有双极或多极突起,且突起细长,相互交织。②嗅鞘细胞的苏木精-伊红染色鉴定:细胞呈三角形或梭形,有长的突起,胞浆被染成粉红色,胞核呈蓝紫色,胞核内深染的为核仁,有1～3个核仁。③嗅鞘细胞的胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色鉴定:细胞呈现棕黄色,胞核淡染,阳性细胞成网状连接,胞体多为三角形,有细长突起,阳性率91.5%。④嗅鞘细胞的P75免疫组化染色鉴定:阳性细胞呈绿色,多数细胞染色阳性,阳性率89%。结论:实验所采用的Nash差速贴壁 阿糖胞苷 胰酶法分离纯化培养嗅鞘细胞切实可行,为神经诱导修复材料的研究提供种子细胞。     

亲体肾及造血干细胞联合移植治疗多发性骨髓瘤并发慢性肾功能衰竭

目的:肾功能不全是多发性骨髓瘤并发肾脏疾病的主要表现且决定其预后,探讨1例多发性骨髓瘤并发慢性肾功能衰竭患者行肾及造血干细胞联合移植的治疗体会。方法:南京中医药大学附属医院于2005-04采用肾及造血干细胞联合移植治疗多发性骨髓瘤并发慢性肾功能衰竭患者1例,男性,46岁,经严格的配型及常规检查,发现其胞兄为适合的亲体供者,经供、受者双方同意,结合病情资料并复习文献,先制订出详细治疗方案,然后行亲体肾及造血干细胞联合移植。结果:①供者术后恢复顺利,术后第7天拆线出院,肾功能正常。②受者肾移植术后第3天,血肌酐降至98.2μmol/L,肌酐清除率为45.7mL/min,肾功能恢复正常;干细胞移植术后第13天,查血红蛋白为54g/L、白细胞为4.0×109L-1、中性粒细胞为1.92×109L-1、血小板为30×109L-1,受者造血功能逐步重建,同时抽血行短片段串联重复的嵌合体监测证实受者造血干细胞基因型为完全供者型,说明受者造血功能和免疫功能重建。结论:肾及造血干细胞联合移植治疗多发性骨髓瘤并发慢性肾功能衰竭是一种可行、有效的方法;供、受者的良好配型是移植进行的必备基本条件;另外,术后初期患者处于完全性免疫缺陷状态,故手术后的消毒、隔离措施和抗感染治疗是移植成功的关键。     

肺多发性脑膜瘤1例

患者男性,55岁。因干咳2周就诊。查X线胸片示双肺多发结节。胸部CT示左肺上叶尖后段,下叶外、后基底段,右肺中叶外侧段,下叶背段、外基底段可见多发性小结节影,直径均<1 cm,边界清。颅脑CT及颈、胸、腰椎MRI未见明显异常。行左下肺结节活检术。 病理检查 巨检:活检肺组织3块,大小分别为1.2 cm     

成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者外周血miR-142和miR-143表达

目的探讨外周血miR-142及miR-143与LADA病情的相关性。方法以50例健康体检者为对照组、50例T2DM患者为T2DM组及50例LADA患者为LADA组。分析miR-142及miR-143与LADA病情的相关性。结果 LADA组FBG、2h PBG、Hb A1c及HOMA-β最高,空腹C肽、2h C肽、FINS、2h INS、HOMA-IR、miR-142及miR-143最低(P0.05)。且miR-142、miR-143与FBG、2h PBG、Hb A1c及HOMA-β呈负向直线相关性,与空腹C肽、2h C肽、FINS、2h INS及HOMA-IR呈正向直线相关性(P0.05)。结论 miR-142及miR-143在LADA患者中明显降低,且与LADA病情密切相关。     

二甲双胍联合阿仑膦酸钠治疗骨质疏松症合并2型糖尿病的临床疗效

目的观察二甲双胍联合阿仑膦酸钠对骨质疏松症合并2型糖尿病的影响。方法将120例绝经后骨质疏松症合并2型糖尿病患者随机分为治疗组(n=60)和对照组(n=60)。对照组给予阿仑膦酸钠治疗,治疗组给予阿仑膦酸钠联合二甲双胍治疗,为期治疗6个月。检测治疗后两组患者髋部及腰椎骨密度和视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)评分改变,同时测定血清骨代谢指标骨特异性碱性磷酸酶(bone-specific alkaline phosphatase,B-ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate resistant acid phosphatase-5b,TRACP-5b)水平的变化,记录药物的不良反应。结果治疗前两组的骨密度、骨代谢指标和VAS评分比较没有统计学意义(P0.05)。治疗3个月和6个月后,两组髋部及腰椎密度都有不同程度的升高(P0.05),治疗组的骨密度提高较对照组更为显著(P0.05)。同时,各组血清B-ALP和TRACP-5b水平、VAS评分均降低(P0.05),治疗组的骨代谢指标和VAS评分改善较对照组更为显著(P0.05)。而两组之间的不良反应比较无明显差异(P0.05)。结论二甲双胍增加阿仑膦酸钠治疗骨质疏松症合并2型糖尿病临床疗效显著。     

