RNA干扰抑制CYP3A4基因表达的实验研究

目的 研究质粒表达型短发夹RNA（small hairpin RNA，shRNA）对CHL-3A4转基因细胞的细胞色素P450 3A4（cytochrome P450 3A4，CYP3A4）基因表达的影响。方法设计并构建3条shRNA真核表达载体（CYP3A4Ⅰ、CYP3A4Ⅱ、CYP3A4Ⅲ）．脂质体转染CHL-3A4转基因细胞。转染48h后．TR-PCR和Western Blotting分别观察3条shRNA对CYP3A4mRNA和蛋白表达的影响；噻唑蓝（MTT）观察shRNA抑制环磷酰胺对CHL-3A4转基因细胞毒性作用。结果CYP3A4Ⅲ表达载体的shRNA分别能抑制CHL-3A4细胞的CYP3A4mRNA表达（70％）及蛋白表达（75％），抑制环磷酰胺对CHL-3A4细胞（75％）细胞毒作用。结论RNA干扰能显著抑制CYP3A4基因的表达，RNA干扰技术为肝细胞色素P450的研究提供了新的方法。     

经不同途径区域灌注氟尿嘧啶在肝癌、肝组织及血浆中的浓度差异

背景与目的:肝动脉、肝门静脉灌注区域化疗是肝癌的重要治疗手段,本研究探讨区域性灌注化疗时氟尿嘧啶(fluorouracil,5-FU)在大鼠肝癌和肝脏组织及血浆中的分布,为临床肝脏肿瘤化疗提供参考。方法:将24只荷瘤大鼠随机分为4组,分别经外周静脉(尾静脉)、肝动脉、肝门静脉或结扎肝动脉后经肝门静脉灌注5-FU,剂量为20 mg/kg。采用高效液相色谱法测定肝癌、肝脏组织及血浆中5-FU的含量,并计算药物在血浆、肝脏和肝癌组织间的穿透比率。结果:结扎肝动脉的肝门静脉组5-FU浓度在肝脏和肝癌组织中最高,分别为(22.1±9.5)μg/g和(16.4±7.2)μg/g;其次为肝动脉组;肝门静脉组5-FU浓度在肝癌组织中的浓度较低,为(8.9±3.7)μg/g;外周静脉组5-FU浓度在肝脏和肝癌组织中的药物浓度均为最低,肝癌组织中的浓度仅为(4.3±2.2)μg/g。在血浆中的5-FU浓度正好相反,外周静脉组浓度最高(26.8±12.5)μg/m L,肝动脉组(16.4±9.7)μg/m L、结扎肝动脉的肝门静脉组(15.9±10.1)μg/m L和肝门静脉组(14.9±8.5)μg/m L等3组浓度相近,均明显低于外周静脉组(P<0.05)。5-FU的肝癌/血浆穿透比率依次为结扎肝动脉的肝门静脉组(103.47%),肝动脉组(92.94%),肝门静脉组(59.58%)和外周静脉组(16.08%)。结论:与外周静脉注射全身化疗比较,区域性灌注化疗可显著提高肝癌和肝脏组织中的药物浓度,同时减少化疗药物在外周血中的分布,其中经结扎肝动脉的肝门静脉灌注和经肝动脉灌注是肝癌区域性化疗2种较好的途径。     

琥乙红霉素颗粒的人体生物利用度和生物等效性研究

目的研究琥乙红霉素颗粒在健康人体内的药动学与生物等效性。方法20例受试者随机交叉单剂量口服琥乙红霉素颗粒受试制剂或参比制剂各500 mg,以微生物法测定人体血浆药物浓度。结果受试制剂与参比制剂的药动学参数如下：T_(max)分别为(0．86±0．22)h和(0．80±0．13)h,C_(max)分别为(2．13±0．64)和(2．16±0．61)mg/L,t_(1/2)分别为(2．04±0．2)和(1．97±0．4)h,AUC_(?)分别为(4%±1．73)和(4．63±1．52)mg·h/L。受试制剂与参比制剂比较,相对生物利用度(F)为(109．1±22．8)%。结论经生物等效性检验,受试颗粒剂与参比颗粒制剂具有生物等效性。     

