甲钴胺对SD大鼠坐骨神经损害后背根神经元的保护作用

目的:观察甲钴胺对坐骨神经损害后背根神经元病理形态改变的影响。方法:将30只SD大鼠分为正常对照组、模型组和甲钴胺组,每组各10只。以大鼠坐骨神经建立周围神经损害动物模型,以背根神经节病理切片(光镜、电镜)中的神经元变化情况为观察指标,考察甲钴胺对坐骨神经损害后神经元的影响。结果:4周后模型组神经元坏死率为(60.28±3.56)%,而甲钴胺组为(11.66±1.52)%,甲钴胺组明显低于模型组(P<0.01)。模型组4周时可见胞质、胞核大量空泡变性,内质网水肿明显,染色质聚集成块,分布不均,而甲钴胺组电镜观察胞膜、核膜比较完整,细胞器分布均匀,内质网无明显肿胀,总体观与正常对照组相似。结论:甲钴胺对坐骨神经损害后神经元有确切的保护作用。     

鬼臼毒素类物质生物活性的研究

目的：研究脱氧鬼臼毒素、β-阿朴苦鬼臼、鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒素共四种鬼臼毒素类似物对3龄初淡色库蚊幼虫和5龄初菜青虫的毒杀和抑制生长发育活性。方法：采用WHO生物测试法和小叶碟添加法分别测定四种类似物对淡色库蚊和菜青虫的毒杀和拒食活性。结果：①脱氧鬼臼毒素和β-阿朴苦鬼臼对淡色库蚊的毒杀作用较明显，致死中浓度（LC50）分别是0．00148和0．00168g／L。②四种化合物对淡色库蚊的生长发育有明显的抑制作用，与对照组相比，加药组的化蛹率相对较低。③脱氧鬼臼毒素、β-阿朴苦鬼臼和鬼臼毒素对菜青虫有毒杀作用，96h的LC50分别是0．0454、0．0782和0．1597g／L。4’-去甲鬼臼毒素对菜青虫的毒杀活性很弱。④四种化合物对菜青虫都有拒食活性，但前三种拒食活性较强，其拒食中浓度（AFC50）分别是0．0161、0．0187、0．0394和0．2739g／L。⑤四种化合物对菜青虫都有不同程度的抑制其生长发育现象，但作用的程度和方式不同，脱氧鬼臼毒素组的试虫全部死于5龄期，β-阿朴苦鬼臼毒素和鬼臼毒素的高浓度组不能化蛹，死于幼虫期，而4’．去甲鬼臼毒素组的试虫则表现出畸蛹等现象。结论：四种鬼臼毒素类似物对淡色库蚊和菜青虫毒杀和抑制生长发育活性之间的差异可能与结构上的差异有关。     

缺血性脑卒中相关危险因素的病例对照研究

目的评价传统与新型相关危险因素与缺血性脑卒中发病风险的关系。方法采用病例对照研究方法,在华东地区选择401例缺血性脑卒中病例,其中脑血栓形成158例,腔梗243例。和442例正常对照组人群。用问卷调查和体检的方式对缺血性脑卒中相关因素进行收集和分析。结果单因素分析显示:BMI,脑血管病家族史,既往史中的TIA、高血压、糖尿病、冠心病、肾脏疾病,目前血压值(包括收缩压和舒张压),血常规中的白细胞数、中性粒细胞比例,生化指标中的血糖、TG、HDL-C值均提示能增加缺血性脑卒中的发病风险(P0.05)。Logistic回归分析显示:TIA史、高血压、糖尿病、冠心病等既往史能显著增加缺血性脑卒中的患病风险。结论缺血性脑卒中需要采取综合干预措施。新的危险因素不容忽视。影响疾病发生发展的其它危险因素尚需要进一步探讨。     

