蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10纯化及生物学功能研究

蒙古黄芪病程相关蛋白(Astragalus membranaceus pathogenesis-related protein 10,AmPR-10)在蒙古黄芪遭遇环境压力和病原体侵袭时大量表达,该研究旨在探讨AmPR-10的生物学功能。蒙古黄芪干燥根经机械粉碎后缓冲液浸提得到蒙古黄芪总蛋白粗提液,总蛋白粗提液经阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱纯化后得到电泳纯AmPR-10。以不同RNA为底物,通过检测260 nm吸光度分析核酸酶活性,结果显示AmPR-10对Yeast tRNA,Yeast RNA,Poly(A)和Poly(C)均表现核酸酶活性,且其最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为78,EDTA对其活性无影响,Mg^2+对其活性具有激活作用,Co^2+,Ca^2+和Zn^2+对其活性具有抑制作。AmPR-10与已知核酸酶无序列同源性,可能是一种新的核酸酶。采用Lineweaver-Burk双倒数作图法分析AmPR-10木瓜蛋白酶抑制活性,结果显示AmPR-10是木瓜蛋白酶的非竞争性抑制剂。AmPR-10可能通过抑制半胱氨酸酶活性在蒙古黄芪对抗环境压力和抵御病原体侵袭的过程中发挥重要作用。     

中药黄芪蛋白抗肝癌细胞HepG2作用机制

本文考察了黄芪蛋白对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用,结合转录组学探讨黄芪蛋白抗肿瘤作用机制。黄芪干燥根部经硫酸铵沉淀,得到分子质量大小不一的黄芪蛋白(Huang Qi protein, HQP)。通过血球计数法检测黄芪蛋白对肿瘤细胞HepG2的影响及其毒性作用;结合流式细胞术和Hoechst/propidium iodide (PI)双染测定细胞死亡情况; Western blot测定坏死标志蛋白受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶1 (RIP1);将对照组与加药组RNA进行转录组测序,对RNA测序(RNA-seq)结果进行差异表达基因分析; qRT-PCR验证候选基因mRNA相对表达量。结果表明,随着HQP浓度增加,对肝癌细胞HepG2增殖抑制作用愈加明显,当HQP质量浓度为100μg·mL-1时,细胞坏死率增加到18.78%,同时在显微镜下观察到PI单染的红色坏死细胞增多, Western blot结果显示RIP1蛋白水平增加。RNA-seq结果分析得到2.6万个相关基因受HQP调控,其中979个基因受调控较明显。KEGG分析发现部分差异表达基因与p53信号通路相关, qRT-PCR...     

酵母菌发酵黄芪的抑菌作用初探

目的:研究黄芪酵母菌发酵液的体外、体内抑菌活性。方法:体外实验采用滤纸片扩散法,通过测定抑菌圈直径考察黄芪发酵液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、普通变形杆菌的体外抑菌活性;采用2倍稀释法检测黄芪发酵液对各致病菌的最小抑菌浓度(MIC);体内实验以金黄色葡萄球菌为指示菌种,观察黄芪酵母菌发酵液不同浓度(0.1 g/mL,1.0 g/mL,2.5 g/mL)灌胃给药7 d对感染小鼠的死亡率。结果:体外实验结果显示:黄芪发酵液对5种致病菌均有一定抑制作用,黄芪发酵液高浓度组对致病菌具有较强的抑制作用;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、普通变形杆菌的最小抑菌浓度分别为0.313 g/mL,0.078 g/mL,0.625 g/mL,0.313 g/mL,0.156 g/mL;体内实验研究表明:黄芪发酵液低、中、高3个浓度组均能显著降低金黄色葡萄球菌引起的小鼠死亡率,死亡率分别是65%,45%,30%,与细菌对照组死亡率90%比较,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:黄芪酵母菌发酵液体外、体内对受试菌均有一定抑制作用。     

高等中医药院校实验教学模式改革的实践与思考

高等医学院校的实验室是培养“宽口径、厚基础、强能力、高素质”高级医学人才的重要基地。实验教学是医学教育的重要环节。近几年，我国高等教育的快速发展和医学教育模式的转变，以及学科间的相互交叉渗透，对高等中医药院校实验教学提出了更高的要求。高校办学规模的迅速扩大造成实验教学任务日益繁重，使传统单学科实验室封闭、分散、低效的管理体制和管理模式远远不能适应教育教学新形势的需要。中医药院校因其课程设置有别于西医院校，实验课所占比例也远小于西医院校（因许多中医课程目前还未开设实验教学），而且大多数实验课都集中…     

