茶多酚的离体抗氧化作用

目的和方法 采用分光光度法及电泳法,以离体ＲＢＣ膜,肝匀浆还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）水平,质粒ＤＮＡ损伤程度为检测指标测定茶多酚对离体生物组织的抗氧化作用。结果：茶多酚能显著抑制紫外线致人ＲＢＣ溶血作用（Ｐ〈０．０１）,能显著抑制＾６０Ｃｏγ射线致质粒ＰＵＣ１９ＤＮＡ单链断裂作用（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）对ＶｉｔＣ／Ｆｅ＾２＋激发的肝匀浆ＧＳＨ耗竭,茶多酚也具有显著的抑制作用（Ｐ〈０．０５或Ｐ〉     

牛磺酸不是·OH自由基清除剂

牛磺酸在体内可由半胱氨酸氧化脱羧而成,是条件必需氨基酸,它在人体内含量较丰富,牛磺酸在肝胆系统、中枢神经系统、循环系统、视网膜、呼吸系统、生殖系统等均有重要生理功能［１５］。牛磺酸还有一些其他功能,例如牛磺酸通过氨基与有害因子相互作用,抵抗细胞膜离...     

CD40配体-受体载体介导的CpG ODN靶向脐血B淋巴细胞的特异传递及其免疫效应

背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值.但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍.目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异靶向传递及其免疫效应的增强作用.设计、时间及地点:观察对比实验,于2004-0412007-10在广州暨南大学附属第一医院血液科、儿科完成.材料:取健康新生儿的肝素抗凝新鲜脐血,事先征得父母知情同意并获医院伦理委员会审核批准.方法:制备CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸交联复合物,与脐血单个核细胞共培养.分别于24,48,72,96 h应用流式细胞仪检测单个核细胞对FAM标记CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度;培养96 h后用直接免疫荧光标记法标记CD19,CD20,CD22单抗,以流式细胞仪检测阳性表达率;细胞悬液加入96孔板,3组分别加入CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸、单纯CpG寡核苷酸及ddH2O,培养92 h,以四甲基偶氮唑盐比色法测细胞增殖能力;以酶联免疫吸附法测以上3组细胞培养上清IgG水平.主要观察指标:单个核细胞对CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度,淋巴细胞亚群的表达,细胞增殖能力,培养上清IgG水平.结果:与单纯CpG寡核苷酸未交联组相比,单个核细胞对交联复合物摄取率更高(98%),达摄取峰值时间吏早.共培养后CD19+,CD22+,CD20+细胞表达升高,细胞增殖量及上清IgG水平均高于对照组(P<0.05).结论:CD40配体-受体载体系统有助于CpG寡核苷酸特异高效的B细胞靶向投递,并增强其免疫效应.     