东亚钳蝎毒素多肽对河豚毒素敏感型钠电流的作用

目的:蝎毒素是一种神经毒素,其对周围神经系统钠通道的作用尚不十分清楚,仍有许多疑题待研究.文中研究东亚钳蝎毒素多肽224(BmK224)对大鼠背根神经节(DRG)神经元电压依赖性河豚毒素敏感型钠电流(TTX-S INa)的影响.方法:分离单个DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术观察BmK224对TTX-S INa的影响.结果:BmK224浓度依赖性地抑制TTX-S INa,40μg/ml BmK224使TTX-S INa稳态激活和失活曲线都向超极化方向移动,复活时间延长.可激活通道数增加. 结论:BmK224影响钠通道激活失活过程的作用机制可能是所含的α-蝎毒素使钠通道构象发生改变.     

趋化因子受体4在神经胶质瘤中的表达及血管生成中的作用

目的:探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)在神经胶质瘤中的表达及在血管生成中的作用?方法:通过免疫组化法检测正常或神经胶质瘤患者的瘤体组织标本CXCR4?血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,其结果做方差分析及相关性分析;采用ELISA观察CXCR4的配体基质细胞衍生因子-1(stromal derived factor-1,SDF-1)对U87胶质瘤细胞系VEGF分泌的影响;同时利用多种处理方式(对照组?SDF-1处理组?CXCR4拮抗剂AMD3100处理组?CXCR4 RNA干扰处理组)作用于U87后,取其条件培养上清与人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养,比较小管样结构(tubule-like structure,TLS)生成数量的变化?结果:神经胶质瘤中CXCR4?VEGF的表达量随着肿瘤恶性度的升高而增加,且二者呈线性正相关(P < 0.01)?ELISA实验表明SDF-1可通过CXCR4促进VEGF的分泌(P < 0.01)?成管实验提示CXCR4与胶质瘤血管生成相关?结论:CXCR4与神经胶质瘤恶性度相关,且其配体SDF-1可通过CXCR4影响VEGF的表达,将CXCR4拮抗或干扰明显影响胶质瘤血管增生,提示CXCR4可能为神经胶质瘤的治疗提供相应靶点和思路?     

ERα基因敲除小鼠的繁育及子代小鼠基因型的鉴定

目的 探讨雌激素受体α(ERα)基因敲除小鼠的优化繁育方法及ERα基因敲除小鼠子代鼠的鉴定方法,建立ERα基因敲除小鼠模型,为进一步研究ERα蛋白的功能奠定基础.方法 用4种不同的交配方式观察子代鼠的各表型比率及雌、雄性ERα基因突变纯合子小鼠的繁殖能力;从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,用PCR方法扩增ERα基因片段,琼脂糖凝胶电泳后观察结果.HE染色观察雌、雄性ERα<''-/->小鼠生殖系统表型变化.结果 WT、ERα<''+/->、ERα<''-/->各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌、雄性ERα<''-/->小鼠无繁殖能力.与WT比较,雄性ERα<''-/->小鼠睾丸脏器系数降低,睾丸病理变化表现为生精小管管腔膨胀,生精细胞层变薄,且排列不规则;雌性ERα<''-/->小鼠子宫脏器系数降低,子宫和卵巢病变明显,表现为:子宫浆膜、肌层、内膜层细胞排列不规则,卵巢有囊性病变、充血,无黄体.结论 雌、雄性ERα<''+/->小鼠交配是繁育ERα<''-/->小鼠的较好方法;实验所用PCR方法能够精确鉴定ERα<''-/->小鼠,ERα<''-/->小鼠的获得为ERα蛋白功能的实验研究提供了较理想的动物模型.     