黄毛橐吾三萜类成分研究

目的:对菊科橐吾属植物黄毛橐吾Ligularia xanthotricha进行化学成分研究。方法:通过柱色谱(CC)、制备薄层色谱(PTLC)及重结晶等技术进行分离纯化,利用理化性质及IR,UV,MS,1D/2DNMR等现代波谱技术并结合文献鉴定其结构。结果:分离并鉴定出7个三萜类化合物:羽扇豆醇(lupeol,1),羽扇豆醇棕榈酸酯(lu-peol palmitate,2),3,28-二羟基羽扇豆醇(3,28-dihydroxyllupeol,3),桦木酸(betulinic acid,4),蒲公英甾醇(taraxas-terol,5),蒲公英甾醇棕榈酸酯(taraxasteryl palmitat,6),蒲公英甾醇乙酰酯(taraxasteryl acetate,7)。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨华良姜素抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的 观察华良姜素的体外抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测华良姜素（0、5、10、25、50、100、150、300 μmol·L^-1）对HepG2细胞不同时间（24、48、72 h）的增殖抑制作用;异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）凋亡试剂盒检测华良姜素（0、3、15、75 μmol·L^-1）对HepG2细胞的凋亡作用;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测华良姜素对HepG2细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响;转录组学分析华良姜素（15 μmol·L^-1）对HepG2细胞处理后基因差异表达与信号通路改变情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）验证差异基因［TEK、血小板源性生长因子α受体（PDGFRA）、脾酪氨酸激酶（SYK）、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基G肽（PIK3CG）、Janus激酶3（JAK3）、膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2（MAGI2）］mRNA相对表达。结果 与空白组比较,华良姜素组HepG2细胞的增殖降低（P<0.05,P<0.01）;凋亡率升高（P<0.01）;Bax蛋白表达水平升高（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2的蛋白表达水平降低（P<0.01）;转录测序得到59 000个受调控的表达基因,受调控显著差异表达基因125个,其中表达上调差异基因47个,表达下调差异基因74个,京都基因和基因组数据库（KEGG）分析显示,加华良姜素后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中与凋亡相关的差异基因变化较大。与空白组比较,华良姜素组（15 μmol·L^-1）TEK、PDGFRA、SYK、PIK3CG、JAK3、MAGI2的mRNA 表达水平降低（P<0.01）。结论 采用体外细胞学实验研究华良姜素能抑制HepG2细胞增殖,初步验证其凋亡,可能是影响了PI3K/Akt信号通路中部分差异基因的表达。为后续华良姜素抗肿瘤提供实验基础,同时有助于促进黄酮类化合物的开发利用及潜在的应用价值。     

风湿宁胶囊中挥发油的提取及包合工艺优选

目的:优选风湿宁胶囊中挥发油的提取与包合工艺。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,以提取量为指标,通过单因素试验考察加水量、提取时间对提取工艺的影响;采用饱和水溶液法包合挥发油,以包合率为指标,通过正交试验考察挥发油与β-CD的比例、包合时间及包合温度对包合工艺的影响。结果:最佳提取工艺为加14倍量水提取4 h;最佳包合工艺为挥发油与β-环糊精的比例1∶8,包合温度40℃,包合时间3 h。结论:优选的挥发油提取与包合工艺条件稳定可行。     

不同溶剂提取对青翘、老翘主要成分含量测定的影响

目的:探讨不同溶剂提取对青翘、老翘中主要成分连翘酯苷、连翘苷、芦丁含量的影响,为临床制药提供依据。方法:采用水、乙醇为溶剂连续回流提取青翘、老翘中主要成分,HPLC法分析连翘酯苷、连翘苷、芦丁的含量。结果:以乙醇为溶剂提取出的连翘酯苷、连翘苷、芦丁的含量高于水提取的含量;同种溶剂提取,青翘中主要成分含量高于老翘。结论:不同溶剂提取对连翘中主要成分有影响。     

黄芪糖蛋白的分离纯化及其理化性质、组成成分分析

目的： 提取分离、纯化具有免疫抑制活性的黄芪糖蛋白（AmGP-2）并考察其理化性质、组成成分。 方法： 黄芪经水浸提,盐析分离,sevage试剂脱游离蛋白等方法提取糖蛋白,采用阴离子色谱柱和凝胶色谱柱进行纯化。通过苯酚-硫酸法、BCA、Molish试验、茚三酮反应、气相色谱分析、氨基酸分析、SDS-PAGE、UV、IR、β-消去反应等分析黄芪糖蛋白的理化性质及组成成分。 结果： AmGP-2易溶于水,等电点约4.7,蛋白质、糖类成分质量分数依次为56.7%,29.3%,相对分子质量约31 kDa;含有18种氨基酸,其中天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸含量较高;糖链部分含有阿拉伯糖、葡萄糖及2种未确定的单糖。 结论： AmGP-2具有显著的免疫抑制活性,为中药免疫抑制剂的开发提供参考。     

黄芪糖蛋白对T淋巴细胞增殖活性的影响

目的：探讨黄芪糖蛋白（HQGP）对T淋巴细胞增殖与给药时间的关系、T淋巴细胞增殖与活化程度的关系,以及对双向混合淋巴反应的影响。方法：体外培养小鼠脾细胞,MTT法测定在不同时间给予一定浓度HQGP、给予相同浓度HQGP和不同浓度ConA刺激,双向混合淋巴反应对T细胞增殖的影响。结果：HQGP在不同时间对ConA刺激的T淋巴细胞增殖均有抑制作用,但培养12h给药的抑制作用最强;其抑制作用与T细胞的活化程度无相关性;能明显抑制双向混合淋巴反应,并呈剂量依赖性。结论：在体外实验中,HQGP对小鼠脾淋巴细胞增殖具有免疫抑制活性,且与活化程度无相关性。