用兔抗人分化抑制因子3抗体建立双抗体夹心ELISA法及初步临床应用

目的 制备兔抗人分化抑制因子3（Id3）多克隆抗体,建立检测血清Id3的双抗体夹心ELISA技术。 方法 用纯化的Id3重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗Id3多克隆抗体,通过多肽亲和层析柱去除非特异性成分,免疫细胞化学染色、免疫双向扩散及间接ELISA法检测抗体特异性和效价。制备辣根过氧化物酶（HRP）标记抗Id3,以纯化Id3重组蛋白为标准抗原制备标准曲线,建立定量检测人Id3的双抗体夹心ELISA法。 结果 免疫细胞化学染色显示,制备的兔抗血清能与人Id3蛋白特异性结合,所得兔抗血清效价分别为1 ∶ 8（琼脂双向扩散）和1 ∶ 8 000（ELISA）。ELISA法的包被抗体和酶标记抗体的工作浓度分别为5 μg/ml和1 ∶ 4 000,标准曲线为Y= 0.079 3+0.018 8X,r=0.997。检测线性范围为2～64 U/ml,平均回收率为98.2%, 批内平均变异系数（CV）为4.4%, 批间平均CV为7.2%。该方法可用于人血清Id3含量的检测。 结论 兔抗人Id3多克隆抗体的制备及夹心ELISA法的建立为今后研究Id3蛋白的功能及其在临床和基础医学中的应用奠定了基础。     

抗CCP抗体斑点免疫印迹试验测定方法的建立与初步应用

目的建立检测抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体的斑点免疫印迹试验，探讨其在类风湿关节炎（RA）疾病诊断中的价值。方法通过方阵滴定法选择斑点免疫印迹试验检测抗CCP抗体的最佳实验条件，并用该法检测RA、其他疾病及健康人血清，同时与自行建立的ELLSA法及欧蒙试剂抗CCP抗体检测结果作对比分析。结果斑点免疫印迹试验检测抗CCP抗体对RA的诊断敏感性为52％，特异性为94％，并具有较好的方法学稳定性和特异性。在48例被诊断为RA患者中有25椤甘抗CCP抗体阳性，显著高于其他疾病组和正常对照组（P〈0．01）。对比研究结果表明，该法与基于RSA-CCP固相模式建立的ELISA法具有高度的相关性（X^2=131．712）和一致性（Kappa=0．771，P〈0．001），与欧蒙试剂检测结果亦具有高度的相关性（X^2=24．147）和很好的一致性（Kappa=0．714，P〈0．001）。结论成功建立了抗CCP抗体检测的斑点免疫印迹试验，实验结果稳定，特异，可靠，值得进一步推广和研究。     

南京地区过敏性疾病患者特异性变应原检测结果报告

目的探讨引起南京地区居民过敏性疾病患者变应原的流行分布状况。方法采用免疫印迹法对420例过敏性疾病患者进行食物和吸入性变应原特异性IgE（sIgE）检测,同时对其血清总IgE水平进行检测和结果分析。结果在所测384例食物组样本中,特异性变应原以水果组合阳性率最高（为19.5%）,紧随其后者依次为海鲜组合17.7%、虾9.8%、鲑鱼8.9%、花生8.6%等。而在327例吸入组样本中,特异性变应原以猫狗阳性率最高（为25.4%）、其下依次为蚕丝22.6%、粉尘螨（粮尘为主）13.5%、屋尘螨（床尘为主）12.8%等。在血清总IgE升高者中,发现有76.2%（64/84）的患者可检出1种或1种以上sIgE。统计分析结果表明,南京地区最常见的过敏性疾病发生时段多在夏秋季的6-10月和冬季的11-12月份。结论各种变应原中,水果组合、海鲜组合、虾、鲑鱼、花生、猫狗、蚕丝、粉尘螨、屋尘螨为南京地区过敏性疾病的主要致敏原。     

类风湿关节炎患者血清瓜氨酸化蛋白差异表达分析

目的血清抗环瓜氨酸化蛋白抗体(抗CCP抗体)检测对类风湿关节炎(RA)诊断具有高度的敏感性及特异性,是一种RA早期诊断指标。尽管抗体已被发现多年,但是其所针对的天然靶抗原仍不十分清楚。本试验通过合成兔抗CCP抗体免疫亲和层析柱,提取RA患者及健康人血清中瓜氨酸化相关抗原,并通过蛋白质组学技术对提取的具有差异性的瓜氨酸化蛋白进行鉴定。方法抗CCP抗体阳性血清取自2010年12月至2011年7月本院门诊及住院RA患者,正常血清取自健康献血者及体检者。体外人工合成CCP肽(HQCHQESTXGRSRGRCGRSGS),制备并纯化兔抗CCP多克隆抗体。将纯化的兔抗CCP抗体与高流速NHs-活化琼脂糖偶联制作免疫亲和柱,提取RA患者抗CCP抗体阳性血清及正常血清中的瓜氨酸化蛋白质,通过二维电泳将提取蛋白分离,分析并筛选二者有差异蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行质谱分析进行蛋白鉴定。结果通过兔抗CCP抗体-高流速NHs-活化琼脂糖免疫亲和层析纯化、二维电泳和基质辅助激光解吸电离飞行质谱分析,获得了差异性及重复性很好的差异蛋白图谱,将RA患者ACCP阳性血清和正常血清亲和层析提取蛋白2-D图谱比对发现,RA提取蛋白二维凝胶电泳图谱中共312蛋白点,正常血清提取蛋白有274个蛋白点,其中有166个具有差异表达的蛋白点。在差异蛋白点中,有101个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达上调,65个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达下调。52个蛋白点RA患者血清提取蛋白中表达而在正常血清提取蛋白缺失,16种蛋白在RA患者血清提取蛋白中表达而在正常血清提取蛋白缺失。挑选其中差异明显并且灰度值较高的的51个点进行鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出多种可能与RA发病相关的蛋白。在选取的51个蛋白点中,有30个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达上调,21个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达下调。结论在RA患者与健康者血清蛋白中发现部分差异表达的瓜氨酸化蛋白,这些差异蛋白可能成为涉及RA发病机制的自身抗原,为进一步研究RA的发病机制奠定了基础。     

