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融合表达Ag85B-ESAT6的结核分枝杆菌真核表达载体的构建及其免疫原性 总被引:6,自引:3,他引:3
目的: 构建融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)分泌蛋白Ag85B-ESAT6真核表达载体,研究该重组载体在体外的表达和在小鼠体内诱生体液免疫应答的能力. 方法: 设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物,采用PCR的方法从MTB毒株H37Rv-DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段,将片段分别与pGEM-T-easy载体连接后测序. 将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入真核表达载体pcDNA3,挑选出阳性克隆,分别命名为AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF,将重组质粒电转CHO细胞,RT-PCR检测融合蛋白mRNA的表达,间接免疫荧光测定CHO细胞内融合蛋白的表达;用重组质粒免疫BALB/c小鼠,ELISA测定特异性抗体的滴度. 结果: PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与GenBank报道的一致. RT-PCR可检测融合基因转录出mRNA,转染重组质粒的CHO细胞内有较强的免疫荧光,AZ-pcDNA3-EF质粒免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶ 1000,EZ-pcDNA3-AF质粒免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶ 1500. 结论: Ag85B和ESAT6融合基因真核表达载体构建成功,有望为结核病的预防提供有效的基因疫苗. 相似文献
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结核分枝杆菌Rv2450基因的克隆、表达及纯化 总被引:4,自引:1,他引:3
目的:克隆结核分枝杆菌(Mtb)Rv2450基因,序列测定正确后进行融合表达、纯化.方法:采用聚合酶链反应(PCR)从Mtb H37Rv基因组中扩增出Rv2450编码基因,序列测定正确后,亚克隆到融合表达载体pPro-EX HT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达带6个组氨酸残基的Rv2450蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化.结果:得到融合6个组氨酸残基的Rv2450蛋白纯度大于90%.结论:构建了Mtb Rv2450基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白. 相似文献
64.
结核分枝杆菌furB基因的克隆、表达和纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的: 从H37Rv基因组中扩增furB并高效表达和纯化. 方法: 用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增furB序列,将其与pGEM-T-Easy载体连接转化E.coli DH5α,构建重组克隆载体pGEM-T-Easy/furB,测序正确后将目的基因片断克隆入pQE-80L原核表达载体并转化E.coli DH5α,IPTG诱导目的蛋白表达. 经Western blot鉴定目的基因与(His)6融合表达,将已表达的蛋白质通过Ni2 -NTA亲和色谱柱进行纯化. 结果: PCR得到结核分枝杆菌furB,测序结果与Genbank中报道的完全一致. SDS-PAGE显示,在Mr为15.0×103处有相应的蛋白质表达条带,Western blot鉴定为(His)6融合表达蛋白. 经Ni2 -NTA亲和色谱柱进行纯化后可得到纯化的蛋白. 结论: 成功克隆了铁调节蛋白基因furB序列,并在E.coli DH5α高效表达,亲和层析后获得了纯化目的蛋白. 相似文献
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目的通过对上海市七宝镇健康驿道的评估,探讨健康驿道建设的标准化方案。方法采用观察法对七宝镇的4条健康驿道和3条准健康驿道进行实地观察,并通过拦截式调查,对177名居民进行问卷调查。结果健康驿道整体情况优于准健康驿道。使用者以中、老年人为主,分别占58.8%和33.0%,男性比女性稍少;使用时间方面,工作日稍少于休息日,早上时段最多,占41.6%。使用人次与照明、可用性和清洁情况以及活动组织情况均呈正相关。根据观察法和问卷调查的结果,提出社区健康驿道标准化建设方案的初步设想。结论健康驿道作为群众性的社区健身设施具有一定的推广价值,结合社区实际情况,以标准化方案作为参考,有利于建设高质量的社区健康驿道。 相似文献
66.
