生血合剂影响慢性再障患者外周血单个核细胞T-bet/GATA-3及相关信号分子、细胞因子表达的体外研究

目的:转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在Th1、Th2分化平衡及免疫反应调节中发挥重要的作用,本研究拟从体外研究健脾补肾活血中药复方生血合剂对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及相关信号分子、细胞因子表达的影响。方法:纳入CAA患者10例,男5例,女5例,年龄42～73岁,采集外周血前3天内未服用中药及环孢素。生血合剂制成无菌针剂(每毫升含2 g生药),环孢菌素A(CsA)用无菌RPMI1640配制成浓度为1 mg/mL的溶液。分离培养患者外周血单个核细胞(PBMNC),加或不加药物培养72 h,分为空白对照组、大剂量生血合剂组(200 mg/mL)、小剂量生血合剂组(100 mg/mL)和环孢素组(400ng/mL),采用实时荧光定量PCR(Realtime FQ-PCR)检测培养后PBMNC转录因子T-bet、GATA-3及信号分子STAT4、STAT6 mRNA表达情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果:CAA患者PBMNC体外培养后,空白对照组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12表达均明显高于小剂量生血合剂组、大剂量生血合剂组和环孢素组(P<0.05),小剂量生血合剂组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12显著高于大剂量生血合剂组、环孢素组(P<0.05),大剂量生血合剂组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12与环孢素组之间没有显著性差异(P>0.05);各组GATA-3、STAT6、IL-4之间比较无明显差异(P>0.05)。结论:生血合剂能在体外下调CAA患者PBMNC T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12表达,并且呈现一定的剂量依赖性。     

美洲大蠊提取物对3株人体呼吸系统肿瘤细胞的细胞毒性研究

目的通过2对美洲大蠊提取物的肿瘤细胞毒性测试,探讨美洲大蠊提取物的抗肿瘤作用。方法美洲大蠊醇提取物,通过聚酰胺柱层析分离划段得不同部位,采用MTT法对所得部位进行肿瘤细胞毒性测试。结果有多个部位样品的IC50值小于10μg/ml。结论通过样品与对照品细胞毒活性结果比较,表明美洲大蠊提取物中存在具有肿瘤细胞生长抑制作用的物质,值得对其进行进一步的研究。     

生血合剂治疗再生障碍性贫血免疫调控机制研究

再生障碍性贫血(Aplastic Anemia，AA，简称再障)是由多种病因或未明原因引起骨髓造血功能下降、导致全血细胞减少为主要特征的血液系统常见病。青壮年发病率较高。临床以慢性为多见，一般病程较长，治疗难度高，半数病人生活质量很差，部分病人可因继发感染、并发严重出血而危     

WT1基因表达在骨髓增生异常综合征中医“正虚”、“瘀毒”证型中的作用及意义

目的:探讨预报因子WT1基因表达在骨髓增生异常综合证(MDS)中医"正虚"、"瘀毒"证型中的作用及意义;方法:观察50例MDS患者中医"正虚"和"瘀毒"不同分型中的IPSS预后积分分级;采用荧光定量PCR(FQ-PCR)分别对"正虚"型与"瘀毒"型两组中的36例MDS患者与12例正常人骨髓单个核细胞(BMMNC)中WT1基因的表达水平进行检测;结果:中医证型与IPSS预后分级呈正相关(P<0.001,R=0.621),且瘀毒型患者中出现IPSS分级中较差预后的几率是正虚型患者的21倍(OR=21.0,95%CI:4.55～96.87);MDS患者的WT1基因mRNA相对表达水平明显高于正常组(P<0.01),且瘀毒型明显高于正虚型,两型比较亦存在显著差异(P<0.01);结论:MDS中医证型与IPSS预后分级存在相关性,IPSS中中危Ⅱ及高危型为"瘀毒"证型的相关因素;MDS瘀毒型预后较正虚型患者差,WT1基因表达水平对不同中医证型MDS的病情危险度的评估及预后判断具重要价值。     

