大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外膜蛋白与耐药机制的研究进展

细菌的膜孔蛋白及其形成的孔道是细菌与外界交流的主要途径,也是抗生素透过细菌细胞膜的重要通道。细菌膜孔蛋白合成降低或膜孔蛋白缺失可阻碍抗生素进入细菌,从而引起细菌对抗生素耐药。在细菌的耐药机制研究方面,膜孔蛋白的作用日益受到关注,文章从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌入手,对其膜孔蛋白的特点、构成、合成调控机制及其与细菌耐药的关系进行综述。     

AmpC β-内酰胺酶调控基因ampD的研究进展

近年来,由于广谱抗菌药物的大量应用以及临床治疗学的快速发展,在抗菌药物的选择压力下,不仅细菌的组成发生显著变化,而且细菌耐药性也更趋复杂,最终导致医院感染率上升和耐药菌株增加。自1970年,AmpC β-内酰胺酶（简称AmpC酶）已经成为革兰阴性杆菌耐药的重要原因之一。了解AmpC酶的产生机制对预防、控制医院感染的发生与流行、确定治疗方案有着重要意义。我们对AmpC酶的调控基因ampD做简要的概述,并着重阐述最近几年操纵子中调控基因ampD的研究进展。     

三种AmpC酶表型检测方法比较

目的对革兰阴性菌产AmpC酶的检测方法进行评价,并寻找一种适合临床常规应用的AmpC酶检测方法。方法对39株耐头孢西丁的革兰阴性菌同时进行改良Hodge试验、三维试验、氯唑西林(CLO)双纸片协同试验和ampC基因聚合酶链反应(PCR)检测,比较4种方法的结果。结果39株革兰阴性杆菌中,改良Hodge试验、三维试验和CLO双纸片协同试验检出产AmpC酶的阳性率分别为38.5%、43.6%和28.2%,3种方法AmpC酶检出率的差异无统计学意义(P>0.05)。与PCR结果比较,改良Hodge试验特异性为87%,敏感性为75%;三维试验的特异性为78%,敏感性为75%;CLO双纸片协同试验特异性为87%,敏感性为50%。PCR显示ampC基因阳性率为41%(16/39),对16株阳性菌进行ampC基因测序,测序结果与基因数据库内相应的ampC核酸序列比对发现,同源性均在98%~100%之间。结论改良Hodge试验可作为一种操作快速、简便的筛选试验检测革兰阴性菌产AmpC酶的情况,而CLO双纸片协同试验可作为一种操作简便的排除产AmpC酶试验应用于实验室,但在准确性上低于改良Hodge试验。     

2009年上海地区细菌耐药性监测

Soriano A,Marco F,Martinez JA,et al.Influence of vancomycin minimum inhibitory concentration on the treatment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus bacteremia[J].Clin Infect Dis,2008,46(2):193-200.

Sun W,Chen H,Liu Y,et al,Prevalence and characterization of heterogeneous vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus isolates from 14 cities in China?[J].Antimicrob Agents Chemother,2009,53(9):3642-3649.

Clinical and Laboratory Standads Institute.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing[S].Eighth Informational Supplement,1998,M100-S8.

Clinical and Laboratory Standads Institute.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing[S].Sixteenth Informational Supplement,2006,M100-S16.

Lahey Clinic.Amino acid sequences for TEM,SHV and OXA extended-spectrum and inhibitor-resistant β-lactamases[EB/OL].URL:http://www.lahey.org/studies/webt.asp.

Clinical and Laboratory Standads Institute.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing[S].Twentieth Informational Supplement,2010,M100-S20.

沈继录,朱德妹,吴卫红,等.革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生与细菌耐药性关系的研究[J].中华检验医学杂志,2008,31(4):408-414.

Clinical and Laboratory Standads Institute.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing[S].Twentieth Informational Supplement(June 2010 Update),2010,M100-S20-U.

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错配PCR对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mecI基因点突变的分析

目的建立用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）上mecI常见突变位点的错配聚合酶链反应（PCR）,并用该方法分析上海地区分离MRSA中mecI G→T突变的发生情况。方法用头孢西丁纸片扩散法、mecA基因PCR法检测MRSA,用琼脂稀释法检测细菌的最低抑菌浓度（MIC）,用PCR检测mecI基因,建立错配PCR并用20株mecI基因和mec启动子区分析清楚的菌株对该方法进行评价,用错配PCR分析111株MRSA中mecI基因的突变情况。结果111株mecI阳性的MRSA中,mecI43位突变的5株,mecI202位突变的102株,另有4株MRSA的mecI43位和202位碱基均无突变。结论就其简便易行和准确性而言,错配PCR可用于检测mecI上已知的突变。     

