喜树碱衍生物抗肿瘤活性的初步筛选及部分作用机制

目的通过体内、外实验筛选喜树碱衍生物Ⅰ~Ⅻ的抗肿瘤活性并初步探讨其作用机制。方法四甲基偶氮唑法(MTT)检测喜树碱衍生物对多种肿瘤细胞的抑制率;建立荷瘤小鼠模型测定抑瘤率;采用脾细胞增殖法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞生成白介素2(IL-2)的含量,Griess法检测荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞生成一氧化氮(NO)的含量,放免法测定荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞生成肿瘤坏死因子α(TNFα-)的含量。结果衍生物Ⅶ、Ⅷ体外能明显抑制肿瘤细胞增殖,衍生物Ⅷ对荷瘤小鼠具有较强的抑瘤作用,衍生物Ⅶ、Ⅷ可降低荷瘤小鼠NO,升高TNFα-和IL-2,并且衍生物Ⅷ呈明显的剂量依赖关系。结论通过体内外的初步筛选得到的衍生物Ⅷ能高效杀伤肿瘤细胞,具有进一步研究开发前景。     

鬼针草总黄酮部分化学成分研究

目的 对鬼针草中的化学成分进行分离纯化,并筛选出具有抗肝纤维化活性的单体化合物. 方法 采用大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20、MCI小孔树脂、十八烷基硅烷键合硅胶柱等柱层析的方法进行分离纯化,并利用波谱技术进行化合物的鉴定. 应用四甲基偶氮唑蓝( MTT)法体外检测单体化合物对肝星状细胞T6 ( HSC-T6 )的抑制作用. 结果从鬼针草中分离鉴定的化合物为3-羟基乙酰基吲哚(1)、山奈酚(2)、6,7,3′,4′-四羟基橙酮(3)、槲皮素(4)、奥卡宁(5)、松脂素(6)、1,2,13-三羟基-3,11(E)-十三二烯-5,7,9-三炔(7)、异奥卡宁(8)、邻苯二甲酸-双(2′-乙基庚基) 酯(9)、山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(10)、(2S/2R)-异奥卡宁-7-O-β-D-(2″,4″,6″-三乙酰基)吡喃葡糖苷(11/12)、2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-1,13-二羟基-3,11 ( E)十三二烯-5,7,9-三炔(13). 结论 化合物6, 9 为首次从鬼针草种属中分离得到. 其中黄酮类化合物2, 4 具有较强的体外抑制HSC-T6细胞的增殖作用.     

虫草多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的 观察虫草多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用.方法 序贯注射卡介苗(BCG)和酯多糖(LPS),诱导小鼠产生免疫性肝损伤模型.在造模过程中,小鼠每日ig 125、250、500 mg·kg-1虫草多糖,共12 d.比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量,TBA法和NBT法测定肝匀浆中超氧歧化酶(SOD)的活力以及丙二醛(MDA)的浓度.结果 ig 125、250、500 mg·kg-1虫草多糖后,可明显降低模型小鼠血清中升高的ALT、AST的水平,抑制肝匀浆中上升的MDA水平和升高过低的SOD活性.显著降低肝脏中TNF-α和IL-1的含量.结论 虫草多糖对小鼠免疫性肝损伤有一定的保护作用.     

酸敏感离子通道1a在酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其机制研究

目的研究酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion chan-nel 1a)在体外培养的酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其可能机制。方法Ⅱ型胶原酶消化法分离大鼠关节软骨细胞,鉴定后传代培养,观察在不同pH条件下诱导的细胞自噬情况以确定胞外酸化条件;将软骨细胞分为pH7.4环境下培养的正常组、pH 6.0的酸化组、以及经ASIC1a非特异性阻断剂Amiloride和特异性阻断剂PcTX1处理的酸化组,RT-PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3及ERK1/2、p38MAPK磷酸化蛋白的表达,透射电子显微镜法(TEM)观察自噬小体数量的变化;通过使用ERK1/2、p38MAPK磷酸化抑制剂(PD98059、SB203580),采用RT-PCR和Western blot法观察ERK1/2及p38MAPK对酸诱导的软骨细胞自噬的影响。结果 pH 5.5和pH 6.0胞外酸化刺激均能明显升高软骨细胞自噬水平(P<0.01);与pH 7.4组比较,酸化组软骨细胞Beclin-1 mRNA及LC3、磷酸化的ERK1/2和p38MAPK蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),且自噬小体数量增多,ASIC1a阻断剂组自噬水平及ERK1/2、p38磷酸化蛋白表达水平较酸化组明显降低(P<0.01),且自噬体数量减少;与pH 6.0组相比,ERK1/2磷酸化抑制剂处理后,Beclin-1 mR-NA和LC3蛋白的表达均下调(P<0.05,P<0.01),而p38磷酸化抑制剂组自噬水平则无明显变化。结论胞外酸化环境下能诱发软骨细胞自噬,阻断ASIC1a能明显减弱酸化诱导的软骨细胞自噬,其机制可能与抑制ERK1/2磷酸化有关。     

RAR β沉默对4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯抗SGC-7901细胞增殖作用的影响

