维甲酸相关孤核受体 α 抗肝纤维化作用研究进展

肝纤维化是肝脏对各种致病因子（相关肝炎病毒、慢性酒精中毒、脂肪性肝炎等）所致的慢性损伤的一种慢性炎性反应过程，     

三七皂苷成分及其影响因素研究进展

三七是我国传统中药材之一,药理作用广泛,临床疗效显著,需求量逐年增加。皂苷是三七的主要药效成分,具有止血散瘀等功效。皂苷含量的高低受部位、品种和产地等因素影响。本文主要对三七皂苷成分在不同部位的分布规律,及品种和产地等因素对其皂苷含量影响进行综述。通过建立规范标准的三七栽培体系,培育高产优质的三七品种,为高含量三七资源的获得提供途径。本文将为三七资源的合理开发利用提供科学依据和参考价值。     

大鼠MIP3基因的电子克隆和特性分析

210．seq是一个在大鼠心肌缺血预适应中表达上调的表达序列标签(expressed sequence tag，EST)，用GENSCAN预测、Blast(Basic local alignment search tool)比对、序列拼接、多序列比对等生物信息学方法克隆了该EST代表的大鼠MIP3基因的cDNA序列。大鼠MIP3基因的开放阅读框为1332bp，起始密码子前同一相位存在一个终止密码子，起始密码子邻近的序列符合Kozak规则；推测编码443个氨基酸，与小鼠和人的MIP3基因ortholog的同源性很高，但是与数据库中其它蛋白质的同源性不高。TMpred分析显示该多肽有一个跨膜区域，氨基端位于膜内。Motifscan分析仅发现一个脯氨酸富集区域。以上结果显示MIP3基因是一个功能未知的新基因。     

四川省川芎栽培现状调查与评价

目的:通过对四川省内5个县23个镇247户的川芎栽培现状进行系统调查,深入了解川芎栽培中重大科学问题和关键技术难题,为川芎规范化栽培提供基础数据。方法:在现有研究基础上,对主产区芎农进行问卷调查和实地测量,综合分析川芎栽培现状。结果:小户种植为主的彭州和什邡使用坝苓种比例为65%,大户种植为主的眉山、邛崃以及正形成大户种植模式的都江堰使用山苓种比例为92%。川芎种植密度和产量在个体间差异大。川芎在眉山和邛崃的生长期比在彭州、什邡和都江堰缩短了30 d左右。川芎施用底肥和春肥的农户约占一半,NPK复合肥投入比例高(> 90%)。川芎的病虫害较少,新产区的病虫害发病率明显低于老产区,除草剂施用比例高达52%的是农资店自配的除草灵1号。栽培成本中人工费用占比最高(37%)。结论:四川省川芎栽培呈现山苓种和坝苓种并重的格局,建议明确山苓种和坝苓种的差异,培育优质苓种;劳动力缺乏导致川芎呈现晚栽早采趋势,应促进川芎机械化研发和生产;加大芎农培训力度,引导增施有机肥,推行规范化药剂施用。     

热休克对心肌细胞中αB-晶状体蛋白移位及表达的影响

采用热休克对新生大鼠心肌细胞进行处理 ,观察αB 晶状体蛋白在细胞内的分布及其表达变化。结果 :①Western blot显示热休克后胞浆中可溶性αB 晶状体蛋白迅速移位至细胞内的不溶性结构中 ,2h左右基本复位 ;②免疫双荧光细胞化学显示热休克导致αB 晶状体蛋白在细胞浆内发生分布变化 ,而HSC70从胞浆向胞核移位 ;③免疫电镜定量分析进一步证实αB 晶状体蛋白在热休克时主要移向Z线及核膜等细胞骨架部位 ;④Northern blot显示热休克诱导心肌细胞αB 晶状体蛋白mRNA的表达增加。热休克处理使αB 晶状体蛋白迅速移位至细胞骨架 ,表明其在心肌预适应早期相中可能发挥保护作用。而αB 晶状体蛋白的诱导表达 ,可能是心肌预适应延迟相保护的重要机制之一。     

心肌缺血预适应诱导表达上调新基因MIP-1和HMIP-2的克隆和特性分析

采用抑制消减杂交技术和ｃＤＮＡ芯片相结合筛选得到了多个大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调新基因的ＥＳＴ片段 ,在此基础上采用生物信息学方法克隆得到了一个大鼠新基因ＭＩＰ 1和一个人类新基因ＨＭＩＰ 2 ,Ｇｅｎｂａｎｋ登录号分别为ＡＹ2 2 175 0和ＡＹ2 2 175 1,并通过ＲＴ ＰＣＲ分别从大鼠脑组织和人类胎盘ｃＤＮＡ文库中扩增出了这两个基因的最大开放阅读框架 (ＯＲＦ) ,经测序证明与电子克隆结果完全一致。这两个基因无论从核酸水平还是从蛋白质水平均与任何已命名基因无整体同源性。其中ＭＩＰ 1定位于染色体 1ｑ12 ,含 5个外显…     

心肌缺血-再灌注反应相关基因研究进展

心肌缺血 再灌注可诱导许多基因表达发生改变 ,如立早基因、抗氧化酶、一氧化氮合酶、凋亡相关基因、生长因子、热休克蛋白、炎症因子、环氧合酶 2等 ,全面了解这些基因表达改变及其意义 ,对于揭示心肌顿抑和缺血预适应现象的分子机制 ,进一步探索治疗心肌缺血 再灌注损伤的分子靶具有重要意义。     

