中药复方对戊四氮致痫大鼠海马mGLuR1表达的影响

目的：观察戊四氮（PTZ）致痫大鼠海马神经元代谢型谷氨酸受体（mGluR1）表达以及中药复方AAP的脑保护作用。方法：动物随机分为6组,复制戊四氮致痫大鼠模型;于致痫后12h、2d、5d、7d相应时间点取材,制备脑标本;免疫组化技术检测大鼠海马神经元mGluR1表达。结果：与正常组比较,模型组mGluR1免疫反应阳性表达增加,差异显著（P〈0.05）;与模型组及丙戊酸钠组比较,中药复方AAPl、AAPm、AAPs组海马CA3区mGluR1阳性表达水平降低,差异显著（P〈0.05）。结论：戊四氮致痫大鼠海马mGluR1表达增加,mGluR1可能在PTZ致大鼠癫痫发作中起作用;中药复方AAP可降低mGluR1表达,对癫痫大鼠有脑保护作用。     

人类肥胖相关新基因LYRM1真核表达载体的构建及稳定转染3T3-L1细胞系的建立

目的:构建人LYRM1基因的真核表达载体,转染3T3-L1前体脂肪细胞,建立稳定过表达人LYRM1基因的3T3-L1前体脂肪细胞系.方法:运用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到真核表达载体pcDNATM3.1/myc-His B,脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的3T3-L1前体脂肪细胞系,并利用Western blot方法鉴定其表达.结果:PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确.建立了稳定转染LYRM1的3T3-L1前体脂肪细胞,成功地表达目的基因.结论:LYRM1真核表达载体的成功构建及稳定转染3T3-L1细胞系的建立为进一步研究其功能奠定了良好的实验基础.     

miR-181a促进人子宫内膜间质细胞蜕膜化催乳素的表达

目的目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蜕膜化过程中作用的研究报道较少,文中调查孕鼠围着床期子宫组织中miR-181a的表达规律,并探讨miR-181a对人子宫内膜间质细胞(human endometrial stromal cell,hESC)体外诱导蜕膜化过程中蜕膜化标志基因蜕膜化催乳素(decidual prolactin,dPRL)表达的调控作用。方法收集怀孕0～6.5 d孕鼠子宫组织,采用TRIZOL法提取总RNA,通过实时定量PCR检测子宫组织中miR-181a的表达。制备Ad-miR-181a重组腺病毒,并感染hESC,24 h后采用0.5 mmol/L 8-Br-cAMP和1μmol/L Medroxyproges-terone(MPA)联合进行体外蜕膜化诱导培养;通过化学发光免疫法和实时定量PCR分别检测细胞培养液上清中dPRL的浓度与间质细胞中催乳素(prolactin,PRL)mRNA的表达;同时采用荧光素酶报告基因检测miR-181a对hESC中dPRL(-332/+65)启动子的调控作用。结果早孕小鼠子宫组织中miR-181a的表达高于非妊娠小鼠子宫,且随着妊娠天数的增加呈逐渐上升的趋势,在小鼠着床"窗口期"即孕4.5 d达到高峰(2.60±0.15倍,P<0.01,n=5),孕5.5 d子宫miR-181a的表达开始平稳下降;成功获得滴度为5.19×1010ifu/ml的miR-181a腺病毒,该腺病毒介导的miR-181a过表达显著增加hESC蜕膜化标志基因dPRL mRNA表达水平,增高超过8倍(P<0.01);在8-Br-cAMP和MPA联合诱导hESC体外蜕膜化时,高表达miR-181a可明显增加8-Br-cAMP联合MPA诱导的PRL mRNA表达水平与PRL蛋白分泌(P<0.01)。荧光素酶报告基因进一步证实miR-181a可以激活dPRL(-332/+65)启动子的活性达到2倍(P<0.05)。结论 miR-181a参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控。     

抗痫制剂对癫痫模型小鼠学习记忆变化的影响

目的 探讨抗痫制剂对戊四氮致痫小鼠学习、记忆力改变的影响。方法 健康成年雄性小鼠60只,随机分为空白对照组,模型对照组,抗痫制剂大剂量组、中剂量组、小剂量组和丙戊酸钠组,每组10只。抗痫制剂大、中、小剂量组小鼠分别以抗痫制剂 14.8mg/g、7.4mg/g和3.7mg/g灌胃,每天1次,连续7d;复制戊四氮诱导急性癫痫模型;水迷宫测定抗痫制剂对致痫小鼠学习和记忆力的影响。结果 与空白对照组相比,模型对照组小鼠逃避潜伏期延长,行程出错率增加(P<0.05);与模型对照组和丙戊酸钠组相比,抗痫制剂大、中、小剂量组小鼠逃避潜伏期缩短、行程出错率减少(P<0.05)。与模型对照组相比,丙戊酸钠组小鼠逃避潜伏期、行程出错率均值虽增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 模型对照组和丙戊酸钠组小鼠学习、记忆力降低;抗痫制剂能缩短模型小鼠水迷宫逃避潜伏期,减少行程出错率,明显改善致痫小鼠学习记忆能力。     