高效液相色谱法快速测定人血浆拉莫三嗪浓度

目的 建立快捷、灵敏、简便的高效液相色谱法(HPLC)测定拉莫三嗪(LTG)浓度,并应用于治疗药物浓度监测和药物相互作用研究.方法 以非那西丁为内标,检测波长为240 nm,使用Xterra MS C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)为分析柱,以醋酸乙酯 二氯甲烷-叔丁基甲醚(3:1:1)为萃取剂,流动相为甲醇:水(含20 mM醋酸铵盐)(35:65,V/V),流速为1 ml/min.结果 LTG线性范围在0.1 ～ 50 μg/ml范围内线性良好(r ＞0.999),提取回收率为77.42％～83.05％,批间批内RSD均小于10％.应用HPLC检测使用LTG的87例癫痫患者血浆样本,对日剂量和血药浓度建立简单线性回归方程进行分析,血药浓度个体间差异大,剂量决定力不强(R2 =0.340).结论 HPLC简便、灵敏,可用于临床药物监测和研究,以辅助LTG个体化治疗.     

氧氟沙星缓释片单次、多次给药人体药代动力学和生物等效性研究

目的：研究氧氟沙星缓释片单次、多次给药的人体药代动力学特征,并与氧氟沙星片比较其缓释特征与生物等效性。方法：单次给药20例健康成年男性受试者随机分组,自身双周期交叉对照,单次口服药物400mg;多次给药18例健康成年男性受试者随机分组,自身双周期交叉对照,多次口服药物（参比制剂400mg／2次／d×5d,受试制剂400mg／次／d×5d）。通过反相HPLC法测定血浆氧氟沙星浓度,采用非房室模型计算药代动力学参数,并进行统计分析。结果：单次给药参比制剂与受试制剂的Cmax分别为（5382±1558）、（3419±1034）μg／L;Tmax分别为（1．7±0．6）、（4．2±1．8）h;t1／2分别为（8．2±1．0）、（7．6±1．8）h;MRT分别为（8．6±0．9）、（10．3±1．4）h;AUC分别为（33764±5297）、（31280±4412）／zg·L-1·h;AUC分另别为（34643±5356）、（32642±4257）Frel为（97．9±12．4）％。方差分析显示,MRT各参数受试制剂与参比制剂差异具有统计学意义;各参数受试制剂与参比制剂差异无统计学意义。等效性检验显示,受试制剂与参比制剂90％可信限。为89．0％～97．0％;AUC为91．4％～97．8％。多次给药参比制剂与受试制剂的Cmax分别为（3732±1502）、（3564±982）μg／L;Cmax分别为（750±193）、（438±89）分别为（1．5i0．5）、（3．7±1．7）h;AUCss分别为（32689±4786）、（33591±7929）分别为（1362±199）、（1405±337）μg／L;DF分别为（216．1±76．5）、（221．5i33．9）％;F刊为（102．9±22．5）％。方差分析显示,AUCss、DF受试制剂与参比制剂差异均无统计学意义。等效性检验显示,909／6可信限Cmax为80．8％～114．6％;AUCss为89．3％～111．9％;为89．5％～112．4％;DF为93。7％～122．4％。结论：受试制剂氧氟沙星缓释片相对于参比制剂氧氟沙星片,单次给药具有缓释动力学特征及吸收程度生物等效,多次给药达稳态时具有生物等效性。     

