靶向bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和筛选

目的 构建能高效抑制肝星状细胞(HSCs)bcl-2表达的小发夹RNA(shRNA)重组质粒.方法 利用RNA干扰技术,设计有小发夹结构的3条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体psiRNA-hHlneo上构建重组质粒,予以酶切和测序鉴定.重组质粒转染HSC-T6细胞株,运用实时荧光定量PCR和Western blotting进行筛选鉴定.结果 酶切及测序鉴定表明,成功构建重组质粒shRNA1、shRNA2和shRNA3.实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,shRNA1和shRNA2转染后显著抑制HSC-T6中bcl-2 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),其中siRNA1的bcl-2表达抑制效率＞80%.结论 构建的重组质粒shRNA1能有效抑制HSCs中bcl-2的表达.实验为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了基础.     

肿瘤细胞减灭术联合腹腔热灌注化疗在结直肠癌腹膜转移中的应用现状及前景

正结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,在我国其发病率及死亡率仍呈上升趋势~([1])。腹膜转移是结直肠癌常见的转移形式,也是晚期结直肠癌病人死亡的主要原因之一。文献报道,结直肠癌确诊时同时合并腹膜转移的概率为5. 0%～15. 0%,而异时性腹膜转移的概率为20. 0%～50. 0%~([2-3])。传统观念认为,结直肠癌腹膜转移是疾病终末期,预后差,无外科手术治疗     

活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨活血消瘿片(Huoxuexiaoying Tablet)含药血清对大鼠甲状腺细胞FRTL-5增殖和凋亡的影响。方法:用SD大鼠制备活血消瘿片含药血清及空白血清;采用CCK-8法检测不同浓度活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞增殖活性的影响;按含药血清比例分为对照组和活血消瘿片含药血清低、中、高剂量组,加药作用24h后,采用流式细胞术检测活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞周期及凋亡的影响;采用Western blot法检测各组细胞中特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱天冬氨酸酶-3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、半胱天冬氨酸酶-9(Caspase-9)以及活化的Caspase-9(Cleaved-Caspase-9)蛋白的表达情况。结果:活血消瘿片含药血清呈浓度依赖趋势将FRTL-5细胞周期阻滞于G0/G1期;与对照组比较,各给药组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Western blot结果表明活血消瘿片含药血清低、中、高剂量组细胞中Cyclin D1、PCNA、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达量显著降低,Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞的增殖具有抑制作用,并可诱导其凋亡。其机制可能与抑制CyclinD1、PCNA的表达,促进Caspase-3、Caspase-9的活化有关。     

浅析《伤寒论》中的辩证法思想

《伤寒论》讲究把客观证候上升到理性来认识,处处立足于辨证论治,吻合辩证法思想,其辩证法思想主要体现在对立统一规律贯穿六经辨证,量变质变规律促使寒热转化,一切事物相互联系原理融会病证虚实错杂三方面.     

橘叶挥发油化学成分的气相色谱-质谱分析

目的:分析橘叶挥发油的化学成分。方法:采用水蒸汽蒸馏法提取橘叶挥发油,用气相色谱-质谱(GC/MS)联用法分析鉴定其化学成分,并应用面积归一法测定各成分的相对百分含量。结果:从橘叶挥发油中分离出50种化学组分,鉴定了其中34种,占总油量的83%。结论:橘叶挥发油中主要成分为β-榄香烯(19.96%)、石竹烯(10.27%)、石竹烯氧化物(8.78%)、[1R-(1a,3aβ,4a,7β)]-1,2,3,3a,4,5,6,7-八氢-1,4-二甲基-7-(1-甲基乙烯基)-薁(6.97%)、邻伞花烃(6.27%)等。     

不同产地个青皮高效液相色谱指纹图谱研究

目的 研究不同产地个青皮的高效液相色谱(HPLC)法指纹图谱. 方法用Aichrom Bond AQ C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm ,5 μm),乙腈和0.1%磷酸水为流动相,采用梯度洗脱,流速:1.0 mL&#8226;min^-1,柱温:30 ℃,检测波长:360 nm. 结果 建立HPLC指纹图谱共有模式,各产地个青皮药材质量有较好的相似性. 结论 该指纹图谱方法准确可靠,重复性好,可作为个青皮药材内在质量评价的依据.     