炔戊菊脂及其二氯衍生物毒性、诱变性与结构的关系

炔戊菊脂及其二氯衍生物为拟除虫菊酯类杀虫剂,两者化学结构相似。毒性试验两者皆有神经系统症状,如肌颤、抽搐及惊跳反应增强等。炔戊菊脂小鼠吸入4小时LC_(50)>20.00mg/l,经口LD_(50)5280～7940mg/kg,二氯衍生物2小时LC_(50)6.37mg/-l,LD_(50)68.1mg/kg。诱变性检测微核试验两者皆为阴性。Ames 试验炔戊菊脂在高剂量时TA_(100)/-S_g为阳性,而二氯衍生物则为阴性。本文表明炔戊菊脂类的毒性症状、LD_(50)、诱变性皆与化学结构有密切关系,如菊酸中的二甲基被二氯取代后则毒性升高,Ames 试验可能为阴性。     

东亚钳蝎毒素多肽对ＰＣ１２细胞膜电位的影响及其与钠通道的关系

目的:研究东亚钳蝎毒素多肽对PCI2细胞膜电位的影响及其与钠通道的关系.方法:分别用终浓度为10、20、40μg/ml的毒素多肽作用于荧光染料DiBAC4(3)标记的PC12细胞,在激光共聚焦显微镜上监测细胞膜电位的实时动态变化,并观察钠通道阻断剂TTX(tetrodotoxin)预处理对毒素多肽膜电位效应的影响.结果:加入毒素多肽后PC12细胞膜电位呈去极化改变,3 min后达到最大水平,5 min内趋于稳定.各浓度组毒素多肽作用细胞3 min后,所测得的标准化荧光强度值分别为1.375±0.048、1.504±0.034、1.839±0.022,和对照组相比差异均有显著性(P＜0.01).而1 μmol/L TTX与PC12细胞共孵育20 min后再加入40μg/ml毒素多肽所测值为1.035±0.028,与对照组相比无显著差异(P＞0.05),提示毒素多肽的膜电位效应可被TⅨ完全抑制.结论:东亚钳蝎毒素多肽可引起PC12细胞膜电位去极化,且其效应在一定范围内随浓度增加而增大,钠通道可能参与了这一过程.     

胞二磷胆碱对大鼠海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用

目的观察胞二磷胆碱对大鼠海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用。方法建立海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤模型,随机分为正常对照组、缺糖缺氧再灌注组、胞二磷胆碱干预组(1、10、100μmol/L),观察再灌注6、24h还原型谷胱甘肽含量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的改变;于再灌注24h检测海马神经元四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率,以及流式细胞术检测凋亡。结果与缺糖缺氧再灌注组相比,胞二磷胆碱于再灌注6h可明显提高谷胱甘肽(GSH)的含量及GPx的活性(P<0.05);于再灌注24h可增高MTT代谢率,提高GPx的活性及减少海马神经元凋亡(P<0.05)。结论胞二磷胆碱对海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤有明显的保护作用,其机制可能与改善神经元GSH含量、GPx活性及减少凋亡有关。     

甲基苯丙胺急性暴露对小鼠神经元的损伤作用研究

目的 探讨甲基苯丙胺(METH)急性暴露后引起神经元的损伤作用.方法 甲基苯丙胺给与小鼠后,对小鼠的刻板行为进行评分,通过Y水迷宫的方法评估小鼠空间记忆能力.分子水平,试剂盒法检测皮层区诱导型NO释放水平,利用Western-blot法观察神经元凋亡标志性蛋白Bax、Bcl2及Caspase 3表达水平.在细胞水平,利用彗星实验,观察甲基苯丙胺对原代培养神经元DNA的损伤情况.利用JC-1探针观察甲基苯丙胺对神经元线粒体膜电位的改变.此外,通过Western-blot法,阐述MAPKs通路在METH引起神经元损伤中的潜在作用.结果 METH显著增加小鼠的刻板行为,且明显降低小鼠空间识别能力.在分子层面,发现诱导型NO含量显著增高,相应凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3的表达增高,神经元细胞膜电位的下降.进一步研究发现,MAPKs在METH处理后,通路激活,磷酸化水平显著增高.预孵p38 MAPK抑制剂SB203580后,METH引起凋亡蛋白表达增高的趋势降低.结论 METH可多途径引起神经元损伤,激活MAPKs通路,而p38-MAPK可能参与了METH引起的神经元的损伤.