人D-二聚体分离纯化及鉴定

目的 分离纯度较高和人D-二聚体(D-dimer),为制备抗人D-二聚体单克隆抗体提供可靠抗原.方法 以凝血酶、凝血因子Ⅻ等处理人纤维蛋白原,得到交联纤维蛋白,经纤溶酶消化,得到交联纤维蛋白降解产物(FDP);对FDP作Sephacryl S-300凝胶过滤层析和聚焦层析,分离纯化得到D-dimer.采用免疫比浊法测定D-dimer 含量、染料结合法测定纯化蛋白含量,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察D-dimer的纯化情况,Weston Blot法确认D-dimer的存在.结果 制备得到的FDP SDS-PAGE图谱显示有多条蛋白条带,1条分子量为180 ～250kD蛋白条带在Western Blot图谱中显示可以被D-dimer单克隆抗体特异性地识别.FDP经Sephacry S-300凝胶层析和聚焦层析后得到纯度较高的D-dimer(n=3):总蛋白含量比为(77.82±7.98)％,蛋白回收率(25.27±6.35)％;SDS-PAGE图谱显示:经过两步层析得到的终产物为分子量180～250 kD的蛋白;Westem Blot证实:经过Sephacryl S-300凝胶层析和聚焦层析处理,最终得到分子量为180～250 kD的终产物可被D-dimer单克隆抗体特异性识别.结论 采用Sephacryl S-300凝胶层析和聚焦层析能够分离纯化获得较高纯度的D-dimer,可作为制备D-dimer单克隆抗体的抗原.     

不同产地天麻中天麻素含量的测定

目的 测定不同产地天麻主要化学成分天麻素的含量.方法 采用RP-HPLC法.色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18( 150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05％磷酸水溶液(3:97);流速为1.0 mL/min;柱温为25℃;检测波长为220 nm.对贵州、陕西汉中、安徽大别山3种不同...     

抑郁模型大鼠海马组织中内质网应激调控因子的表达及β-细辛醚的干预作用

目的:研究抑郁模型大鼠海马组织中内质网应激调控因子的表达及β-细辛醚的干预作用,并探讨其相关的作用机制。方法:建立慢性轻度不可预见性应激刺激(CUMS)大鼠模型,将100只大鼠随机分为5组,分别为正常组,模型组,氟西汀组(10 mg·kg-1),β-细辛醚低剂量组(25 mg·kg-1)和高剂量组(50 mg·kg-1),每组20只,从造模第8天开始每天灌胃1次给药,连续21 d。于实验的第0天和第29天进行旷场实验;采用Nissl染色法观察各组大鼠海马组织神经元尼氏体的变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测各组大鼠海马组织蛋白激酶R样内质网激酶(PERK),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),钙网蛋白(CRT)mRNA表达情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测各组大鼠海马组织PERK,CHOP,CRT蛋白表达。结果:经28 d慢性不可预见性温和刺激后,模型组大鼠与正常组大鼠比较,水平运动和垂直运动得分明显减少(P0.05);β-细辛醚低、高剂量组和氟西汀组大鼠与模型组比较,水平运动和垂直运动得分明显增加(P0.05)。尼氏染色结果显示,模型组大鼠海马组织神经元细胞浆着色变浅,尼氏小体颗粒明显减少;β-细辛醚低、高剂量组大鼠海马区神经元形态相对较好,尼氏小体颗粒较模型组增多。模型组与正常组大鼠比较,PERK,CHOP,CRT mRNA表达上调(P0.05),与模型组比较,β-细辛醚低、高剂量组和氟西汀组中PERK,CHOP,CRT mRNA表达明显下调(P0.05)。与正常组比较,模型组大鼠PERK,CHOP,CRT蛋白表达均明显升高(P0.05);与模型组大鼠比较,氟西汀组、β-细辛醚低、高剂量组PERK,CHOP,CRT蛋白表达明显减少(P0.05)。结论:β-细辛醚可能是通过调节海马内质网功能发挥抗抑郁作用。     

Calcein-AM和Annexin V在流式细胞术检测早期细胞凋亡的敏感性比较

目的 比较Calcein-AM与Annexin V用于流式细胞术检测活细胞早期凋亡时的敏感性,建立新的检测细胞早期凋亡的方法。方法将人类急性T淋巴细胞白血病细胞株（Molt-4）经喜树碱（CPT）、紫外线（UV）诱导后,分别采用Calcein-AM及异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V（Annexin V）染色,然后用流式细胞仪分析凋亡率,通过比较诱导后不同时间点的凋亡率来分析Calcein-AM和Annexin V对于检测细胞早期凋亡的敏感性。结果在喜树碱诱导模型中,加药后2 h即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而3 h后才能用Annexin V检测到;在紫外线诱导模型中,照射后1 h即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而要在2 h后才能用Annexin V检测到。结论Calcein-AM用于检测活细胞早期凋亡比Annexin V更为敏感,是一种稳定、可靠、灵敏度高并且较为经济的检测细胞早期凋亡的活细胞染料。     

钙敏感受体对高糖诱导的肾动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨钙敏感受体(CaSR)对高糖诱导的肾动脉平滑肌细胞增殖的影响,并分析其与细胞外调节蛋白激酶1,2(ERK1,2)信号通路的相关性.方法 将对数生长期的肾动脉平滑肌细胞随机分为4组:正常组、模型组、干预-1组、干预-2组及干预-3组.干预-1组、干预-2组和干预-3组分别加入GdCl3(钙敏感受体激动剂)30μ...     

