TAT修饰的小鼠IFNγ的制备

目的制备小鼠IFNγ-TAT, 为TAT影响IFN体内分布等研究作准备.方法采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列, 经3轮PCR扩增编码mIFNγ-TAT片段,克隆到质粒pUC19, 测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒载体中,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后1.2% 琼脂糖凝胶电泳鉴定;利用SDS-PAGE和Western blot检测表达的目的蛋白.结果 PCR扩增得到编码mIFNγ-TAT的cDNA片段,测序结果正确, SDS-PAGE和Western blot分析显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达.结论成功制备了TAT修饰的小鼠IFNγ,为进一步实验室研究奠定了基础.     

苦碟子注射液治疗冠心病住院患者的主要合并用药分析

目的探讨医院400例次苦碟子注射液治疗冠心病住院患者的连续输注药品特点,为冠心病治疗使用苦碟子注射液与合并用药的相互作用研究提供数据支持。方法回顾性分析2012年1月至2012年4月就诊的400例次应用苦碟子注射液治疗冠心病住院患者的主要合并用药,重点分析用药前后连续输注其他药品情况。结果21．25％患者在苦碟子注射液输注前后未连续输注其他药品,66．50％患者连续输注了其他药品。结论应用苦碟子注射液治疗冠心病住院患者用药前或后多数患者存在连续输注其他药品情况。     

人高迁移率族B1的表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

目的以原核表达的人高迁移率族B1(High mobihty group box 1,HMGB1)蛋白为免疫原免疫日本大耳白兔,制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法将人HMGB1 cDNA克隆于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导HMGB1表达,Ni^2 -NTA层析纯化后,用其免疫兔。以ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性。结果成功表达并纯化了人HMGB1蛋白,纯化后纯度可达96％;ELISA法测定抗体效价为1：25600;Western blot结果显示所制备的抗体可特异性与人HMGB1蛋白结合。结论成功制备了兔抗人HMGB1多克隆抗体,为进一步研究HMGB1与相关疾病的关系打下了基础。     

重组人SMAC及SMAC-PTD的制备

目的制备重组人SMAC及SMAC-PTD.方法经RT-PCR从人HeLa细胞中扩增人野生型SMAC及SMAC-PTD cDNA,分别构建于原核表达质粒pET28a( ),测序正确后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni2 -NTA层析纯化,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白.结果RT-PCR扩增分别得到编码人SMAC及SMAC-PTD cDNA片断,测序结果正确,重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达.结论成功制备了高纯度的人野生型SMAC及SMAC-PTD融合蛋白,为进一步研究奠定了基础.     

邻苯二甲酸醋酸纤维素的新应用

目的:了解并明确邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)的新应用.方法:查阅中外文献,收集CAP的研究资料,分类总结.结果:CAP除用作辅料外还具有生物活性,并作为栓塞材料应用.结论:CAP具有良好生物活性,也是良好的栓塞材料.     

注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠致过敏性休克1例

患者,男,79岁,汉族,因食管恶性肿瘤于2009年7月2日入院治疗,既往无家族过敏史,无药物过敏史。入院时体格检查示脉搏74次／min,血压120／70mmHg,余无异常,血常规、尿常规、肝肾功能检查未见明显异常,青霉素皮肤过敏试验阴性,拟行下段食管癌切除术、胃食管弓上吻合术。术前为预防感染,将注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠（商品名他唑仙,珠海联邦制药有限公司,批号为90508305）2．25g加入10mL／支0．9％氯化钠注射液中静脉注射,用药后2min,患者出现皮肤瘙痒、心慌、呼吸困难、四肢冰凉、口唇发紫、意识模糊、血压持续降低（最低至50／30mmHg）。     

大剂量尖吻蝮蛇凝血酶对家兔血浆纤维蛋白原的影响

目的探讨大剂量尖吻蝮蛇凝血酶对家兔血浆纤维蛋白原的影响,为临床应用提供参考。方法家兔耳缘静脉注射不同剂量的尖吻蝮蛇凝血酶,并于给药后不同时间检测其血浆纤维蛋白原含量。结果0.2～1.0U·kg-1剂量的尖吻蝮蛇凝血酶可导致家兔血浆纤维蛋白原明显下降(P<0.05),下降速度及下降幅度与剂量成正相关。剂量≥0.4U·kg-1时家兔血浆纤维蛋白原开始出现耗竭,剂量≥0.8U·kg-1时所有家兔血浆纤维蛋白原均出现耗竭。结论大剂量尖吻蝮蛇凝血酶具有明显降低家兔血浆纤维蛋白原的作用。     

花蜜饮合剂质量标准的研究

目的制定花蜜饮合剂的质量标准.方法采用薄层色谱法对制剂中的苍耳子、白芷、川芎进行定性鉴别;采用薄层扫描法对制剂中的绿原酸进行定量分析.结果薄层色谱斑点清晰,阴性对照无干扰;绿原酸含量在1.60～8.00μg范围内有良好的线性关系.平均回收率为98.15%,RSD为1.60%.结论本法可用于花蜜饮合剂的质量控制,方法可靠、实用.     

His肽修饰小鼠IFNγ的制备

制备标记有6His的小鼠可溶性干扰素γ(Mouse interferon gamma,mIFNγ),为其功能研究提供更多实验基础.采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列,克隆于pUC19质粒,测序鉴定正确后亚克隆到pQE80L表达质粒载体中,经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定;利用SDS-PAGE和Western blot检测表达的目的蛋白,Ni2 -NTA亲和层析纯化重组蛋白,ELISA进行检测.结果RT-PCR扩增得到编码mIFNγ cDNA片段,测序结果正确,SDS-PAGE和Western blot分析显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了较高水平表达,mIFNγ占菌体蛋白的30%.Ni2 -NTA亲和层析纯化得到的mIFNγ蛋白纯度达到96%以上;ELISA检测出目的蛋白.结果证实重组蛋白mIFNγ被成功制备.     

肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子免疫抑制分子的表达及免疫原性分析

目的制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子（BAFF）突变体，并对其免疫抑制功能进行分析。方法经原核表达和Ni-NTA层析纯化制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性BAFF突变体；用所制备的重组蛋白免疫BALB／c小鼠，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中抗人BAFF抗体的滴度；四甲基偶氮唑蓝（MTTl）实验检测免疫小鼠血清抑制重组sBAFF和天然sBAFF功能的情况。结果重组蛋白在大肠杆菌中均获得了高效表达；经Ni-NTA层析纯化后，目的蛋白的纯度均达90％以上；用重组蛋白免疫小鼠均可诱导产生高滴度抗人可溶性BAFF抗体：免疫小鼠血清可抑制重组sBAFF和天然sBAFF刺激淋巴细胞增殖的功能。结论成功制备了可诱导产生高滴度特异性抗体的BAFF免疫抑制分子，为进一步探讨其治疗作用奠定了基础。