慢性再生障碍性贫血患者中医证型与T-bet/GATA-3相关信号通路、Th亚群的相关性

目的从Th细胞失衡、转录因子T-bet/GATA-3及相关信号通路水平分析其与慢性再生障碍性贫血(CAA)中医证型的关系。方法选择CAA患者,辨证分为脾肾阳虚组和脾肾阴虚组各20例,另选20例健康者做对照(正常组),采用实时荧光定量PCR检测CAA患者外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达,采用流式细胞术、酶联免疫吸附法检测CAA患者外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果脾肾阴虚组患者PBMNCT-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1、IFN-γ、IL-12均高于脾肾阳虚组(P<0.05),并且此2组患者亦高于正常组(P<0.05),而GATA-3、STAT6、IL-43组比较则无统计学差异(P>0.05)。结论与脾肾阳虚型患者相比,CAA脾肾阴虚型存在更严重的IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路异常活化和Th1偏移,脾肾阴虚型存在更明显的免疫异常状态。     

T-bet、GATA-3在Th1、Th2细胞分化中的作用及意义

Th1、Th2细胞分化及其相互之间的平衡在免疫应答的调节中起重要作用,Th1／Th2细胞分化受多种因素影响,其中,转录因子T-bet、GATA-3对其具有重要的调节作用。多种疾病的发生、发展和预后均涉及Th1／Th2分化失衡。T-bet和GATA-3对Th1／Th2分化的调控作用、在疾病中的可能作用机制及其研究进展,有助于揭示多种疾病的发病机制,为治疗疾病提供帮助。     

骨髓增生异常综合征中医证型与代谢组学的相关性研究

[目的]研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者不同中医证型血清中小分子代谢物质的表达差异,以探索代谢组学在MDS中医证候学研究中的应用.[方法]根据有关中医辨证标准对60例MDS患者进行中医辨证,分为脾肾阴虚蕴毒型和脾肾阳虚蕴毒型两组,采用代谢组学及智能计算等新型研究方法,对两组不同证型患者生化代谢物质的色谱-质谱图进行判别分析,构建MDS中医证型的生化代谢指纹谱.[结果]MDS患者的色谱峰表达低于正常人,对正常对照组与MDS组的色谱峰表达进行两样本均数比较,共得到20个色谱峰表达有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),应用代谢组学构建的MDS判别方程在与正常人进行判别时的自身验证总体准确率达到92％,交互验证总体准确率达到90％;脾肾阳虚蕴毒型组的色谱峰表达明显低于脾肾阴虚蕴毒型组,对两组的色谱峰表达进行两样本均数比较,共得到18个色谱峰表达,有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),运用代谢组学构建的中医证型判别方程在自身判别和交互判别中的总体准确率均为93.33％.[结论] MDS患者的中小分子代谢物质的表达明显低于正常人,脾肾阳虚蕴毒型组的代谢物质的表达明显低于脾肾阴虚蕴毒型组,通过代谢组学分析建立的判别方程具有优异的判别MDS、正常人的能力;揭示了MDS两组中医证型的代谢差异.     

健脾补肾活血方药对再生障碍性贫血小鼠CTL介导的造血抑制因子影响

目的探讨细胞毒性T细胞介导的造血抑制因子对再生障碍性贫血的作用,分析健脾补肾活血方药的免疫调控机制。方法采用流式细胞仪检测不同拆方分组免疫介导再障小鼠脾淋巴细胞表面抗原CD8、γδTCR的表达,ELISA法检测各组小鼠培养细胞γ-IFN、α-TNF水平,观察其变化。结果再障组CD8+、γδTCR+T比例明显上升,γ-IFN、α-TNF水平亦升高,健脾补肾活血全方组CD8+、γδTCR+T下降,γ-IFN、α-TNF水平降低,与再障对照组比较有明显差异(P<0.001),健脾补肾组、温肾组、滋肾组、CSA组均有不同影响,健脾组、活血组作用不显。结论细胞毒性T细胞增加与造血负调控因子表达升高是导致再障的主要机制,两者具有相关性,健脾补肾活血方药可通过调节该免疫环节恢复骨髓造血,组方中以补肾中药为核心,健脾、活血中药起协同作用。