HPLC法同时测定健康人血浆中贝那普利及其代谢物贝那普利拉的浓度

目的建立一种灵敏度较高的高效液相色谱法,可同时测定健康人血浆中贝那普利及其代谢物贝那普利拉的浓度。方法流动相用0.02mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液-乙腈(7∶3)(pH2.6),用取梯度洗脱法,血浆样本用C8固相小柱萃取,紫外检测波长为237nm。结果贝那普利:在0.06～2μg·mL-1,线性关系良好;最低检测限为0.03μg·mL-1;日内RSD≤6.3%,日间RSD≤4.0%;提取回收率在73%～78.5%(n=5),相对回收率在93.2%～101.3%。贝那普利拉:在0.06～2μg·mL-1,线性关系良好;最低检测限为0.03μg·mL-1;日内RSD≤8.5%,日间RSD≤6.0%;提取回收率在67.7%～74.1%(n=5),相对回收率在95.6%～103.2%。结论本方法灵敏度高、重现性好,可用于贝那普利人体生物利用度和药代动力学研究。     

中国健康汉族人孕烷X受体的基因多态性

目的研究中国健康汉族人孕烷X受体的基因突变情况,并与高加索人和非洲裔美国人突变频率进行比较。方法PCR扩增后直接测序。结果在中国汉族人未发现已报道的PXR*2,3,4突变,与非洲裔美国人的PXR*2,3的基因型频率比较有显著性差异;A11156C与T11193C突变基因频率分别为45.5%,41.5%,与高加索人和非洲裔美国人的基因频率比较有显著性差异。结论中国健康汉族人与高加索人、非洲裔美国人比较,突变基因频率均有明显种族差异。     

HPLC测定血浆中硝苯地平浓度及在Beagle犬体内的应用

 目的建立血浆中硝苯地平浓度的HPLC分析方法,并用此法检测硝苯地平在Beagle犬体内的药物浓度。方法选择尼群地平为内标,血浆经无水乙醚-正己烷(3:1)提取,采用Hypersil BDS C₁₈(4．6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水(1:1) (1%磷酸调节pH至3．5)为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,紫外检测波长为238 nm。2只Beagle犬服用硝苯地平30 mg后用此法检测其血药浓度。结果硝苯地平在2～200μg·L^-1线性关系良好(r=0．999 6),最低检测限为1μg·L^-1(S/N≥3)。提取回收率为77.6%～87.3%,相对回收率在90.5%～101.7%内;日内精密度RSD≤7.1%,日间精密度RSD≤2.5%。结论本方法简便、准确灵敏,重现性好,可用于硝苯地平的血药浓度分析及进行药动学和生物等效性实验研究。     

SLCO1A2、SLCO2B1及SLCO1B1的单核苷酸多态性与丙戊酸抗癫痫疗效的相关性研究北大核心CSCD

目的考察转运体基因溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1A2(SLCO1A2)、SLCO2B1及SLCO1B1的单核苷酸多态性(SNPs)与丙戊酸抗癫痫疗效的相关性。方法纳入单用丙戊酸的癫痫患者,根据随访期内的发作控制情况将患者分为有效控制组和未有效控制组。用MassARRAY平台对患者SLCO1A2 rs4149000、SLCO2B1 rs2306168、SLCO2B1 rs12422149及SLCO1B1 rs4149056进行基因分型,分析不同基因型与丙戊酸抗癫痫疗效的关系。结果SLCO1A2 rs4149000 CC/CT+TT基因型在有效控制组和未有效控制组的分布分别为102/26和48/4;在共显性模型下,SLCO2B1 rs12422149 GG/GA/AA基因型在有效控制组和未有效控制组的分布分别为61/50/17和33/19/0;同时,SLCO1B1 rs4149056 TT/TC/CC基因型在有效控制组和未有效控制组的分布分别为92/32/4和48/4/0,以上基因型在有效控制组和未有效控制组中的分布差异均有统计学意义(均P<0.05)。其中,rs12422149和rs4149056被纳入多因素Logistic回归方程,rs12422149 GG型(OR=2.295,P<0.05)及rs4149056 TT型(OR=5.201,P<0.05)患者丙戊酸疗效较差,2个位点共同解释59.6%的丙戊酸耐药的个体差异。结论SLCO2B1 rs12422149野生型(GG型)和SLCO1B1 rs4149056野生型(TT型)更容易发生丙戊酸耐药。