人骨形成蛋白4基因修饰的兔骨髓基质细胞异位成骨试验

目的:通过人骨形成蛋白4(bonemorphogeneticprotein,BMP4)基因修饰的兔骨髓基质细胞(bonemarrowStromalcells,bMSCs)与天然型无机骨(naturalnon鄄organicbone,NNB)支架复合,进行自体皮下异位成骨试验,探索BMP4基因治疗与组织工程技术相结合的可行性。方法:贴壁法培养兔bMSCs,体外应用脂质体介导转染pEGFP鄄hBMP4及pEGFP真核表达质粒。将转染基因的细胞和未转染基因的对照组细胞,分别以5×107/ml的浓度,与NNB支架复合,构建组织工程化骨,植入6只新西兰兔自体皮下,每组6例,4周后取材,组织学观察,并进行新骨成骨面积分析。结果:空白对照NNB孔隙内无新骨形成,转染pEGFP基因组及对照细胞组,支架网孔内均有新生骨及软骨样组织形成,而pEGFP鄄hBMP4实验组形成的新生骨及软骨样组织面积更大(P<0.05)。结论:应用hBMP4基因修饰的bMSCs作为骨组织工程的种子细胞,可望取得更强的成骨能力。     

含锶锌黄长石涂层钛表面促进骨髓间充质干细胞成骨分化的初步研究

目的钛合金表面制备新型含锶锌黄长石（Sr-Ca₂ZnSi₂O₇,Sr-HT）涂层,初步评估其对骨髓间充质干细胞（BMMSCs）成骨分化等生物学行为的调控能力,用于指导新型种植体设计以促进骨结合效果。方法采用等离子喷涂法对钛合金表面进行Sr-HT涂层修饰,分别以锌黄长石（Ca₂ZnSi₂O₂,HT）以及羟磷灰石（HAp）涂层钛表面作为对照。扫描电镜观察涂层的表面结构,并使用电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）检测表面涂层的离子释放情况。原代培养犬骨髓间充质干细胞（BMMSCs）并接种于材料表面,用免疫荧光法观察细胞在三种涂层表面的粘附铺展情况,ALP半定量检测和OCN蛋白表达免疫荧光法观察细胞在三种涂层表面的成骨分化情况。结果扫描电镜下观察,三种涂层表面均为凸凹不平的微米尺度结构,与HAp涂层相比,Sr-HT和HT组浸提液中含有锌离子,Sr-HT涂层还能够释放大量锶离子。BMMSCs在Sr-HT和HT涂层表面粘附能力、ALP活性和OCN蛋白表达均显著高于HAp对照组,其中Sr-HT组更明显。结论与传统HAp涂层相比,新型Sr-HT涂层可促进BMMSCs的粘附和成骨分化,其促进成骨分化的作用与Zn和Sr离子释放有关。     

基于间充质干细胞膜的药物投递系统研究进展

传统药物载体在体内投递过程中,常出现全身用药靶向性弱、载体的稳定性差和生物相容性低等问题.细胞膜作为细胞信息传递与行为调控的重要组成部分,可作为药物的包覆材料.间充质干细胞膜载体作为新兴的载体,具有主动靶向性、免疫调节性、膜表面修饰性等特点,在肿瘤治疗和组织再生等领域具备广泛的应用潜力.本文总结了间充质干细胞膜载体的特性以及应用现状,为未来的膜载体设计和临床应用提供指导.     

基因修饰的组织工程化骨研究进展

利用促进成骨的蛋白多肽基因转染体外培养扩增的种子细胞,构建基因修饰的组织工程化骨。通过种子细胞表达基因产物,可有效地促进新骨的形成,为骨缺损的修复提供一种理想的方法。本文就基因修饰组织工程化骨的构建及其促进成骨的研究作一综述。     

应用骨髓基质干细胞修复骨缺损的研究进展

骨髓基质干细胞具有明确的成骨潜能，是骨愈合过程中骨化的重要细胞，它具有来源丰富，采集方便，容易在体外培养，诱导，扩增的特点，是组织工程化骨理想的种子细胞，该细胞在体外培养具有较强的传代增殖能力，外源目的基因易于导入，因此也是骨缺损基因治疗较为理想的靶细胞，本文就应用骨髓基质干细胞作为细胞工程化骨的种子细胞和基因治疗的靶细胞来修复骨缺损的进展作一综述。     