南京地区变应性鼻炎患者吸入性变应原特异性IgE和总IgE的检测分析

目的 检测和分析不同年龄变应性鼻炎(AR)患者血清总IgE水平和吸入性变应原分布特点.方法 采用速率散射比浊法和免疫印迹法分别检测351例(三组)不同年龄(4～16岁,17～40岁和≥41岁)患者血清中总IgE水平和吸入性变应原特异性IgE抗体.结果 4～16岁AR患者血清总IgE增高率(77.31％)及水平(488.31±341.41 IU/ml)显著高于其他两组患者结果(63.1％,368.42±336.62 IU/ml,P＜0.01和40.0％,287.54±315.06 IU/ml,P＜0.001).351例AR患者特异性IgE抗体-吸入性变应原分布率依次为:屋尘螨(81.48％)、粉尘螨(81.2％)、动物毛发(猫/狗)(38.46％)、蟑螂(25.36％)、花粉组合(13.11％),艾蒿(11.97％)、矮豚草(11.11％)、悬铃树(7.12％)、霉菌组合(6.27％)和桦树(1.14％).结论 少儿患者组血清中总IgE水平和对粉尘螨、屋尘螨、动物毛发过敏的比例显著升高.40岁以上患者组免疫功能减低可能影响总IgE产生.诱发该地区不同年龄组AR的主要过敏原(阳性率超过20％以上)是粉尘螨、屋尘螨、动物毛发(猫/狗)和蟑螂.     

健康老人和老年病患者抗心磷脂抗体的测定

自牛心中提取心磷脂，建立了检测抗心磷脂自身抗体（ACA）的间接ELISA法。检测结果表明，健康人ACA检出率随年龄增高有升高趋势，75岁以上老人最为显著，女性尤甚。高血压病、冠心病、脑梗塞、风心瓣膜病、类风湿性关节炎、糖尿病的老年患者，ACA的检出率均高于年龄匹配的健康对照组，但仅冠心病、风心瓣膜病、类风湿关节炎患者有统计学意义（P＜0．01）。未发现ACA阳性者与阴性者在临床表现上有何显著不同。     

双抗体夹心一步法检测前列腺特异抗原及应用的评价

用聚乙二醇、葡聚糖凝胶（ＰＥＧ、Ｓｅｐｈａｄｅｘ）两步法提取精浆前列腺特异抗原（ＰＳＡ），建立了一步检测血清ＰＳＡ的ＥＬＩＳＡ法及正常参考值范围。经５８例临床标本及９５例正常男性血清ＰＳＡ测定，对前列腺癌诊断的敏感性和特异性分别为１００％和９４．２％；６０岁以下和６０岁以上的男性血清ＰＳＡ临界值分别为３．４μｇ／Ｌ和４．６μｇ／Ｌ。表明年龄因素对ＰＳＡ测定有较大影响，在判断测定结果时必须加以考虑。     

反复自然流产患者血浆前列环素和血栓素水平及其与抗心磷脂抗…

用ＲＩＡ法检测了４６例不明原因的反复自然流产（ＲＳＡ）患者血浆６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ和ＴＸＢ２水平，并对其与抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）的关系进行了研究。结果表明，ＲＳＡ患者有一定程度的血栓素升高和前列环素的降低，其中尤以ＡＣＡ阳性者更为明显，Ｔ／Ｋ比值较对照组显著增高（Ｐ〈０．０１）。体外实验尚未发现ＡＣＡ对血小板释放ＴＸＡ２有明显的促进作用，对其原因也进行了分析。本文还就ＡＣＡ阳性患者血浆ＴＸＢ２     

肝细胞刺激物质及其自身抗体与特异性免疫复合物的测定与研究

从人胎肝中提取出肝细胞刺激物（ＨＳＳ）用ＥＬＩＳＡ方法分别对肝病患者及自身免疫病，心血管病及慢性肾病血清中细胞刺激物质的含量，抗人肝细胞激物（ＨＳＳ－Ａｂ）及其人肝细胞的刺激物－抗人肝细胞刺激物特异免疫复合物（ＨＳＳ－ＩＣ）进行测定。结果表明丙型肝炎患者血清中ＨＳＳ含量，ＨＳＳ－Ａｂ和ＨＳＳ－ＩＣ阳性率均高于其它对照组。     

C3d及荷C3d免疫复合物的测定与意义

补体在激活剂(activators)如抗原抗体复合物(IC)、C-反应蛋白、葡萄球菌A蛋白、聚合阴离子(polyanions)以及某些细菌、病毒激活下,可经传统或旁路途径活化。C3被C3转化酶(C-42,C——3bBb)裂解成C3a、C3b片段,在H因子协同下,C3b进一步被I因子裂解成C3c、C3f、C3dg,后者又被蛋白水解酶水解成C3d、C3g。血清中C3d含量可反映补体活化程度。由于补体被IC激活后,C3d可以共价键结合于IC上,因而IC上荷有C3d是该种IC可激活补体的标志。鉴于补体的活化,IC特别是激活补体的IC在组织中的沉着具有重要的病理生理意义,并在某些疾病的发病机…