Beagle犬活体取胎及其成纤维细胞的培养

目的 探索活体手术获取Beagle犬孕龄30 d胎儿及其成纤维细胞培养的方法.方法 对雌性Beagle犬进行发情鉴定并适时配种受孕,然后用B超观察胎儿发育情况确定其妊娠时间.当母犬妊娠30 d时,采用外科手术取出一侧子宫角的胎儿,去除胎儿的头、四肢及内脏,用胰酶消化法分离胎儿成纤维细胞,并在体外进行培养和传代.同时保留母犬另一侧子宫角的胎儿,术后加强护理使剩余胎儿继续发育.结果 本实验成功分离培养出Beagle犬胎儿成纤维细胞;在保留母体的情况下让另一侧子宫角胎儿继续发育并出生成活.结论 本实验保留了母体,使其仍具有繁殖力,可作为胚胎移植的受体;另一侧子宫角胎儿的正常发育并出生成活,可为今后体细胞克隆Beagle犬提供具有全同胞关系的正常对照犬.     

Effects of nuclear translocation of tissue transglutaminase and the release of cytochrome C on hepatocyte apoptosis

Objective To assess the effects of nuclear translocation of tissue transglutaminase (TTG) and the release of cytochrome C on hepatocyte apoptosis and to reveal the mechanism of signal transcluction of early apoptosis in injured hepatocytes.Methods Hepatocytes isolated from tissue transglutaminase gene knock-out mice and rats were stimulated with ethanol. Proteins from whole cell, cytoplasm and nuclei were extracted for determination of TTG activity by ^14C-putrescine incorporation. Distribution of TTG throughout the entire cell, as well as just nucleus was observed under a confocal scanning microscope. The amount of cytochrome C released from mitochonclria was determined by ELISA. Cell apoptosis was observed by fluorescent cytochemistry.Results TTG activity in whole cells and nuclei was significantly increased after the hepatocytes were treated with ethanol. Cytochrome C release was remarkably increased in the cells isolated from rat and wild-type mouse after treatment with ethanol but not in TTG gene knock-out mice. Cellular apoptosis appeared in hepatocytes isolated from rats and wild-type mice but not in the hepatocytes from TTG gene knock-out mice after stimulation with ethanol.Conclusions Increased TTG in hepatocytes can be translocated into the nucleus and promote release of mitochonclrial cytochrome C into the cytoplasm. Passing through a series of signal pathways, hepatocyte apoptosis is induced eventually.     

银染mRNA差异显示方法的建立和吗啡诱导基因的克隆

目的：建立非同位素银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离吗啡相关基因。方法：以吗啡处理的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，用５’ｄＴ１２ＭＧ锚定引物和两条随机引物组合进行ＤＤＲＴＰＣＲ扩增。经测序凝胶电泳分离后，用银染方法显示差异ＤＮＡ条带，在直视下从凝胶中回收差异条带并进行再扩增，扩增产物克隆入ｐＧＥＭＴ载体。结果：建立了非同位素的银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离和克隆了一些吗啡诱导的差异表达基因。结论：建立的非同位素银染差异显示方法是简单快捷和高效的分离差异表达基因的方法     

手术内固定治疗Hoffa骨折的疗效观察

目的 探讨内固定治疗Hoffa骨折的方法及疗效. 方法 对1993年8月- 2010年2月收治的26例26髁Hoffa骨折进行回顾性分析,内髁骨折13例,外髁骨折13例.按Leten-neur分型:Ⅰ型16例,Ⅱ型4例,Ⅲ型6例.开放性骨折2例,闭合性骨折24例.根据骨折类型、受累侧别选择手术入路,螺钉固定21例,侧方支持钢板固定5例. 结果 26例随访时间12.5～48个月,平均18个月,3～4个月骨折均获骨性愈合,平均3.5个月.2例出现轻微移位伴膝关节疼痛,其中1例膝关节活动度为95.,另1例因疼痛不能坚持功能锻炼,术后随访其膝关节活动度为60°.无感染、骨折延迟愈合、骨坏死等并发症发生.根据Letenneur等的Hoffa骨折术后功能恢复评估系统进行评价:优良24髁,可1髁,差1髁. 结论 手术治疗Hoffa骨折是一种安全有效的方法,但要根据骨折类型及骨折块大小选择内固定及切口,螺钉打入位置和方向至关重要.     

白藜芦醇诱导前列腺癌细胞系PC-3凋亡的实验研究

目的探讨白藜芦醇（resveratroi，Res）诱导人前列腺癌细胞系PC-3凋亡及其机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、软琼脂集落生长试验和流式细胞术测定Res对PC-3的增殖抑制、集落生长抑制、周期阻滞和诱导凋亡作用，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测对凋亡相关基因bcl-2和bax表达的影响。结果Res具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G0／G1期阻滞和诱导凋亡作用，作用72hIC50为0．39g／L，Res0．1g／L作用2天对PC-3细胞集落生长抑制率为88．9％，Res0．5g／L作用2天G0／G1期细胞比例从42．30％增高至75．20％。Res可以下调beb2基因／蛋白，上调bax的表达。结论Res可能通过抑制PC-3细胞的集落生长、增殖抑制、G0／G1期阻滞、下调bcl-2基因，上调bax基因表达等作用机制诱导前列腺癌细胞凋亡。     

