噬菌体展示耐药突变HIV-1蛋白酶敏感切割位点六肽随机文库的构建

目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化,再将重组CAP2片段和NC片段拼接克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANT-AB5S上,建立HIV-1蛋白酶靶蛋白切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为2.6×106,滴度为4.1×1015TU·L-1,CAP2片段插入率为47.8%;序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论成功地构建HIV-1蛋白酶的敏感切割序列噬菌体筛选文库,为筛选到突变PR敏感切割序列噬菌体及研究耐药HIV-1蛋白酶抑制剂与突变PR的关系打下基础。     

高效液相色谱法测定长寿长乐口服液中五味子乙素含量

目的建立长寿长乐口服液的五味子乙素含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法,色谱柱为Lichrospher 5-C18柱（200mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇-水（72：28）,流速1．0mL／min,柱温35℃,检测波长254nm。结果五味子乙素进样量在0．234～2．223μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0．9999（n=5）,平均回收率为99．42％,RSD为1．09％（n=6）。结论HPLC法简便、准确,可用于长寿长乐口服液的质量控制。     

SPA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选

目的 使用人免疫球蛋白G( IgG)对金黄色葡萄球菌蛋白A( SPA)单结构域突变体组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同突变体组合的特异结合优势,探索优势组合分子结构与功能间的关系. 方法 通过 Overlap PCR获得SPA中A和C单结构域突变体片段组合构成的噬菌体文库,再使用人IgG对文库进行体外亲和筛选,期望通过对特定结合分子的定向改造及体外进化获得具有高结合优势的组合分子. 结果 成功构建符合体外筛选要求的SPA单结构域A在29、30位氨基酸定点突变文库( A1 )、SPA单结构域C在36、37位定点突变文库( C1 )和SPA单结构域A在37位后插入3个氨基酸随机肽( AI37 )、SPA单结构域C在20位后插入3个随机连接肽( CI20 ) ,将A1、C1随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库A1C1,将AI37、CI20随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库AI37 CI20. 两个文库各自经过4、5轮亲和筛选,文库进化完全.Phage-ELISA高光密度值的单克隆,测序结果分析为A(Q29K30) A(I29I30)和AI-TQS A. 结论 通过定向改造技术获得了高结合能力的定点突变分子A(Q29K30) A(I29I30)和插入突变分子AI37-TQS A,为Ig结合分子的定向改造及具有新的Ig结合特性的重组Ig结合分子的进一步研究奠定了基础.     

半环式外固定架与单臂式外固定架在治疗胫腓骨骨折中的疗效对比

胫腓骨粉碎性骨折在煤矿事故中较为多见，通常伴有严重的软组织损伤，骨折范围较大，治疗相对棘手。我院2004-2007年采用外固定架治疗胫腓骨骨折取得了良好的效果，现报告如下。     

缺血性中风治疗方法探讨

<正>缺血性中风是指供应脑部血液的颅外或颅内动脉发生闭塞性病变,造成脑组织缺血缺氧,出现一系列的急性临床症状,若未能及时恢复供血,神经细胞、胶质细胞和血管将会坏死,形成脑梗死,包括脑血栓形成和脑栓塞。按照病理生理演变过程,临床上将缺血性中风分为超早期,为发病的6小时内;早期,为发病     

门诊宫腔镜检查对患者心理弹性的影响因素及针对性护理干预效果

目的 探讨门诊宫腔镜检查患者心理弹性的相关影响因素及针对性护理效果。方法 选择80例行宫腔镜检查患者,所有患者开展心理弹性调查问卷（CD-RISC）、简单应对方式问卷（SCSQ）及领悟社会支持量表（PSSS）,分析其心理弹性的相关影响因素,并根据相关因素制定针对性护理方案,比较护理前后患者焦虑自评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）及护理满意度。结果 年龄>50岁患者心理弹性、积极应对、消极应对及社会支持评分低于<30岁、30～50岁年龄阶段,差异有统计学意义（P<0.05）。初中学历患者心理弹性、积极应对、消极应对及社会支持评分均低于高中、大学及以上患者,差异具有统计学意义（P<0.05）。居住乡村患者心理弹性、积极应对、消极应对和社会支持评分均低于居住城镇患者,差异具有统计学意义（P<0.05）。护理后患者护理满意度90.0%高于护理前70.0%,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 在门诊宫腔镜检查中,明确影响心理弹性的相关因素,并展开针对性护理措施,可改善患者负面情绪,提高护理满意度,促使其从中受益,值得深入探讨和研究。     

用兔IgG筛选噬菌体展示免疫球蛋白结合分子组合文库

目的 应用噬菌体展示免疫球蛋白(Ig)结合分子组合文库,进化筛选获得与兔IgG结合的代表性序列,测定其与兔IgG及人IgG结合活性的差异,以判断筛选获得的代表性序列对不同种属Ig的结合是否存在倾向性的差别.方法 应用包含Ig效应子结合蛋白Protein A的D结构域(PA-D)、A结构域(PA-A),Protein G的B2结构域(PG-B2)及protein L的B3结构域(PL-B3)的单结构域随机组合文库,以兔IgG对该组合文库进行进化筛选,序列比较分析筛选获得的代表性序列与人IgG进化筛选文库所得代表性序列的异同性;用ELISA和竞争抑制试验分别测定阳性噬菌体克隆与兔IgG及人IgG的结合活性.结果 以兔IgG经4轮分子进化筛选,获得在天然细菌蛋白中不存在的新的结构形式PA-A-PA-A,该结果与人IgG进化筛选所得代表性序列PA-A-PG有显著差异;兔IgG筛选序列PA-A-PA-A和人IgG筛选序列PA-A-PG分别显示出与兔Ig和人Ig结合力更强的特性.结论 该研究首次应用噬菌体展示技术研究不同种属抗体效应子构象的不同,证实兔IgG和人IgG两者效应子构象之间确实存在差异.这一结论有助于阐明抗体效应子构象在不同种属之间的差异性.     

复方氨林巴比妥注射液致过敏性休克死亡1例

通过对复方氨林巴比妥注射液过敏性休克致死1病例的分析,旨在提示医务工作者在安全合理用药上引起重视。     

HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

目的 构建HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌E.coli B121(DE3)中进行高效表达和纯化.方法 应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(AC)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定.结果 构建了pET32a-Tat(cn)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17 mg/nd,相对分子质量为31 ku.间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应.结论 成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1 Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1 Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论.     

3 851名女职工乳腺疾病普查结果分析

乳腺疾病是妇女常见病、多发病,对妇女的身心健康有较大的影响,乳腺癌的发病率日益增高,已跃居妇女恶性肿瘤的首位,早发现和早治疗对妇女的健康十分重要[1]。我院于2006年7月至10月对阳泉煤业集团3851名女职工进行了乳腺疾病普查工作,结果分析如下。1对象与方法1·1对象:普查对