AdLacZ基因修饰山羊耳软骨细胞复合F127构建组织工程化软骨

目的:应用AdLacZ基因修饰体外培养的山羊耳软骨细胞,并与Pluronic F127支架材料复合,观察裸鼠皮下软骨形成的情况,为进一步应用软骨分化因子基因修饰重建软骨的研究提供参数。方法:实验于2004-11/2006-12在上海交通大学医学院附属第九人民医院完成。①实验材料:取健康雄性山羊,体质量26～30kg。6周龄BALB/c裸鼠24只,体质量20g。体外培养山羊耳软骨细胞,转染AdLacZ基因,检测基因转染效率。②实验方法:将基因修饰的细胞与可吸收生物材料PluronicF127混合形成细胞-生物材料复合物,并注射到6只裸鼠皮下,每只在其背部皮下分别接种2个点,分别在术后2,4周取材,每个时间点有标本6例。另取裸鼠18只,同样设计,分别以未转基因的软骨细胞-材料复合物、单独注射的软骨细胞、或单独注射的F127支架作为对照组,每组6只。③实验评估:标本行苏木精-伊红染色、阿利新蓝染色,并对4周标本行X-gal染色,Ⅱ型胶原免疫组织化学检测。结果:纳入BALB/c裸鼠24只,均进入结果分析。①50pfu/细胞可以获得80%的转染效率。②2周时细胞-材料复合物形成了不成熟的软骨样组织,苏木精-伊红染色显示外周呈纤维样组织包裹,中部大部分为不成熟的软骨细胞;4周实验组中央部位出现少量稍成熟的软骨,阿利新蓝染色显示该部位为深蓝色的巢状软骨,部分细胞有Ⅱ型胶原阳性表达。冰冻切片X-gal染色提示细胞来自于植入的软骨-材料复合物。对照组未转基因的软骨细胞-材料复合物,其组织学及Ⅱ型胶原免疫组织化学表现与实验组没有明显差别,而X-gal染色为阴性。单独注射软骨细胞或单独注射F127支架,在4周内则均未见到软骨形成。结论:腺病毒载体可向软骨细胞高效转移目的基因,F127支架材料是软骨再生较为理想的支架材料。     

单侧唇腭裂伴发鼻畸形个体化治疗重建鼻软骨支架结构31例

目的:唇裂术后鼻畸形的整复相对更为复杂,由于鼻畸形与唇畸形多同时存在,而且相互影响,因此制定行之有效、个体化的手术治疗方案已成为当前研究的重点,引入构建组织工程化骨修复单侧唇腭裂继发鼻畸形,并探讨手术设计方式的可行性和合理性.方法:①对象:选择2001-03/2005-09本院收治的单侧完全性唇腭裂并均已行唇腭裂修补术患者31例,年龄15～41岁,平均24岁.患者对所进行的治疗均知情同意.②方法:采用改良Millard联合经鼻小柱开放术式、个体化矫正畸形鼻软骨支架结构.③评估:患者手术效果、材料不良反应.结果:31例患者全部进入结果分析.①31例患者切口全部一期愈合.②术后鼻基底抬高,鼻尖耸立,鼻孔及鼻翼外形两侧基本对称,偏斜的鼻小柱、鼻底畸形亦得以纠正.③随访2至3年,未见畸形复发,无宿主与材料不良反应.结论:采用联合式、个体化的手术方式,能有效地矫正单侧唇腭裂继发的鼻畸形,并能够有效的重建鼻软骨支架结构.     

犬骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的实验研究

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在体外诱导分化为成骨细胞的方法和活性检测。方法:抽取犬骨髓3 mL,使用成骨条件培养液,贴壁法体外培养,将培养的第2、3代细胞进行透射电镜、流式细胞仪、生长曲线、碱性磷酸酶、Von Kossa和免疫组化等检测。结果:第2代细胞碱性磷酸酶染色呈阳性表达;第3代细胞Von Kossa染色、骨桥素、骨涎蛋白和骨钙蛋白呈阳性表达;第3代细胞透射电镜显示高尔基体和线粒体丰富;流式细胞仪检测显示第3代处于S期的细胞比例较第2代增加。结论:犬骨髓基质细胞在体外能定向诱导分化为成骨细胞。     

釉基质蛋白对猪骨髓基质细胞黏附、伸展及增殖的影响

目的：研究釉基质蛋白（enamel matrix proteins,EMPs）对体外培养的猪骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）黏附、伸展和增殖活性的影响。方法：抽取猪髂骨骨髓．全血培养法获得骨髓基质细胞。培养液中EMPs的浓度分别为25、50、100、200μg／ml,以不加EMPs为对照。用比色法检测不同浓度EMPs对BMSCs黏附的影响。通过计数预定视野中伸展的细胞数,计算BMSCs在培养1h、3．5h、6、5h后的伸展率。MTT法测定各组细胞的增殖活性。对实验数据行单因素方差分析和SNK法组间比较。结果：猪BMSCs在含有EMPs的培养液中生长良好。对照组以及不同浓度EMPs实验组对细胞黏附的影响无统计学差异。在1h、3．5h、6．5h．各组细胞的伸展率无显著不同。EMPs对BMSCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性．200μg／ml浓度的EMPs从实验的第3天开始．显著促进猪BMSCs的增殖。结论：EMPs对体外培养的猪BMSCs的黏附和伸展无显著影响．200μg／ml浓度的EMPs可显著促进猪BMSCs增殖,为联合应用EMPs和BMSCs修复牙周组织缺损提供了理论依据。     

bFGF复合NNB无机骨修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与天然型无机骨(NNB)复合人工骨修复兔下颌骨缺损的效果,以期为临床提供一种较为理想的骨替代材料.方法在30只成年新西兰兔双侧下颌骨下缘形成15mm×6mm全层骨膜骨质缺损,每一缺损作为一个实验单位,术后3周、6周、12周取材行大体标本、X片观察,并对HE染色切片行计算机定量分析.结果复合骨与NNB相比,同期成骨量大;6周时复合骨成骨面积尚不如自体骨,而12周时已接近自体骨水平,空白缺损则始终未能修复.结论复合骨生物相容性好,效果明显优于NNB,远期与自体骨相似,是一种较为理想的骨替代材料.