综合护理对长期卧床的老年患者发生下肢深静脉血栓的预防

目的 探讨综合护理对长期卧床的老年患者发生下肢深静脉血栓的影响.方法 选取2013年6月至2014年9月于本院骨伤科住院治疗的60岁以上患者130例为研究对象,随机分为观察组和对照组,各65例.观察组施行综合护理措施;对照组施行常规护理措施.对两组患者术后下肢静脉血栓的发生情况进行统计分析.结果 观察组中,仅有1例DVT,发生率仅为1.54%;对照组发生DVT 17例,发生率为26.2%.结论 综合护理能够有效地预防长期卧床的老年患者下肢深静脉血栓的发生.     

安静时正常血清钙量与ST段时限的相关性探讨

目的 了解安静时正常血清钙量与ST段时限的相关性。方法 在受检者安静时，记录常规心电图，并测量心电图中ST段时限，在10min内完成肱静脉采取血样，即刻进行血样检验，检验出血清钙的含量。应用散点图初步观察血清钙的含量与ST段时限的相关性，再进行Spearman等级相关分析。结果 Spearman等组相关系数R=0.394，P=0．23，安静时，正常血清钙含量与ST段时限无相关.结论 安静时，正常血清钙含量与ST段时限的比值具个性化现象。     

天麻与钩藤配伍前后对SHR大鼠肾脏相关基因表达的影响

目的:研究天麻与钩藤配伍前后对SHR大鼠肾脏相关基因表达的影响。方法:设立空白、天麻混悬液(0.86 g.kg-1组)、钩藤煎液(1.17 g.kg-1组)、天麻钩藤合煎剂(天麻0.86 g.kg-1+钩藤1.17 g.kg-1)4个组别,连续ig给药10 d后提取肾脏mRNA,与基因芯片进行杂交,经扫描、计算机软件分析后观察配伍前后基因表达的变化。结果:筛选出天麻与钩藤配伍前后在肾脏中的目标基因(target gene)30个。结论:天麻配伍钩藤后,肾脏中调控血脂代谢、G-蛋白偶联受体介导的信号通路以及胰岛素抵抗相关基因的表达发生逆转,提示药对配伍后减弱了天麻对肾脏的相关作用。     

2型糖尿病大鼠的尿液代谢组学改变

目的 通过检测2型糖尿病大鼠尿液代谢谱的变化.探讨代谢组学在糖尿病研究中的应用.方法 SD大鼠高糖高脂饲料喂养6周后,腹腔注射链脲菌素(Streptozotocin,STZ)37 mg/kg建立2型糖尿病模型,动态检测空腹血糖(FBG)变化,检测甘油三酯(TC)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)及胰岛素(INS)水平.分别于造模前、造模后1、2、4、6、8周收集大鼠尿液,采用氯甲酸乙酯(ECF)衍生和气相色谱质谱联用(GC/MS)的方法检测大鼠尿液代谢谱的变化.结果 造模后大鼠FBG持续升高,FFA、TG、TC明显升高,血清INS含量明显降低;造模后,模型组大鼠代谢谱与对照组完全区分,并随时同变化逐渐偏离;比较两组差异,从差异变量中鉴定出10个生物学标记物.结论 高糖高脂喂养联合小剂量STZ造模2型糖尿病大鼠尿液代谢组学发生明显变化,尿液代谢组学在一定程度上反映2型糖尿病大鼠的病理变化.     

针药结合治疗急性胰腺炎临床观察

目的:观察在西医常规治疗基础上结合针灸、中药治疗急性胰腺炎的临床疗效。方法:将38例急性胰腺炎患者按随机数字表法分为治疗组和对照组各19例,对照组采用西医常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用针药结合治疗。结果:2组总有效率比较,差异无显著性意义(P>0.05)。治疗组腹痛、腹胀、恶心呕吐、发热和上腹部压痛等症状、体征的恢复时间,血、尿淀粉酶和白细胞指标复常时间,住院时间和住院费用均少于对照组(P<0.05)。结论:在西医常规治疗基础上加用辨证中药及针刺治疗急性胰腺炎疗效较好。