靶向人端粒酶逆转录酶进行RNAi的逆转录病毒载体的构建

目的构建靶向性干扰人端粒酶逆转录酶表达的特异性小干扰RNA的真核表达载体。方法采用PCR法分别扩增增强型绿色荧光蛋白的DNA序列、U6启动子序列和靶向性干扰人端粒酶逆转录酶的特异性小干扰RNA对应的DNA序列,随后将与之相应的DNA序列片断依次克隆入真核表达载体pLXSN中,并通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体进行鉴定。以荧光显微镜和利用流式细胞仪分析重组病毒表达EGFP蛋白的情况。以MTT方法检测初步分析重组病毒对人Hela细胞的RNAi效果。结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT。以磷酸钙共转染法制备的重组逆转录病毒滴定了病毒滴度后,重组病毒感染人Hela细胞24h时用流式细胞仪测得EGFP表达的阳性率为24.1%。重组逆转录病毒感染人Hela细胞48h时,MTT实验测得细胞死亡率为53.2%。结论成功构建了针对人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT,并制备了重组逆转录病毒,初步观察了效应,为进一步利用小干扰RNA技术研究肿瘤的基因治疗奠定了基础。     

老年急性胆囊炎患者行腹腔镜胆囊切除术的治疗体会(附50例报告)

目的:探讨为老年急性胆囊炎患者行腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)的临床效果。方法:回顾分析2006年10月至2008年10月为50例老年急性胆囊炎患者行LC的临床资料。结果:47例成功施行LC,手术时间35～155min,平均65min,术后1～3d恢复进食,术后住院3～10d,平均6d;腹腔镜下行胆囊造瘘术1例;中转开腹2例,手术成功率94%。1例术后并发肺内感染,经对症治疗后痊愈。无死亡病例及胆漏、出血等术后并发症发生。结论:只要病例选择得当,LC可作为治疗老年急性胆囊炎的理想术式。     

人胆管癌CD24+ CD44+ EpCAMhigh细胞亚群的分选及其肿瘤干细胞样特性的鉴定

目的 检测及分选人胆管癌中的CD24+ CD44+ EpCAMhigh细胞亚群,探讨其是否具有肿瘤干细胞样生物学特性.方法 流式细胞术检测6例人胆管癌中CD24、CD44、EpCAM的表达率;取2例人胆管癌新鲜标本种植到NOD/SCID鼠皮下,建立荷人胆管癌小鼠模型.流式细胞术分选CD24+ CD44+ EpCAMhigh亚群细胞,NOD/SCID鼠移植瘤试验鉴定其成瘤和分化能力.结果 6例人胆管癌组织标本和2例移植瘤中,CD24+ CD44+ EpCAMhigh在人胆管癌中表达率为0.58%～2.43%(平均值0.94%).运用NOD/SCID鼠移植瘤模型,分选得到CD24+ CD44+ EpCAMhigh亚群细胞.NOD/SCID鼠移植瘤试验,1×103个CD24+ CD44+ EpCAMhigh细胞能成瘤(3/8),而CD24- CD44- EpCAMlow/-细胞在5×104才能成瘤(1/8).CD24+ CD44+ EpCAMhigh胆管癌细胞NOD/SCID鼠移植瘤的组织类型及标记物的表达率和原代肿瘤相似.结论 人胆管癌中含有CD24+ CD44+ EpCAMhigh细胞亚群,具有强成瘤能力、自我更新和分化的能力,可能是胆管癌干细胞.     

高校辅导员开展大学生诚信伦理教育工作的若干思考

当前,部分大学生学习不努力、考试作弊,在简历中造假,待人不诚信,严重影响大学生群体的形象.其主要原因是社会不良风气的冲击,就业形势的严峻,高校思想教育工作的薄弱以及个别学生修养不高.提高大学生诚信意识,高校辅导员应该发挥重要作用.可通过建立诚信档案,填写诚信协议书,营造诚信氛围,加强诚信教育等措施促使大学生树立诚信伦理意识.     

