肝细胞癌组织中Glypican-3基因表达及其调控机制

目的：探讨肝细胞癌中Glypican-3（GPC3）基因表达及调控机制。方法:采用RT-PCR和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法分别检测48例肝细胞癌的癌组织、39例癌旁组织和31例正常肝组织中GPC3 mRNA的表达和基因突变；免疫组化S-P法检测GPC3、P53和PCNA蛋白的表达。结果:GPC3 mRNA在肝细胞癌的癌组织中的阳性表达率为77.1%，但其在癌旁和正常肝组织中不表达；肝细胞癌的癌组织中未发现GPC3基因突变；GPC3与P53蛋白表达无相关性（r＝-0.12574，P＞0.05），肝细胞癌的癌组织中GPC3 表达阳性和阴性的增殖细胞核抗原(PCNA)平均指数分别为（46.32±27.54）%、（39.83±21.47）%,P＞0.05。结论:肝细胞癌组织中GPC3 mRNA高表达与基因突变无关，没有直接影响P53和PCNA蛋白表达。     

组织薄片法在人原代肝癌细胞培养中的应用

【摘要】〓目的〓探讨组织薄片法在人原代肝癌细胞培养中的应用。方法〓分别运用组织薄片法和组织块法从人肝癌组织标本中分离培养原代肝癌细胞,分析两种方法培养成功率、细胞爬出时间、形态及GPC3的表达。结果〓薄片法培养成功率为66.67%,爬出细胞时间为(7.89±0.78)d,在培养第一代就能观察到形态规则的细胞且周围培养环境洁净;组织块法培养成功率为61.11%,爬出细胞时间为(7.56±0.73)d,在培养第二代能观察到形态规则的细胞。同时原代肝癌细胞和HepG2均能稳定表达GPC3。结论〓两种方法均能成功培养出原代肝癌细胞,但薄片法培养的细胞在形态及洁净程度上较组织块好,同时能稳定表达GPC3。     

胰腺癌细胞中Runx3基因表达及甲基化的研究

目的观察胰腺癌细胞中Runx3基因表达的情况,探讨其出现表达异常的机制。方法 (1)RT-PCR检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞及正常胰腺组织中Runx3mRNA表达情况(2)Western blotting检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中Runx3蛋白表达情况;(3)甲基化特异性PCR(MSP)检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、As-PC-1细胞及正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛的甲基化水平。结果 (1)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中未检测到Runx3基因mRNA表达,而正常胰腺组织可检测到Runx3基因mRNA表达;(2)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中未检测到Runx3蛋白表达;(3)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中Runx3基因启动子区CpG岛均发生甲基化,而正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛未检测到甲基化。结论胰腺癌细胞中存在Runx3基因失表达,其机制可能与Runx3基因启动子区CpG岛发生甲基化有关。     

Survivin和p53在肝癌中的表达及其关系

目的探讨Survivin在原发性肝细胞癌（HCC）组织中的表达及与p53的关系。方法采用Wcstern blot和RT-PCR检测43例肝癌组织、20例癌旁组织和11例正常肝组织中Survivin蛋白和mRNA的表达情况。免疫组化（SP法）检测Survivin和1353蛋白的表达情况。结果43例HCC标本中分别有30例表达Survivin（69．8％），而除1例癌旁组织外，其他癌旁组织和正常肝组织中未见Survivin表达。Survivin表达与肝癌组织的病理分级、临床分期等无明显相关。Survivin表达与1353表达亦无明显相关。结论Survivin在肝癌组织中高表达，Survivin的表达与p53基因的突变无明显关系。     

参附注射液预处理对大鼠肝缺血再灌注肠黏膜屏障的保护作用

目的 探讨参附注射液（SF）对大鼠肝缺血再灌注损伤肠黏膜的保护作用。方法选用健康雄性SD大鼠90只,阻断第一肝门建立肝缺血再灌注模型,随机分为假手术组（SO组）、0．9％氯化钠注射液（NS）对照组（IR＋Ns组）和参附注射液治疗组（IR＋sF组）,SO组和IR＋NS组于再灌注前用与SF注射液等量之NS注射预处理,IR＋sF组则用SF灌注前做预处理,每组30只。建立肝缺血再灌注模型后再分为6h和12h两个时相点组,每组15只。检测血浆内毒素含量、ALT、丙二醛（MDA）和统计肠系膜淋巴结细菌移位率,并用光镜观察肠组织的病理变化。结果细菌移位率、内毒素、ALT和MDA水平IR＋sF组均较1R＋Ns组低。结论参附注射液对肝缺血再灌注后的肠黏膜屏障损伤有保护作用。     

