排序方式: 共有42条查询结果,搜索用时 406 毫秒
31.
流式细胞术诊断疟疾的初步应用 总被引:2,自引:2,他引:0
目的利用流式细胞术检测疟原虫感染患者的血液红细胞,建立疟疾诊断的辅助方法。方法采集镜检确诊的疟疾患者血样,同时设正常人血样为阴性对照,通过DRAQ5单染色,利用流式细胞仪进行检测。结果正常人全血、加有DRAQ5荧光染料的正常人全血、未加DRAQ5染料的疟疾患者血样的SSC/FL3-H散点图中未发现有染料标记的红细胞;而在疟原虫感染的患者血样中,有染料DRAQ5标记的细胞被检出。结论流式细胞术可以作为一种新的疟疾辅助诊断技术。 相似文献
32.
目的观察日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化,筛选调节性T细胞功能抑制因子。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用流式细胞分析法检测不同感染阶段小鼠体内调节性T细胞水平;通过检测小鼠血清中细胞因子的水平变化,观察免疫反应的极化过程;采用磁珠分离法纯化小鼠脾脏的调节性T细胞,人工设计合成2条寡核苷酸(CpG1-ODN,CpG2-ODN),通过淋巴细胞增殖试验筛选能逆转调节性T细胞功能的刺激因子。结果流式细胞分析发现,随着血吸虫感染进程的发展,小鼠外周血及脾脏调节性T细胞水平逐渐增加,免疫反应逐步向Th2型极化,血清IL-5水平增加,IFN-γ下降。淋巴细胞增殖试验显示,人工合成的寡核苷酸(CpG2-ODN)能有效刺激淋巴细胞增殖,使淋巴细胞的IL-2分泌增加,TGF-γ下降,并能解除调节性T细胞对效应T细胞增殖的免疫抑制作用。结论血吸虫感染可增加小鼠体内调节性T细胞水平,诱导免疫反应向Th2型极化。寡聚核苷酸CpG2-ODN能逆转调节性T细胞的免疫抑制功能。 相似文献
33.
目的探讨使用低剂量环磷酰胺对血吸虫感染免疫的影响。方法小鼠经腹腔注射低剂量环磷酰胺(50mg/kg),在体内创造并维持一个Th1型免疫环境。观察小鼠外周血、脾脏调节性T细胞水平及血清细胞因子的动态变化。采用半定量逆转录聚合酶链反应检测经环磷酰胺处理的调节性T细胞上Foxp3基因表达水平。用(30±1)条血吸虫尾蚴感染处于Th1型免疫反应状态小鼠,42d后剖杀,计算减虫率、减卵率,通过组织切片观察小鼠肝脏组织病理变化。结果低剂量环磷酰胺可以降低小鼠外周血、脾脏中的调节性T细胞水平,并下调Foxp3的表达,使小鼠血清IL-2、IFN-γ上升,IL-4、IL-10及TGF-β水平下降,免疫反应向Th1型转变。与对照组相比,用药组的血吸虫虫卵产量明显下降,小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变明显减轻。结论低剂量环磷酰胺可调节小鼠的免疫反应朝Th1发展,可以降低血吸虫虫卵产量,并减轻肝脏虫卵肉芽肿病变。 相似文献
34.
目的制备可溶性重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3(rSj14-3-3),并研究其免疫学特性。方法采用反转录聚合酶链反应方法从日本血吸虫成虫mRNA中制备Sj14-3-3基因cDNA片段,将此cDNA片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-3的谷胱甘肽还原酶的基因下游,构建重组表达质粒Sj14-3-3/pGEX-4T-3。重组质粒转化大肠埃希菌BL21,转化子细菌采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导,表达产物经SDS-PAGE以观察重组GST-Sj14-3-3表达情况。GST-rSj14-3-3经凝血酶消化后,经过Glutathione Sepharose-4B胶亲和层析制备纯化的rSj14-3-3。rSj14-3-3免疫家兔制备免疫兔血清,经免疫印迹试验分析rSj14-3-3免疫原性和反应性。结果日本血吸虫江苏株Sj14-3-3蛋白基因编码序列被成功克隆,开放阅读框的DNA序列与基因库中的登录序列同源性为99.08%。构建的含Sj14-3-3蛋白基因的重组表达质粒经IPTG诱导能表达分子量约为55 kDa的融合蛋白,融合蛋白经凝血酶切割和亲和层析获得纯化的rSj14-3-3。rSj14-3-3能诱导家兔产生高效价的特异性抗体,该抗体可识别重组和天然的14-3-3蛋白。结论本研究成功制备了可溶性rSj14-3-3,其具有良好的免疫原性与反应性。 相似文献
35.
36.
目的 分析弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组学变化。方法 16只同窝配对的C57BL/6J小鼠, 随机分成弓形虫急性感染组和对照组, 每组8只。弓形虫急性感染组每鼠腹腔感染经CF?11纤维素纯化的RH株弓形虫速殖子 (1×104 /ml) 0.2 ml, 对照组每鼠腹腔接种0.2 ml 灭菌生理盐水。感染后4 d, 处死全部小鼠, 应用弱阳离子 (WCX) 纳米磁性微球捕获小鼠血清蛋白, 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (MALDI?TOF?MS) 技术检测两组小鼠血清蛋白质变化, 并采用Au? toflex analysis 与Clin ProTools 软件进行分析与比较。结果 在分子量为1 000~16 000 Da区段, 与对照组小鼠血清蛋白指纹图谱比较, 弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质谱有13种蛋白表达差异有统计学意义, 其中9种蛋白质表达上调, 4种蛋白质表达下调。表达上调的多肽质荷比 (m/z值)分别为1 932.76、 1 976.85、 2 090.53、 5 004.5、 5 776.01、 5 803.05、 5 847.99、 5 877.51和7 501.58, 表达下调的多肽m/z值分别为1 866.40、 4 063.71、 8 120.31和8 203.83。结论 弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组发生显著改变, 采用WCX纳米磁性微球联用MALDI?TOF?MS技术可检出弓形虫急性感染小鼠血清中的特异性蛋白标志物。 相似文献
37.