美国国家卫生与医学博物馆的发展启示

美国国家卫生与医学博物馆（National Museum of Health and Medicine）隶属于武装部队病理学研究所，原名为军队医学博物馆，在美国是少数几个具有悠久历史的国家级博物馆之一。该馆成立于1862年，收藏和展出战争对人体创伤以及疾病的遗骸和文件档案。这个博物馆为法医学、人类学、病理学和军事医学提供了丰富的研究资料。解剖标本的收藏起着研究、展览、教育的作用，数百名国内外研究者来博物馆从事研究工作。     

电磁辐射致Raji细胞内Caspase-3、8蛋白表达的变化及其意义

目的对比性研究电磁脉冲（electromagnetic pulse,EMP）、S波段高功率微波（S-band high power micro-wave,S-HPM）、X波段高功率微波（X-band high power microwave,X-HPM）三种不同波段电磁辐射对Raji细胞内Caspase-3、Caspase-8蛋白表达的影响,探讨其在电磁辐射生物学效应的相关调控机制。方法常规培养Raji细胞,用S-HPM、X-HPM和EMP三种不同波段的电磁辐射照射Raji细胞,设伪照射为对照组。于照射6 h收集细胞,提取总蛋白,采用Western blot技术检测照射后细胞内Caspase-3、Caspase-8两种蛋白的表达;应用图像分析系统对阳性条带进行定量分析,所得数据用SPSS13.0软件的一元方差分析进行统计学处理。结果三种不同波段的电磁辐射照射后6 h后均可导致Raji细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白表达发生改变,与对照组相比较,各实验组Raji细胞Caspase-3蛋白表达均明显上调（P〈0.01）,EMP与X-HPM组间无统计学差异（P〉0.05）,但均较S-HPM组明显上调（P〈0.01）,且表达程度呈X-HPM〉EMP〉S-HPM的趋势;Caspase-8只在X-HPM照后明显上调（P〈0.01）,但在EMP、S-HPM照射后均明显下调（P〈0.01）;EMP较S-HPM下调更明显（P〈0.01）。结论三种电磁辐射均可导致Raji细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白表达的改变,其中X-HPM主要通过Caspase-8进一步诱导并激活Caspase-3发挥作用,而EMP和S-HPM可能通过其他途径激活Caspase-3而发挥作用。     

睾丸表皮样囊肿继发睾丸畸胎瘤恶变一例报告

<正> 睾丸肿瘤多为恶性,良性仅占2～4％,睾丸表皮样囊肿罕见,而睾丸表皮样囊肿继发睾丸畸胎瘤恶变更为罕见,至今尚无报告。我们收治1例,报告如下。 患者,33岁。2年前左阴囊有轻微下坠感体检发现左睾丸肿大而于1988年10月第1次入院。查体:左睾丸内侧中部触及2.0cm×2.0cm×2.0cm肿物,质硬、光滑、无压痛。“B”超:左睾丸内侧探及1.5cm×1.5cm圆型低回声区,界限清楚。手术见睾丸内侧肿物有完整包膜,境界清楚,行单纯肿物摘除术。病理报告:睾丸表皮样囊肿。术后痊愈出院。18个月后再次发现左睾丸肿大,伴有坠痛感于1990年2月再次入院。体     

电针刺激能诱发大鼠脊髓原癌基因c-fos的表达

原癌基因c-fos在中枢的表达被视为伤害性刺激的标志物。本文首次报道电针刺激亦可在大鼠脊髓诱发c-fos的表达。我们采用c-fos的蛋白产物Fos抗体的免疫反应活性(Fos-like immunoreactivity,FLI)来间接反映c-fos的表达。实验在雌性Wistar大鼠上进行。给予大鼠一侧后肢“三阴交”穴位100 Hz电针30分钟(1-3 mA),2小时后灌流、固定动物,取脊髓腰     

IDENTIFICATION OF SPECIFIC PEPTIDE LIGANDS FOR B-LYMPHOMA CELL AND ITS EFFECT ON TYROSINE PHOSPHORYLATION AND CELL APOPTOSIS

Objective To search novel method for diagnosis and therapy of B-lymphoma, specific small molecular peptide ligands against binding site of tumor cells were screened and its effects on signal transduction and cell apoptosis were tested. Methods Specific peptide hgands were screened by binding with site of human B lymphoma cell (OC1LY8) using peptide-bead libraries. The identified peptides were characterized with responsible cells by rebinding test. The role of tyrosine phosphorylation of peptide ligand was tested by Western blot;and its apoptosispromoting role was observed by confocal fluorescent microscope. Results Specific peptide ligand was able to bind specifically to site on cell surface and enter into cytoplasm. Tetrameric peptide ligand was able to strongly trigger signal transduction resulting in tyrosine phosphorylation and cellular apoptosis in OC1LY8 cell line. Conclusion Screened peptide ligand can effectively bind with OC1LY8 cell, stimulate cellular tyrosine phosphorylation and induce cellular apoptosis.