螺旋水刀在解剖性肝切除术中的应用

目的 探讨螺旋水刀在解剖性肝切除术中的应用价值.方法 对广东医学院附属医院2003年9月至2006年6月所实施的97例螺旋水刀解剖性肝切除病人的手术资料进行回顾性分析.结果 97例手术中有89例不需阻断肝门,断肝时间为15～45 min,断面处理时间为8～20 min,出血量在150～1200 ml之间(＜800 ml 93例,＞800 ml 4例);术中视野清晰,肝内管道系统暴露充分,未发生管道系统误损,术后B超监测未发现有重要血管损伤的表现;围手术期无死亡病例;术后肝功能恢复时间平均约为1周.结论 螺旋水刀解剖性肝切除术的应用是安全、可行的,能减少肝门血流阻断,减少术中出血量,缩短术后肝功能恢复时间.     

阻塞性黄疸大鼠法尼酯衍生物X受体表达及加味大柴胡汤作用的研究

目的:研究法尼酯衍生物X受体(FXR)对胆汁酸代谢的作用,以及加味大柴胡汤对FXR的表达的影响.方法:制作急性阻塞性黄疸大鼠模型,分为7、14、21 d 3个时段,每个时段又分为胆总管结扎 加味大柴胡汤组、胆总管结扎 TUDCA、胆总管结扎组 生理盐水组、假手术 生理盐水组等4组,每组6只.生化检测ALT、TB、TBA、ALP;免疫组化法检测FXR蛋白表达.结果:胆道梗阻后,随梗阻时间的延长,FXR表达减弱.血清TBA、ALT、ALP、TB含量明显增加.加味大柴胡汤使FXR表达上调,血清TBA、ALT、ALP、TB明显下降,肝脏病变减轻.结论:阻塞性黄疸时FXR表达可调节胆汁酸代谢.加味大柴胡汤可以上调FXR蛋白表达,促进胆汁酸代谢,从而减轻肝脏损害.     

Smac和Survivin基因在肝癌中的表达及与细胞凋亡的关系

目的探讨Smac和Survivin在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及两者在肝癌细胞凋亡中的作用和关系。方法免疫组织化学法检测50例肝癌组织、20例癌旁组织和15例正常肝组织中Smac和Survivin蛋白表达情况。逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测Smac和SurvivinmRNA表达情况。结果50例HCC标本中表达Smac有21例(42.0%),而除2例癌旁组织外,其他癌旁组织和正常肝组织中均见Smac表达;Survivin在癌组织、癌旁组织和正常肝组织中分别有46例、2例和0例表达;50例肝癌组织中Smac阳性率为40.0%(20/50),肝癌组织和非肝癌组织中Smac的表达差异具有统计学意义,Survivin在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中阳性率分别为90.0%(45/50)、10.0%(2/20)和0%(0/15),肝癌组织和非肝癌组织中Survivin的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Smac在肝癌组织中低表达,其表达和Survivin呈明显的负相关,两者可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环。     

糖尿病患者急腹症的围术期处理

目的探讨糖尿病患者急腹症的囤术期治疗。方法对我院2006年1月至2008年3月收治的65例糖尿病因急腹症需急症手术患者的围术期处理情况进行回顾性分析。结果本组术前确诊并存糖尿病58例,漏诊7例,漏诊率10．8％;合并糖尿病性昏迷4例;本组死亡4例,其中死于感染性休克1例,多器官功能衰竭1例,糖尿病性昏迷2例,病死率6．9％;术后脂肪液化致切口愈合不良3例,切口感染3例,腹腔脓肿2例,切口裂开1例。结论糖尿病患者急腹症手术易并发糖尿病性昏迷;保持围术期血糖浓度相对稳定、控制感染、合理营养支持是手术成功的关键。