半乳糖受体介导的增殖细胞核抗原反义核酸对肝癌Bel-7402细胞增殖的靶向抑制作用

目的探讨半乳糖受体介导的增殖细胞核抗原（PCNA）反义核酸（ASODN）对肝癌Bel-7402细胞增殖的靶向抑制作用。方法选择来源于3个不同系统的肿瘤细胞：肝癌Bel-7402细胞、肺腺癌GLC-82细胞、慢性髓系白血病K562细胞，将半乳糖-聚乙烯亚胺（Gal-PEI）与PCNA反义核酸结合形成交联复合物Gal-PEI-ASODN，台盼兰拒染计数法观察不同浓度Gal-PEI-ASODN对这3种细胞增殖的影响；流式细胞仪检测3种细胞对羧基荧光素（FAM）标记的Gal-PEI-ASODN的摄取率及细胞内平均荧光强度；相差／荧光显微镜观察FAM标记的Gal-PEI-ASODN及ASODN进入3种不同细胞的情况。结果浓度从10μmol／L到40μmol／L的ASODN作用于Bel-7402细胞48h后，可抑制其增殖，IC50为29．3μmol／L。浓度从0．05μmol／L到0．25μmol／L的ASODN作用于Bel-7402细胞48h后，均未显著抑制其增殖；相同浓度的Gal-PEI-ASODN作用于3种不同细胞48h后，对GLC-82细胞、K562细胞的增殖未产生显著抑制作用，而Bel-7402细胞的增殖却受到明显抑制。对于Bel-7402细胞，Gal-PEI-ASODN的IC50为0．06μmol／L，与单纯ASODN组相比。增敏倍数为488倍。FAM标记的Gal-PEI-ASODN或ASODN与不同细胞孵育0．5h到2．0h内，Gal-PEI-ASODN-Bel-7402细胞组所有时间点的细胞荧光摄取率、胞内平均荧光强度均显著高于A-SODN-Bel-7402细胞组、Gal-PEI-ASODN-GLC-82细胞组和Gal-PEI-ASODN-K562细胞组。FAM标记的Gal-PEI-ASODN或ASODN与Bel-7402、GLC-82、K562细胞作用1h后．Gal-PEI-ASODN-Bel-7402组的细胞荧光摄取率较高（反义核酸大量分布于细胞的胞浆内），其他各组细胞荧光摄取率较低。结论半乳糖受体介导的PCNA反义核酸能被肝癌Bel-7402细胞高效地摄取。抑制Bel-7402细胞的增殖，增强反义核酸的作用效果，具有靶向性。     

肿瘤标志物4项指标联合检测诊断消化系统肿瘤

目的 探讨血清癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、癌相关糖抗原(CA199、CA724)联检对消化系统肿瘤诊断的价值.方法 用电化学发光仪检测50例健康人及80例消化道肿瘤CEA、AFP、CA199、CA724的含量.结果 消化系统肿瘤患者的血清CEA、AFP、CA199、CA724的值均明显高于正常组,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01),4项指标联检较任何1项单项检测灵敏度、特异性和准确性均有提高.结论 CEA、AFP、CA199、CA724联检对消化系统肿瘤诊断提供可靠依据.     

丙戊酸钠通过线粒体凋亡通路诱导肝癌细胞凋亡

背景：已经有人发现丙戊酸钠可以抑制成神经细胞瘤以及其他一些肿瘤细胞的细胞增殖。丙戊酸钠对肝癌细胞的的增殖抑制作用在近期也被人发现,但是具体机制还不清楚。本研究是为了证实丙戊酸钠对肝癌细胞的增殖抑制作用以及其具体机制。 方法：用WST法和克隆形成抑制来检测丙戊酸钠对肝癌细胞的增殖抑制作用,hoechest 33258染色来检测细胞核形态的改变,流式细胞仪检测丙戊酸钠诱导的肝癌细胞凋亡率,JNK, p-JNK, Bcl-2, Bax,Caspase-9,Caspase-3等蛋白的表达用Western blot检测,线粒体膜电位用JC-1染色法检测。 结果：丙戊酸钠可以显著抑制肝癌细胞的增殖并且呈现剂量-效应关系,流式细胞仪检测出现了明显的亚二倍体峰和凋亡细胞群,hoechest 33258染色来检测出现了明显的核固缩、边聚和裂解。JC-1染色法显示线粒体膜电位发生了明显的改变,JNK, p-JNK, Bcl-2, Bax,Caspase-9,Caspase-3等蛋白的表达也发生了改变。 结论：丙戊酸钠通过线粒体凋亡通路诱导肝癌细胞凋亡。     

Bcr/abl融合基因的小干扰RNA对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察特异性bcr/abl融合基因的siRNA对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法　设计并化学合成bcr/abl融合基因融合位点b3:a2 21个核苷酸 siRNA作用于K562细胞,用WST-8法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR 检测 bcr/abl mRNA表达水平;PI单染流式细胞仪检测细胞周期;Annexin V-PI双染测定细胞凋亡比例;Hochest33258 染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果 ①Bcr/abl siRNA作用K562细胞24h,48h,72h后,明显抑制K562细胞增殖,各浓度组间的增殖抑制率无明显差异(p>0.05);②Bcr/abl siRNA能显着下调bcr/abl mRNA水平,各浓度组间差异无显著性(p>0.05);③Bcr/abl siRNA作用组细胞周期阻滞于G1期;④Bcr/abl siRNA作用后细胞出现明显的早期凋亡群,各浓度组间的早期凋亡率差异无统计学意义(p>0.05),细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变。结论 　特异性bcr/abl siRNA可显着抑制K562细胞bcr/abl融合基因的表达,抑制细胞的增殖,诱导凋亡,但其作用未显示明显的剂量依赖性。     