哈尔滨市城区和郊区儿童碘营养状况对比调查分析

为了解哈尔滨市2 0 0 1年儿童碘缺乏病状况,研究目前的食盐加碘水平对人群碘营养状况的影响。对哈尔滨城区和郊区2所小学8～10岁儿童碘营养现状进行调查分析。两地区居民户盐碘、儿童尿碘、智商、甲肿率4项指标均有显著差异,城区用户盐碘中位数高于郊区,且合格碘盐食用率高于郊区,从甲肿率看,两区均未达到碘缺乏病消毒标准。     

奉贤县产妇与婴儿麻疹免疫水平监测及当前麻疹控制对策

鉴于近些年本县小月龄婴儿及成人麻疹发病出现增多趋势,我们于1997年对1973-1975年出生的产妇及所生婴儿的麻疹免疫水平,以及6月龄婴儿的麻疹疫苗（MV）免疫应答反应,进行了血清学监测．结果：170对产妇及婴儿麻疹血凝抑制（HI）抗体阳性率分别为91．76％及93．53％,几何平均滴度（GMT）分别为1：7.53及1：8．54;139名出生时HI抗体阳性的婴儿,在6月龄时HI抗体阴转率达99．28％;31名6月龄婴儿免疫前HI抗体均＜1：2,免疫后1个月HI抗体阳转率达100％,GMT为1：20．01．鉴于上述监测结果及当前麻疹流行特征,作者建议将现行婴儿麻疹疫苗初免由8月龄提前到6月龄．对预防本县出现麻疹流行提出控制对策：使外省籍流动人口中20岁以下人群MV接种率应达80％以上;对散发病例的儿童接触者和暴发点周围30岁以下人群做应急接种;当发病率＞10/10万时,对流行波及范围内6-7月龄婴儿提前初免．     

奥沙利铂和5-氟尿嘧啶/醛氢叶酸双周疗法治疗晚期胃癌

目的评价奥沙利铂和5-氟尿嘧啶／醛氢叶酸双周疗法治疗晚期胃癌的疗效及安全性。方法26例晚期胃癌患者均有可评价的病灶，25例完成下例方案：奥沙利铂85mg／m^2及醛氢叶酸(LV)200mg／m^2(2小时静脉滴注)，随后5-氟尿嘧啶(5-Fu)400mg／m^2(10分钟静注)，5-Fu 600mg／m^2持续静脉输注22h，醛氢叶酸及5-Fu连用两天，每2周重复1次，每2次为1个疗程，所有患者至少接受2个疗程的治疗。结果完全缓解2例，部分缓解12例，总有效率56％(14／25)，中位缓解期3个月。无治疗相关死亡，主要不良反应为轻度的外周神经系统感觉障碍，恶心呕吐，白细胞及血红蛋白降低。结论奥沙利铂和5-氟尿嘧啶／醛氢叶酸双周疗法对晚期胃癌疗效确切，毒副反应轻，拓展了晚期胃癌患者化疗方案的选择。     

低位直肠癌全直肠系膜切除术后吻合口漏的预防和处理

目的 探讨低位直肠癌全直肠系膜切除术后吻合口漏的预防和治疗.方法 回顾性分析我科近5年142例低位直肠癌行直肠全系膜切除术的临床资料.结果 16%的病例同时行保护性肠造口术,术后吻合口漏发生率为6.3%,全部病例均通过经双套管持续冲洗低负压引流治愈.结论 TME手术常规行保护性肠造口术并无必要,对少数高危病例可能有价值.持续腹腔双套管抗菌素溶液冲洗、低负压吸引引流是治疗直肠癌术后并发吻合口漏的有效措施之一.     

咽痛灵喷雾液在全麻气管插管术后护理中的应用

气管内插管做为全麻的重要组成部分 ,不仅有利于防止异物进入呼吸道 ,更有助于麻醉期的呼吸道管理。但我们观察到全麻气管插管术后病人常易发生急性咽喉炎 ,表现为咽喉疼痛、水肿 ,声音嘶哑 ,痰液难以咳出而使病人易发生肺部感染和肺不张。[1] 既往克服办法是常规应用雾化吸入以缓解呼吸道症状 ,但效果不甚理想。鉴于此 ,我们用传统中药西瓜霜配合庆大霉素和地塞米松制成“咽痛灵”喷雾液用于全麻气管插管术后病人的护理 ,取得显著疗效。1　配制方法常规雾化液采用生理盐水 40ｍｌ、庆大霉素 8万Ｕ、α糜蛋白酶 5ｍｇ和地塞米松 5ｍｇ混匀配…