采用蛋白质工程技术将aB晶状体蛋白导入心肌细胞的初步研究

目的采用蛋白质工程技术将aB晶状体蛋白(aB-crystallin,aBC)导入心肌细胞,以深入研究其保护心肌缺血损伤的分子机理,并为将其应用于防治心肌缺血损伤奠定基础.方法将人aBC的全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列(membrane-translocating sequence, MTS)的下游,构建含GST-MTS-aBC融合蛋白基因的原核表达质粒,转染大肠杆菌DH5a.经IPTG诱导表达后,裂解细菌,谷胱甘肽亲和层析分离纯化GST-MTS-aBC融合蛋白,采用Xa因子切除GST,纤维素-DEAE-52离子交换层析分离纯化MTS-aBC.在检测其分子伴娘活性的基础上,采用异硫氰荧光索(FITC)对MTS-aBC进行标记,加入新生大鼠心肌细胞培养基中,采用荧光显微镜观察其在心肌细胞中的分布.结果1.重组的GST-MST-aBC质粒经EcoRI酶切后,可见一4.9kb的载体及690bp的aBC基因插入片段.经测序证实,重组质粒中的GST-MTS-aBC融合蛋白的序列处于同一阅读框架. 2.GST-MTS-aBC原核表达质粒导入DH5a,阳性克隆经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示50kD的GST-MTS-aBC诱导表达带.用谷胱甘肽亲和层析能分离该诱导表达组分.分离的GST-MTS-aBC被Xa因子切成二段,其一为23kD的MTS-aBC另一为26kD的GST.Western免疫印迹分析证实,GST-MTS-aBC及MTS-aBC均能为人aBC抗体识别.3.MTS-aBC能使变性聚集的肌动蛋白重新解聚,其分子伴娘功能与HSP25大小相当.FITC标记的MTS-aBC能进入心肌细胞中,而同样标记的aBC及牛血清白蛋白(BSA)均不能进入细胞.讨论本研究将12个氨基酸残基组成的具有膜通透能力的MTS的碱基顺序与aBC的全长cDNA序列融合,在大肠杆菌中表达出了MTS-aBC.这种融合蛋白不但具有aBC的分子伴娘功能,而且能导入心肌细胞.结论1.克隆、表达并纯化了具有分子伴娘活性的MTS-aBC.借助MTS的介导作用,能将aBC导入心肌细跑.2.aBC导入心肌细胞的成功,为进一步研究其保护心肌缺血损伤的分子机理提供了研究工具,并为将其应用于防治心肌缺血损伤奠定了基础.     

用生物信息学方法克隆大鼠核不均一核蛋白A2/B1基因

采用外显子预测、序列匹配、序列拼接等生物信息学方法电子克隆了一个在大鼠心肌缺血预适应中表达上调的表达序列标签所代表的核不均一核蛋白A2／B1基因，用逆转录聚合酶链反应证实了该基因的开放阅读框。它的开放阅读框为1026bp，由10个外显子构成，推测编码341个氨基酸。它的编码区与人和小鼠的核不均一核蛋白A2／B1基因分别有92％和95％的一致性，蛋白质序列的一致性几乎为100％。这些结果表明核不均一核蛋白A2／B1基因在不同物种间高度保守，它在大鼠心肌缺血预适应中表达上调，可能在缺血预适应的内源性保护机制中发挥了重要的作用。     

川芎种质鉴定标记开发和系统发育研究

目的基于藁本属Ligusticum叶绿体基因组高频插入缺失区域开发InDel标记,同时结合通用条形码对道地川芎及其常用混伪品进行种质鉴定和系统发育研究。方法通过8个DNA通用条形码ycf1、matK、ITS2、rpoC1、rbcL、rpoB、trnK、psbA-trnH序列片段对采集的26个川芎样品及其常用混伪品进行了扩增和测序,采用了遗传距离统计法、barcoding gap分析法和构建系统发育树法进行亲缘关系和系统发育研究。同时利用InDel分子标记,采用构建进化树法对道地川芎及其混伪品物种进行分子鉴定。结果 rbcL片段保守位点最多(97.32%),且GC含量最高(44.9%)。rbcL+rpoB片段具有最小的平均种内遗传距离(0.002 5),psbA-trnH片段具有最大的平均种间遗传距离(0.429 2)。trnK片段和rbcL+rpoB片段具有最高的种间变异,psbA-trnH片段的"barcodinggap"区重叠度最小。采用的8对DNA通用条形码无法准确地鉴定道地川芎药材与其他混伪品物种。InDel分子标记的聚类分析中,24对InDel引物中的4对引物组合能准确地鉴定出道地川芎,并将道地川芎及其混伪品物种聚类为4个分支,其中一个分支为采集的道地川产川芎药材。结论 InDel标记对道地川芎及其常用混伪品的鉴定能力高于通用条形码。对于传统的通用DNA条形码,由于遗传成分差异大,无法区分川芎及其常用混伪品。新开发出的InDel分子标记可以有效地鉴定道地川芎及其常用混伪品,从分子水平上为川芎道地性研究提供有效手段。