局麻下无张力疝修补术在基层医院开展的可行性

目的探讨在基层医院开展局麻下无张力疝修补的可行性。 方法2015年6月至2017年3月，贵州省六盘水市人民医院利用科技项目基金资助，在县级及乡镇医院开展局麻下无张力疝修补治疗腹股沟疝19例患者临床资料。 结果19例患者行腹膜前间隙无张力疝修补术完成，麻醉方式为局麻，手术时间45～60 min，平均为50 min。术后均未用抗生素，术后6 h内即可下床活动及进流质饮食。患者无需要导尿，疼痛患者给予镇静剂。所有患者均达1期愈合，住院时间为3～4 d。术后随访6～23个月，无复发、疼痛、异物感等不适。经济费用减少20%。 结论局麻下无张力疝修补术在基层医院开展效果满意，即规范了腹股沟疝的治疗，同时患者术后疼痛小，恢复快，并发症少，复发低，降低患者经济费用，缓解就医困难，故此方式值得推广，也为医疗体制改革提供了依据。     

靶向Livin反义寡核苷酸对结肠癌LoVo细胞增殖及对卡铂敏感性的影响

目的探讨靶向Livin反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌LoVo细胞增殖及Livin基因表达的影响,并观察其对卡铂敏感性的变化。方法 (1)用靶向Livin ASODN、随机寡核苷酸(RODN)分别转染LoVo细胞,反转录-聚合酶链式扩增反应检测Livin mRNA表达量变化;(2)流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;(3)采用CCK-8法检测卡铂联合靶向Livin ASODN作用对肿瘤细胞的增殖抑制率。结果 Livin ASODN转染LoVo细胞明显抑制Livin mRNA表达,与空白对照组、RODN组比较差异均有统计学意义(P<0.01);流式细胞术碘化丙锭单染色显示,空白对照组、RODN组均未出现细胞亚二倍体峰;Livin ASODN组存在LoVo早期凋亡细胞,200、400 nmol.L-1的Livin ASODN组细胞亚二倍体百分率分别为(10.59±1.05)%、(11.63±1.27)%;卡铂单药半数抑制浓度(IC50)为3.33 mg.L-1,卡铂与Livin ASODN(100 nmol.L-1)联合,IC50为0.22 mg.L-1,表现为协同作用(Q≥1.15),增敏倍数15.14。结论靶向Livin ASODN下调Livin mRNA表达,诱导LoVo细胞凋亡并提高其对卡铂的敏感性。     

人类肾上皮细胞氧化损伤模型的建立

目的: 采用过氧化氢(H₂O₂)对人类肾脏近端小管上皮细胞系(HKC)进行氧化损伤,建立损伤的细胞模型。方法: 通过检测细胞活力、培养基中的丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化研究细胞损伤的程度;利用激光共聚焦显微镜观察细胞损伤前后骨桥蛋白(OPN)表达水平的变化;采用扫描电子显微镜(SEM)观察细胞损伤前后形貌和膜表面微结构的变化。结果: 用1 mmol/L H₂O₂作用HKC不同时间后,细胞活力和SOD活性逐渐下降,MDA释放量增加,OPN表达量显著增加并在作用时间为1 h时达到最大值;经损伤后的细胞变得干瘪收缩,且膜表面粗糙,鞭毛、突触大部分断裂脱落。结论: H₂O₂能够明显损伤HKC,细胞损伤后,其活力和膜表面超微结构发生变化,并在膜上表达能黏附草酸钙晶体的OPN。因此,可用1 mmol/L H₂O₂作用HKC 1 h建立损伤模型。