目的制备并筛选有效沉默SGC-7901细胞维甲酸受体β(RARβ)基因的最佳siRNA序列,观察RARβ靶向沉默对4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)抑制SGC-7901细胞增殖作用的影响。方法针对人RARβ全序列设计合成3条siRNA,以lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染至SGC-7901细胞。转染后24、48 h应用RT-PCR和Western blot技术分别检测SGC-7901细胞内RARβ的mRNA和蛋白表达。选用最佳siRNA序列靶向沉默SGC-7901细胞RARβ后6 h加入AT-PR(终浓度为10-5mol.L-1),72 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期动力学,分光光度法检测细胞裂解液中碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化。结果靶向沉默SGC-7901细胞中RARβ基因的最佳序列为siRNA-RARβ-homo-466且在浓度为100 pm.L-1、与Lipo的比例为1∶0.05时沉默效果最佳。与未沉默的ATPR给药组比较,RARβ-homo-466序列转染沉默后ATPR(10-5mol.L-1)给药组SGC-7901细胞增殖活性升高,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多(P0.01),ALP和LDH活力显著增强(P0.05)。结论 siRNA-RARβ-homo-466可有效沉默RARβ基因的表达;RARβ沉默后,对ATPR敏感的SGC-7901细胞表现出ATPR抗性,提示RARβ可能是介导ATPR作用于SGC-7901细胞的主要环节。     

高脂饮食对大鼠海马形态及突触相关蛋白Synapsin-1表达的影响

目的探讨高脂饮食对大鼠海马形态学改变及突触相关蛋白Synapsin-1(Syn-1)表达的影响。方法将18只雄性SD大鼠随机分为对照组(8只)及模型组(10只)。对照组、模型组大鼠分别给予标准饲料、高脂饲料连续饲养4周。采用化学发光法检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的水平,ELISA法检测血清瘦素水平。使用HE染色法及镀银染色法观察海马形态学的改变,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫组织化学技术观察海马Syn-1表达变化。结果与对照组相比,模型组大鼠血清TC、LDL及HDL浓度升高,瘦素水平降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较:HE染色显示,模型组大鼠海马组织的CA1、CA3及DG区神经元细胞形状不规则且分布较为松散,细胞核固缩深染;镀银染色结果显示CA1、CA3、DG脑区的神经元细胞深染加重。qRT-PCR法和免疫组织化学结果均显示,模型组中大鼠海马Syn-1的表达较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论高脂饮食可诱导大鼠高血脂症、海马神经元损伤及海马部位突触...     

梅花针叩刺放血结合激光照射治疗早期带状疱疹的临床疗效观察

目的观察梅花针叩刺局部放血结合激光照射皮损部位治疗早期带状疱疹的临床疗效及预后情况。方法选取2016年12月—2018年10月于我院治疗的68例早期带状疱疹患者作为研究对象,按照随机数字表法分为观察组与对照组,各34例,其中对照组采用西医常规治疗及护理,观察组在对照组治疗基础上另给予梅花针叩刺放血结合激光照射治疗。结果治疗结束后,观察组总有效率为94.12%,明显高于对照组的79.41%(P<0.05)。治疗结束后1个月、2个月进行随访时,观察组总有效率也均明显高于对照组(P均<0.05)。2组患者疼痛视觉模拟评分均较治疗前明显下降(P均<0.05),且观察组下降差值大于对照组(P<0.05)。结论梅花针叩刺放血结合激光照射治疗早期带状疱疹可缩短病程,减轻患者疼痛,具有较好的临床疗效。     

家犬口服盐酸利福喷丁胶囊的药物动力学研究

目的研究健康家犬口服盐酸利福喷丁胶囊的药物动力学。方法采用高效液相色谱法测定家犬交叉口服盐酸利福喷丁胶囊和参比制剂利福喷丁胶囊后的血药浓度,应用3P97程序计算主要药代动力学参数,估算其相对生物利用度,并进行等效性检验。结果盐酸利福喷丁胶囊的T1/2、Cmax、Tmax、AUC0~60分别为(13·72±4·21)h、(22·09±7·13)mg/L、(5·17±0·41)h、(307·37±114·48)mg/(L·h),利福喷丁胶囊的上述参数分别为(14·62±3·47)h、(21·01±7·43)mg/L、(5·67±0·52)h、(291·13±104·06)mg/(L·h)。其血药浓度时间曲线均符合一级吸收的一房室模型,且两制剂药代动力学参数接近。两制剂间的lnAUC0~60,lnAUC0~∞及lnCmax经方差分析和双单侧t检验发现,两制剂之间具有生物等效性。Tmax经Wilcoxon检验发现,两制剂间也具有等效性。盐酸利福喷丁胶囊的相对生物利用度为94·7%。结论盐酸利福喷丁胶囊和参比制剂利福喷丁胶囊生物等效。     

微生物法测定犬血浆中罗红霉素

目的　采用微生物法测定犬血浆中罗红霉素浓度。方法　以藤黄微球菌为检定菌 ,游标卡尺测量抑菌环直径 ,检测抑菌圈直径与血浆中罗红霉素浓度对数的线性关系。结果　在 0 1 6～ 1 0mg·L-1 浓度范围线性良好 ,最小检测浓度为 0 1 6mg·L-1 ,其日内及日间相对标准差分别小于 6 6 3%和 1 2 5 8% ,相对回收率大于 89 1 9%。结论　方法简便、快速、准确 ,为动物及临床药物动力学研究提供了检测方法