经预防性造口标本取出的腹腔镜直肠癌前切除术

目的评价经预防性小肠造口切口标本取出的腹腔镜直肠癌前切除术的安全性和可行性。 方法回顾分析13例中低直肠癌患者行术前同步放化疗,休息6至12周后行腹腔镜直肠癌低位前切除术联合末端回肠造口术,按TME原则行前切除术,远端肠管应用腔内型直线切割吻合器闭合切断,经右下腹纵切口3～4 cm将标本及近端直肠乙状结肠提出腹壁,清扫系膜淋巴结切除标本,镜下完成吻合,然后经右下腹切口完成预防性小肠造口。 结果13例患者均顺利完成手术,手术时间140 min(115～165 min),术中出血量27.7 ml(10～50 ml),进流食时间1.6 d(1～3 d),术后出院时间6.9 d(5～8 d),术后疼痛评分3.6(2.5～5),无手术死亡及严重并发症发生。 结论在需行预防性造口的腹腔镜直肠癌前切除术患者中,经造口切口标本取出手术方式是安全可行的。     

大鼠诱导多能干细胞向肝系细胞的诱导分化

目的本研究探讨利用诱导因子将大鼠诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)快速高效诱导分化为肝细胞样细胞(hepatocyte-like cells,HLCs)。方法利用诱导因子将iPSCs向肝系细胞方向分化,采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测培养20 d时细胞各种肝系细胞标志表达。结果培养分化20 d的iPSCs形成肝细胞样集落,表达肝系细胞特征性标志,并且具有尿素合成和糖原贮备能力。结论利用诱导因子可有效地将大鼠iPSCs诱导分化为HLCs,有望为细胞移植治疗各种肝脏疾病提供种子细胞。     

矿物药硼砂的近红外光谱快速定性定量研究

目的利用近红外光谱技术建立矿物药硼砂的快速定性定量分析模型,为硼砂的质量控制提供新的快速分析方法。方法采集各样品近红外光谱,以一阶导数为预处理方法,将正品硼砂样品的平均光谱作为参考光谱,在全谱段范围内计算所有样品光谱与参考光谱之间的相关系数,确定正品与非正品之间的相关系数阈值,建立硼砂的定性分析模型。所有正品硼砂均采用酸碱滴定法测定四硼酸钠的含量,并作为参考值,以矢量归一化加一阶导数17点平滑为预处理方法,在9 100～5 700 cm~(-1)谱段内,采用偏最小二乘法建立硼砂的定量分析模型。结果硼砂的定性模型,当相关系数(r)≥75.45%时为正品硼砂,当r75.45%为非正品硼砂,模型的预测准确率为100%。硼砂定量分析模型,在内部交叉验证中,RMSECV为0.36,R~2为99.06%,说明建模的效果好;在外部验证中RMSEP为0.37,R~2为98.99%,预测结果最大相对偏差为1.02%,平均相对偏差为0.57%,平均回收率为99.74%,说明模型的预测能力强。结论采用近红外光谱技术建立的硼砂定性定量模型效果良好,可以用于硼砂的快速定性定量分析。     

PTEN低表达和c-Met高表达激活AKT/mTOR信号通路促进肝细胞癌形成

目的 探究第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)低表达和细胞间质上皮转化因子(c-Met)高表达对肝细胞癌形成的影响及机制.方法 实时定量PCR和免疫组织化学染色分别检测肝癌患者组织样本中PTEN和c-Met的mRNA和蛋白表达,并分析PTEN低表达和c-Met高表达患者的生存曲线.高压尾静脉注射法将提...