供卵玻璃化冷冻复苏与解冻夫精行卵细胞胞质内单精子注射后足月分娩1例

人类卵母细胞冷冻保存技术是目前辅助生殖领域的研究热点和难点.自1986年Chen[1]首次报道人成熟卵冻融后成功分娩以来,卵细胞冻融技术已探索了20年,研究进展缓慢,迄今为止没有公认的成熟的卵细胞冻融方案.临床卵子来源困难,也限制了该技术在临床的应用.     

应用神经肽Y Y5受体反义基因治疗肥胖大鼠高Leplin血症效果的探讨

目的：探讨神经肽Y Y5（NPY Y5）受体反义基因治疗对肥胖大鼠高Leptin血症的改善作用及其机制。方法：建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型，侧脑室插管后注射NPY Y5受体反义、正义、错义寡核苷酸或生理盐水，观察大鼠腹膜后与生殖器周围脂肪组织温重的变化，并采用ELISA双抗体夹心法测定血清Leptin水平、放免法测定血清胰岛素水平。结果：①高营养饮食诱导的肥胖模型大鼠血清Leptin水平、血清胰岛素水平、腹膜后脂肪湿重明显高于正常大鼠；②经NPY Y5受体反义寡核苷酸干预后，肥胖大鼠血清Leptin水平、血清胰岛素水平、腹膜后脂肪组织温重间均存在一定的正相关关系。结论：侧腔室注射NPY Y5受体反义寡核苷酸可显著改善肥胖大鼠的高Leptin血症，推测其机制可能与大鼠进食行为改变、腹膜后脂肪组织减少、血清胰岛素水平下降等因素有关。     

薄型子宫内膜患者冻融胚胎移植周期17β雌二醇、人绝经期促性腺激素及他莫昔芬三种内膜准备方案临床结果比较

目的通过比较17β-雌二醇,人绝经期促性腺激素及他莫昔芬三种常用内膜准备方案的临床效果,拟探寻适合薄型子宫内膜患者的内膜准备方法。方法回顾性分析2015年1月至2016年10月于我中心行冻融胚胎移植的薄型子宫内膜患者427例,其中激素替代组(HRT组):123例;人绝经期促性腺激素(HMG)刺激组:155例;他莫昔芬(TAM)刺激组:149例。比较三组间冻融卵裂期胚胎移植周期内膜厚度、临床妊娠率、种植率、早期流产率、宫外孕率。结果HMG组[(8.1±1.6)mm]与TAM组[(8.2±1.6)mm]内膜显著厚于HRT组[(6.8±0.4)mm],(P0.05)。临床妊娠率、胚胎种植率、早期流产率及宫外孕比率三组无统计学差异(P0.05),但HMG组及TAM组的临床妊娠率、种植率略高于HRT组,早期流产率及宫外孕率略低于HRT组,以HMG组较为显著。HMG组的多卵泡发育比率显著高于TAM组(9.7%vs.0%,P0.05)。结论薄型子宫内膜患者冻融胚胎移植,可尝试使用HMG、TAM刺激方案准备内膜,该方案可轻度提高胚胎种植率,降低宫外孕率,但OHSS高风险患者需慎用HMG方案。     

不同年龄女性行体外受精-胚胎移植妊娠及产科结局

目的:探讨不同年龄女性接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的妊娠及产科结局,并为不同年龄女性推荐更合理的助孕策略。方法:将2002年1月~2005年5月1 301例行IVF-ET的女性按年龄分为5组:≤25岁,26~29岁,30~34岁,35~39岁和≥40岁。回顾分析各年龄组的妊娠及产科结局。结果:种植率及妊娠率随年龄增加而降低(各组分别为40.8%、39.7%、33.8%、29.6%、13.9%和58.2%、60.0%、52.3%、45.7%、29.41%,P<0.05)。流产率随年龄增加而增加,≥40岁组的流产率为26.7%,显著高于其他组(P<0.05)。总的多胎发生率为44.5%,5组比较有显著性差异(P<0.05)。≥40岁组多胎率为6.7%,其他组都在40%以上,≤25岁组高达57.9%。各年龄组在产科结局方面(早产率、孕周、新生儿体重、剖宫产率等)无显著性差异(P>0.05)。结论:随着年龄的增加,种植率、妊娠率及多胎率逐渐降低,而流产率逐渐增高,40岁后这种变化更为显著。选择合适的促排卵方案及提高卵子质量,可能有助于改进高龄女性的妊娠结局。而对于年轻女性,应根据移植胚胎的质量制定个体化移植方案,尽可能降低多胎妊娠率而不影响总的临床妊娠率。     

