不同方法诱导的骨髓基质细胞用于修复山羊髁突软骨缺失的实验研究

目的:比较用诱导因子诱导及用部分成体软骨细胞诱导的骨髓基质细胞(BMSCs)复合生物材料修复山羊颞下颌关节髁突软骨全层缺失的效果.方法:取山羊6只,分为2个实验组及1个对照组,每组2只.实验Ⅰ组植入经诱导因子(TGF-131、IGF-1、地塞米松)诱导的BMSCs与支架(PIuronic F-127溶胶)复合物,实验Ⅱ组植入软骨细胞-BMSCs(按3:7比例混合)的细胞-支架复合物,对照组仅植入支架材料.于术后8周取材,进行颞下颌关节软骨面缺失修复的大体观察、修复组织的HE染色、Ⅱ型胶原分泌的免疫组化染色.结果:术后8周实验Ⅱ组髁突软骨缺失区由软骨样组织修复.HE染色及免疫组化染色结果均提示修复组织为成熟的软骨组织.而实验Ⅰ组及材料对照组缺损区仅由少量的纤维性组织修复,不能形成成熟的软骨组织.结论:骨髓基质细胞在自体软骨细胞基质的诱导下,可以修复山羊髁突软骨面全层缺失,二维培养诱导后的BMSCs在山羊髁突软骨缺失区难以达到修复作用.     

bFGF复合NNB无机骨修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与天然型无机骨(NNB)复合人工骨修复兔下颌骨缺损的效果,以期为临床提供一种较为理想的骨替代材料.方法在30只成年新西兰兔双侧下颌骨下缘形成15mm×6mm全层骨膜骨质缺损,每一缺损作为一个实验单位,术后3周、6周、12周取材行大体标本、X片观察,并对HE染色切片行计算机定量分析.结果复合骨与NNB相比,同期成骨量大;6周时复合骨成骨面积尚不如自体骨,而12周时已接近自体骨水平,空白缺损则始终未能修复.结论复合骨生物相容性好,效果明显优于NNB,远期与自体骨相似,是一种较为理想的骨替代材料.     

两种多孔生物玻璃支架材料的体外细胞相容性研究

目的 对比研究采用同样原料但以不同方法制备的两种多孔生物玻璃支架材料的体外细胞相容性。方法 溶胶－凝胶法制备A/W生物活性微晶玻璃（4006材料）,熔融法制备多孔生物活性玻璃（45S5材料）。体外诱导分离培养及鉴定兔骨髓基质细胞（BMSCs）,通过材料浸提液细胞毒性实验（MTT法）、细胞黏附实验、倒置相差显微镜、扫描电镜和环境扫描电镜比较4006材料和45S5材料对BMSCs细胞黏附和生长的影响,并探索与材料复合的最佳BMSCs细胞悬液浓度。结果 4006材料浸提液培养1 d时,其细胞活力与纯培养液间无统计学差异（P>0.05）;但培养3 d后,其细胞活力低于纯培养液（P<0.01）。45S5材料浸提液培养的细胞活力明显低于纯培养液（P<0.01）。细胞与材料复合培养后,镜下见BMSCs在4006材料孔隙内贴壁生长良好,分泌基质活跃;而在45S5材料上细胞黏附生长较差。BMSCs与4006材料的黏附量随接种细胞浓度升高而升高,细胞悬液浓度为2×10⁷个•mL^-1时的细胞黏附量最高。结论 溶胶－凝胶法制备的A/W生物活性微晶玻璃具有良好的生物活性和细胞相容性,具有作为骨组织工程支架材料的潜能。与其复合的细胞悬液浓度需要2×107 个•mL-1或以上。     

条件化转染MT基因小鼠模型的建立

目的建立四环素诱导调控的MT转基因小鼠模型。为血管瘤试验研究及MT致瘤机理研究奠定基础。方法通过PCR方法从鸡的基因组序列中克隆绝缘子元件；构建四环素诱导调控的条件化转基因质粒，并将其调控元件和受控元件串联成一个载体，在两元件之间插入绝缘子，以减轻两者之间的相互干扰。为提高转基因的表达效率，在转基因盒的上游亦插入绝缘子元件；将MT基因亚克隆至此载体；转基因载体功能行细胞瞬转试验及半定量逆转录-PCR验证后，将其在体外扩增、酶切、回收，行小鼠受精卵原核注射，获得转染MT基因阳性小鼠；强力霉素体外诱导部分阳性鼠MT基因表达，使其具有血管瘤表型。结果绝缘子元件成功克隆；成功构建条件化转基因载体；体外试验证实目的基因的表达受强力霉素的严格调控；通过原核注射，获得5只转基因阳性鼠；2只行体外诱导2月后。1只出现血管瘤表型，逆转录．PCR检测证实MT表达。其余3只阳性小鼠在传代建系中。结论条件化MT转基因小鼠模型成功构建，此小鼠模型能够为血管瘤的试验研究及MT致瘤机理的体内研究提供一定的基础。     

单侧唇腭裂伴发鼻畸形个体化治疗重建鼻软骨支架结构31例

目的:唇裂术后鼻畸形的整复相对更为复杂,由于鼻畸形与唇畸形多同时存在,而且相互影响,因此制定行之有效、个体化的手术治疗方案已成为当前研究的重点,引入构建组织工程化骨修复单侧唇腭裂继发鼻畸形,并探讨手术设计方式的可行性和合理性.方法:①对象:选择2001-03/2005-09本院收治的单侧完全性唇腭裂并均已行唇腭裂修补术患者31例,年龄15～41岁,平均24岁.患者对所进行的治疗均知情同意.②方法:采用改良Millard联合经鼻小柱开放术式、个体化矫正畸形鼻软骨支架结构.③评估:患者手术效果、材料不良反应.结果:31例患者全部进入结果分析.①31例患者切口全部一期愈合.②术后鼻基底抬高,鼻尖耸立,鼻孔及鼻翼外形两侧基本对称,偏斜的鼻小柱、鼻底畸形亦得以纠正.③随访2至3年,未见畸形复发,无宿主与材料不良反应.结论:采用联合式、个体化的手术方式,能有效地矫正单侧唇腭裂继发的鼻畸形,并能够有效的重建鼻软骨支架结构.