多重PCR检测MRSA的SCCmec基因分型

目的了解我院MRSA的流行状况。方法收集2005年1—6月65株社区感染MRSA及60株医院感染MRSA，应用多重PCR对MRSA染色体Dlec基因盒（staphylococcal cassette chromosomeSCCmec）分型及杀白细胞毒素（PVI。）基因检测，应用K—B纸片法进行药敏分析。结果125株MRSA的mecA基因阳性，其中SCCmecII型1株，SCCmecⅢ型120株，SCCmecⅣ型3株，未分型1株；未发现携带PVL基因的MRSA。携带SCCmecII型、SCCmecⅢ型的菌株均为多重耐药株，而携带SCCmecⅣ型的菌株除对8内酰胺类药物耐药外，对其他类别的抗菌药敏感。结论本院分离的MRSA以SCCmecⅢ型为主，发现SCCmecIV型CA-MRSA，但不携带PVL基因；携带SCCmecⅡ、SCCmecⅢ的临床分离株耐药严重。     

革兰阴性杆菌中VEB-1型超广谱β-内酰胺酶的分布情况调查

目的　分析上海第二医科大学附属瑞金医院 (以下简称瑞金医院 )和上海交通大学附属第六人民医院(简称市六医院 )分离的 340株革兰阴性杆菌中VEB 1型超广谱 β 内酰胺酶 (ESBL)的分布 ,并分析瑞金医院灼伤科患者标本中分离的产VEB 1型ESBL铜绿假单胞菌是否有同源性。方法　用聚合酶链反应 (PCR)扩增细菌的veb 1基因 ,用PCR RFLP检测并分型整合子 ,以ERIC2为引物 ,采用随机引物扩增多态性DNA分型法(RAPD)对瑞金医院灼伤科分离到的 16株产VEB 1型ESBL的铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果　市六医院分离的菌株中未检测到veb 1基因 ,瑞金医院仅在灼伤科来源的铜绿假单胞菌中检出VEB 1型ESBL ,且这些菌株用RAPD分析具有同源性。结论　瑞金医院灼伤科流行携带veb 1型ESBL基因的铜绿假单胞菌。     

革兰阴性菌中1类整合子的分布及其与耐药的关系

目的在革兰阴性细菌中检测1～3类整合子，并分析整合子对细菌耐药性的影响。方法应用聚合酶链反应对临床分离的340株革兰阴性细菌进行整合子的初筛，对于整合子阳性的菌株，再利用限制性片段长度多态性技术(RFLP)进行分型。结果340株菌中有87株(25．6％)含有1类整合子，其中有1株同时含有2类整合子，它们对10种抗菌药物的耐药率依次为亚胺培南(9．2％)、哌拉西林/他唑巴坦(34．5％)、阿米卡星(34．5％)、头孢吡肟(35．6％)、头孢他啶(41．4％)、头孢噻肟(65．5％)、庆大霉素(66．7％)、头孢曲松(67．8％)，替卡西林/克拉维酸(72．4％)、环丙沙星(73．6％)。结论1类整合子广泛地存在革兰阴性细菌中，1类整合子阳性菌株对多种抗生素的耐药率大于整合子阴性的菌株。     

EDTA纸片法检测大肠埃希菌和克雷伯菌的高产AmpC酶

目的寻找一种简便、快速、有效的检测高产AmpC酶的方法。方法用纸片扩散法对1 935株大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌进行AmpC酶的初筛试验,然后用EDTA纸片法、头孢西丁三维试验和多重聚合酶链反应(PCR)同时对327株初筛阳性细菌进行AmpC酶的检测,并进行方法学比较。结果PCR、头孢西丁三维试验、EDTA纸片法阳性菌株分别为54、85、94株,阳性率分别为2.79%、4.39%、4.86%,EDTA法与三维试验的符合率为97.25%,2种检测方法差异无显著性(P>0.05);EDTA对质粒AmpC酶的检测率高于三维试验。结论EDTA纸片法用于这2种临床菌株中持续高产AmpC酶的检测,方法简便,结果可靠,无需特殊仪器支持,可在临床实验室推广使用。     

应用全自动血培养仪提高血液、无菌体液培养阳性率

目的提高血培养、无菌体液培养阳性率,快速、准确地作出病原学诊断。方法用ＢＡＣＴＥＣ９１２０全自动血培养仪对１０００份血液和体液标本进行检测,针对不同年龄患者对象选用标准需氧瓶、厌氧瓶和儿童专用培养瓶进行增菌培养。结果培养时间缩短至５天,培养阳性率为１４９％,假阳性率４０％,污染率０９％,其中血培养阳性率１１０％,体液培养阳性率３６％。共检出４３种菌,凝固酶阴性葡萄球菌的比例高达４１６％。结论用ＢＡＣＴＥＣ９１２０全自动血培养仪提高了血培养、无菌体液培养阳性率,缩短了培养时间。