P300/CBP相关因子(PCAF)表达水平对人子宫内膜间质细胞增殖的影响

目的:观察P300/CBP相关因子(P300/CBP associated factor,PCAF)对人子宫内膜间质细胞增殖的调控作用。方法:通过Western blotting、实时定量PCR及Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖实验,观察分析Ad-FLAG-PCAF重组腺病毒介导的PCAF过表达及PCAF-siRNA介导的PCAF低表达对体外培养的人子宫内膜间质细胞增殖的影响。结果:获得滴度为8×1010ifu/ml的重组Ad-FLAG-PCAF腺病毒,转染体外培养的人子宫内膜间质细胞后,可有效介导细胞内FLAG-PCAF融合蛋白的高表达;而转染PCAF特异的siRNA后,可有效抑制人子宫内膜间质细胞中PCAF的表达。PCAF过表达的人子宫内膜间质细胞中,其细胞周期标志蛋白cyclinD1和cyclinD3的表达水平显著降低(P<0.05),而PCAF低表达的人子宫内膜间质细胞中,其cyclinD1和cyclinD3的表达水平显著升高(P<0.05);此外,CCK-8实验结果显示,PCAF过表达能显著抑制由雌、孕激素共同刺激所引起的人子宫内膜间质细胞的增殖,而基因沉默人子宫内膜间质细胞中内源性PCAF的表达后,间质细胞的增殖增加>20%(P<0.05)。结论:PCAF可能通过蛋白乙酰化修饰作用,参与调控人子宫内膜间质细胞的增殖过程。     

Assessment of the clinical effect of Chinese medicine therapy combined with psychological intervention for treatment of patients of peri-menopausal syndrome complicated with hyperlipidemia

<正>Objective:To observe the effect of Chinese medicine therapy combined with psychological intervention(combined therapy) on the clinical symptoms and levels of blood lipids and sex hormones of patients of peri-menopausal syndrome complicated with hyperlipidemia.Methods:With the use of a randomizing digital table method,185 patients that fit the registration standard were randomly assigned to three groups.The 59 cases in Group A were treated with two Chinese patents,Kunbao Pill(坤宝丸) and Modified Xiaoyao Pill(加味逍遥丸);the 63 in Group B received psychological intervention alone;and the 63 in Group C were treated with both(the combined therapy),with the treatment course for all six months.The items of observation included: (1) scoring by SCL-90 on eight factors and seven symptoms;(2) scoring on Chinese medicine symptoms by Kupermann scale,including anxiety and bad temper,scorching sense ation with sweating,dizziness,tinnitus, soreness and weakness of the loin and knees,palpitation,insomnia,lassitude,weakness,and hyposexuality; (3) blood contents of total cholesterol(TC),triglyceride(TG),high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C), low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C),apoprotein Al(ApoAl) and B(ApoB);(4) levels of sex hormones, including estradiol(E_2),progesterone(P),pituitary prolactin(PRL),follicular stimulating hormone(FSH),and luteinzing hormone(LH) in some randomly selected patients;(5) adverse reaction;and(6) one-year follow-up study on long-term effect.Results:A total of 21 patients(6,8,and 7 cases in Groups A,B,and C,respectively) dropped out;the drop-out rate was insignificant among groups.(1) The markedly effective rates in Group A, B,and C were 26.42%(14/53),18.18%(10/55),and 53.57%(30/56),respectively,and the total effective rates in them were 64.15%(34/53),50.91%(28/55),and 87.50%(49/56),respectively,suggesting the therapeutic efficacy in Group C was significantly better than that in Groups A and B(P0.01).(2) SCL-90 scoring showed that the total scores decreased significantly after treatment in Group C(P0.01),but remained unchanged in Groups A and B(P0.05).(3) Scoring on Chinese medicine symptoms showed the same results as shown by SCL-90 scoring in terms of total scores and individual symptoms,except that menstrual disorder and amenorrhea were unchanged in all three groups(P0.05).(4) Levels of HDL-C,ApoAl,and E_2 increased and those of TG,TC,LDL-C,ApoB,FSH,and LH decreased after treatment in Group C,reaching near normal levels;similar trends of blood lipids were shown in Group A,but the level of sex hormones was unchanged.In Group B all the above-mentioned indices were unchanged(P0.05).(5) A one-year follow-up study showed the markedly effective rate and the total effective rate in Group C were higher than those in the other two groups respectively(P0.01).(6) No adverse reaction was found.Conclusion:Chinese medicine therapy combined with psychological intervention could not only improve the nervous symptoms,but also regulate the blood levels of lipids and sex hormones in patients of peri-menopausal syndrome complicated with hyperlipidemia.