慢性肝炎和肝炎后肝硬化患者能量代谢的研究

目的了解慢性肝炎（慢肝）与肝炎后肝硬化（肝硬化）患者的物质能量代谢与摄入特点，以有效指导营养治疗。方法采用间接测热法对60例慢肝（慢肝组）和60例肝硬化患者（肝硬化组）的静息能量消耗水平进行测定，分别与Harris—Benedict公式计算的基础能量消耗和膳食调查计算的食物能量摄入进行比较；分析静息能量消耗与营养评价指标的相关性。结果肝硬化组的静息能量消耗（77±21）kJ·kg^-1·d^-1，低于基础能量消耗（95±16）kJ·kg^-1·d^-1（t=-6．49，P〈0．01），能量摄入（102±33）kJ·kg^-1·d^-1，是静息能量消耗的1．42±0．61倍，其中蛋白质摄入（0．84±0．31）g·kg^-1·d^-1，是静息蛋白质消耗[（1．11±0．42）g·kg^-1·d^-1的0．85±0．52倍，呈负氮平衡（-6．29±4．62）；慢肝组的静息能量消耗[（93±18）kJ·kg^-1·d^-1]与基础能量消耗[（98±8）kJ·kg^-1·d^-1]比较，差异无统计学意义（P〉0．05），能量摄入为（127±34）kJ·kg^-1·d^-1，是静息能量消耗的1．41±0．43倍，其中蛋白质摄入（1．02±0．29）g·kg^-1·d^-1，是静息蛋白质消耗（0．87±0．34）g·kg^-1·d^-1的1．31±0．61倍，呈负氮平衡（-2．02±4．07）；与慢肝组比较，肝硬化组的静息能量消耗、能量及三大能量营养素摄入量、血清白蛋白和前白蛋白水平均显著低下（P〈0．01），体重下降明显（P〈0．01），负氮平衡严重（P〈0．01）；肝硬化组的能量摄入与静息能量消耗和基础能量消耗的比值呈正相关（P〈0．05），血清前白蛋白与蛋白质氧化率呈负相关（P〈0．05）。结论肝硬化患者的静息能量消耗呈低代谢状态；负氮平衡是慢肝与肝硬化患者的共同营养问题；早期预防慢性肝病患者的营养不良能够改善其远期预后。     

基于双心医学模式护理干预对冠心病心绞痛患者心理状态、治疗依从性及自我效能的影响

目的:探讨基于双心医学模式护理干预对冠心病心绞痛患者心理状态、治疗依从性及自我效能的影响.方法:选取2019年3月至2020年11月期间于我院就诊的92例冠心病心绞痛患者为此次研究对象,随机将其分为研究组(n=46)和对照组(n=46);对照组使用常规护理进行干预,研究组使用双心医学模式进行护理干预;对比两组患者干预前...     

莪术组分涂层支架预防猪冠状动脉再狭窄的研究

目的通过中华实验用小型猪冠状动脉再狭窄模型,观察中药莪术组分涂层支架抑制内膜增殖的有效性。方法将18只小型猪随机分为莪术组分涂层支架组(ZES组)、雷帕霉素涂层支架组(SES组)及金属裸支架组(BMS组),每组6只,分别在左前降支、左回旋支及右冠状动脉置入同一种支架各1枚。术后30 d冠状动脉造影后将猪处死,观察支架血管段的病理形态及影像学变化。结果 30 d时,与BMS组比较,ZES组和SES组平均管腔直径和平均管腔面积均明显增大(P<0.05),直径狭窄率和面积狭窄率明显减小(P<0.05);与SES组比较,ZES组和BMS组炎症积分明显降低,内皮化积分明显升高(P<0.05);3组损伤积分比较,差异无统计学意义(P>0.05);光学相干断层扫描及扫描电镜观察,SES支架组30 d时可见部分支架节段内皮化不全及炎性细胞浸润。结论 ZES支架可有效地抑制血管内膜增殖,具有良好的生物相容性。     

基于网络药理学和分子对接技术探讨“半枝莲-山慈菇”抗乳腺癌的作用机制

目的通过网络药理学和分子对接方法探讨"半枝莲–山慈菇"抗乳腺癌的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选半枝莲、山慈菇的有效化学成分及相应靶蛋白。通过DrugBank、Uniprot数据库筛选乳腺癌潜在靶点,运用Cytoscape 3.8.0软件构建"化合物–靶点–疾病"网络图。使用STRING数据库绘制蛋白互作(PPI)网络,利用DAVID数据库对有效作用靶点进行GO功能、KEGG通路富集分析。结果共筛选出半枝莲中有效化学成分29个,山慈菇中有效化学成分3个;对应潜在作用靶点517个,乳腺癌靶点118个;将"半枝莲–山慈菇"与乳腺癌的靶点对比,获得8个药物–疾病共同靶点,包括雄激素受体(AR)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(CASP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(CASP9)、雌激素受体α(ESR1)、雌激素受体β(ESR2)、钾电压门控通道亚家族H成员2(KCNH2)、前列腺素G/H合酶2(PTGS2)和钠依赖性血清素转运体(SLC6A4)。GO功能分析得到197个条目,涉及药物代谢等方面。KEGG通路分析得到116个条目,涉及膀胱癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、非洲锥虫病、前列腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌等通路。结论研究揭示了"半枝莲–山慈菇"抗乳腺癌的关键靶点和涉及的生物学过程及信号通路,并结合分子对接技术,发现其作用是多靶点、多通路的,为今后的分子生物学实验奠定了基础。     

低雌激素状态对中重度宫腔粘连术后子宫内膜修复的影响（附4例报告）

宫腔粘连多由宫腔手术操作或因放射、感染等因素造成子宫内膜破坏引起[1]，宫腔镜手术分离后再粘连屡见不鲜。我们于2013年6~12月观察应用促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）后的低雌激素状态对术后子宫内膜修复的影响，报告如下。