高血压性心脏病患者血浆脂联素水平的变化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨高血压性心脏病患者血浆脂联素水平的变化,为早期预防高血压心脏靶器官损害提供理论依据。方法选择2007年10月至2008年5月在徐州市中心医院门诊或心内科住院的55例原发性高血压患者,分为两组:高血压组30例,高血压心脏病组25例。对照组为同期该院体检中心健康体健者40例。采用酶联免疫吸附法测定血浆脂联素含量。结果血浆脂联索:高血压组(1050±310)ng/ml显著低于正常组(2050±450)ng/ml(P〈0.01),高血压心脏病组(650±136)ng/ml显著低于高血压组(P〈0.01)与正常组(P〈0.01)。结论血浆脂联素水平的变化与原发性高血压的病情程度密切相关。 相似文献
67.
68.
目的:运用品管圈模式降低静脉用药调配中心药品破损率,并对其进行效果评价。方法:组成质量管理小组,对收集的药品破损记录进行全面分析,通过柏拉图、鱼骨图等方法确定要因,制定改善对策并严格实施,评价成果并进行对策标准化。结果:通过落实7项改善对策,药品破损率由原来的1.399‰降低至0.698‰,差异具有统计学意义(χ2=29.87,P < 0.001),进步率达到50.11%;圈员各方面能力素质得到提升,以QCC手法运用、决策执行能力以及沟通协调能力提升最为明显。结论:品管圈模式对于降低静脉用药调配中心药品破损率,提高静脉成品输液质量效果明显,建议推广。 相似文献
69.
患者男,22岁,于1998年开始有怕热、多汗、心悸,查甲状腺激素水平增高,诊断为"甲状腺功能亢进症(甲亢)",一直口服"甲巯咪唑".2006年起常感下肢乏力,于2006年7月第一次就诊,查血钾为1.8 mmol/L,游离三碘甲腺原氨酸(FT3)9.43 pmol/L,游离甲状腺素(FT4)25.18 pmol/L,促甲状腺素(TSH)0.01 mU/L,TGAb 71%,TPOAb 60%,诊断为"甲亢、低钾血症",予以"甲巯咪唑"口服,静脉及口服补钾后症状改善,血钾升至3.7 mmol/L.病程中经常有下肢乏力感.2007年4月因低钾血症第二次就诊,查血钾为1.8~2.4 mmol/L,CO2CP 29.2~31.0 mmol/L,血钠140~141 mmol/L,血氯90.6~93.2 mmol/L,血镁0.49~0.53 mmol/L,血钙2.57~2.84mmol/L,血磷1.33 mmol/L,尿常规pH值7.0~8.0. 相似文献
70.
目的:探讨Atf3在大鼠妊娠期胰岛β细胞中的表达及其对体外催乳素作用下INS-1细胞增殖的影响.方法:运用RT-PCR,Real-time PCR和Western blotting检测大鼠妊娠期Atf3 mRNA及蛋白的表达;MTF法测定不同浓度催乳素作用下INS-1细胞的增殖情况;RT-PCR检测催乳素作用不同时间后INS-1细胞Atf3 mRNA的表达;Western blotting检测相应蛋白表达.结果:与正常未孕组相比,孕10.5天组Atf3 mRNA表达明显增强,孕14.5天时降至正常未孕组水平.Atf3蛋白在孕期表达亦呈一过性增强,于孕10.5天达高峰.体外不同浓度催乳素(50~1 000 ng/mb作用24 h后,INS-1细胞增殖显著增加,且呈浓度依赖性.200 ng/ml催乳素作用3 h,Aft3 mRNA表达开始增加,6 h达高峰,其后又复降低;蛋白表达则从6 h开始上调,12 h显著增加,一直持续至24 h.结论:转录因子Atf3在大鼠妊娠期表达一过性增强,且时相上早于胰岛增殖的高峰(孕14.5天),提示它可能与胰岛再生相关.另外,催乳素可促进INS-1细胞增殖,并伴随Atf3表达的相应增加,提示Atf3在催乳素介导的细胞增殖效应中发挥重要作用,且于早期即启动. 相似文献