目的 采用二维电泳、 免疫印迹法和质谱技术鉴定日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA) 成分中具有早期诊断价值的抗原分子。方法 通过等电聚焦以及十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳对SEA进行二维电泳, 将胶上蛋白质斑点转移到硝酸纤维素膜上, 再分别与日本血吸虫感染前、 后不同时间点的小鼠血清反应, 以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG 作为二抗, 进行免疫印迹试验, 寻找SEA中能与血吸虫感染早期血清反应的蛋白斑点。通过高效液相色谱串联质谱 (LC? MS/MS) 分析鉴定其蛋白成分。结果 对血吸虫感染1、 2、 6周以及未感染健康小鼠血清识别SEA的二维电泳免疫印迹图谱进行匹配分析发现, SEA中有2个蛋白斑点能被血吸虫感染后1、 2、 6周小鼠血清识别, 另有3个蛋白斑点仅被血吸虫感染后6周小鼠血清识别。经LC?MS/MS鉴定, 2个被血吸虫感染早期血清识别的SEA蛋白分子分别为热休克蛋白 (HSP70)和葡萄糖调节蛋白 (Grp78/Bip)。结论 SEA中HSP70和Grp78/Bip可能具有血吸虫感染早期诊断价值。 相似文献
38.
目的观察弓形虫感染对大鼠学习记忆能力和海马组织细胞因子(白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6)水平以及大脑皮层一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,探讨其可能机制。方法40只清洁级SD大鼠随机分成4组,即对照组和高、中、低感染剂量的弓形虫感染组(2×107/ml×2ml、2×105/ml×2ml、2×103/ml×2ml)。9周后进行被动回避实验和Morris水迷宫试验,观察弓形虫感染对大鼠的学习记忆能力等行为学变化。放射免疫法检测大鼠海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,免疫组化检测NOS活性。结果弓形虫感染对大鼠的记忆获得没有影响,但高、中剂量弓形虫感染组大鼠的记忆消失要早于对照组(P<0.05),低感染剂量组大鼠记忆消失与正常对照大鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各感染组大鼠Morris水迷宫测试中逃避潜伏期均明显延长,其距离百分比明显降低(P<0.05)。各感染组大鼠海马组织IL-1β、TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05);但IL-6水平与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。感染组大鼠大脑皮层NOS阳性细胞数增加。结论弓形虫感染对大鼠的学习记忆能力有影响,其作用机制之一可能与大鼠海马组织IL-1β、TNF-α细胞因子水平升高有关。 相似文献
39.
急性弓形虫感染小鼠脑蛋白质二维电泳图谱初步分析 总被引:1,自引:1,他引:0
目的应用二维电泳(2-DE)技术研究急性弓形虫感染对小鼠脑蛋白质组的改变。方法分别提取纯化急性弓形虫感染和正常同窝配对的C57BL/6J小鼠脑组织蛋白,以固相pH3~10梯度聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向凝胶电泳,应用PDQuest 1.0软件分析蛋白差异。结果急性弓形虫感染与正常同窝配对的C57BL/6J小鼠脑组织2-DE图谱分别检测出(132±10)个和(170±13)个蛋白斑点,对两组电泳图谱进行匹配后,有19个蛋白点仅在急性弓形虫感染小鼠脑蛋白2-DE图谱中表达;另有37个蛋白斑点仅在正常同窝配对小鼠中表达。部分蛋白在两组小鼠脑组织中含量也发生明显变化。结论急性弓形虫感染小鼠脑蛋白质有明显改变,为研究弓形虫感染致脑组织损害及筛选治疗新药提供了有益的线索。 相似文献
40.
目的克隆刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(Triosephosphate isomerase,TPI)基因,原核表达和纯化蛋白,研究其对弓形虫感染小鼠的免疫保护作用。方法抽提弓形虫速殖子总RNA,利用PCR技术扩增刚地弓形虫TPI基因,构建重组原核表达载体TPI/p ET-28a(+),转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,镍亲和层析法纯化目的蛋白。将与佐剂乳化后的TPI蛋白对小鼠颈背部多点皮内免疫,间隔2周,连续免疫4次,最后一次为加强免疫,同时设置佐剂对照组与正常对照组。尾静脉采血检测小鼠血清抗体效价。以400个弓形虫速殖子/只接种小鼠腹腔,观察记录各组小鼠的生存率。结果成功扩增到弓形虫TPI基因,构建原核表达载体TPI/p ET-28a(+),获得纯化的TPI蛋白,TPI免疫4次后的小鼠血清抗体效价可达1:100 000以上,且生存期显著高于佐剂对照组与正常对照组。结论弓形虫TPI蛋白对弓形虫感染小鼠具有一定的免疫保护作用,为研究弓形虫疫苗奠定了理论基础。 相似文献