液质联用技术在中药分析中的应用

液质联用技术是20世纪90年代发展起来的一门综合性分析技术,LC的高分离效能与MS的高灵敏度、高选择性使之成为药物研究中强有力的工具。API(包括ESI和AP-C I),MALD I,TSP和FAB等离子化方式以及各种多级质谱技术的出现,使该项联用技术日益成熟并逐渐被人们接受。中药有几千年的历史,是中华民族优秀文化传统的重要组成部分,现也已成为世界主流医学重要的一部分。我国拥有世界上最丰富的天然药用资源,中药要创新发展,要开发“安全、高效、稳定、可控”的现代中药产品,就需要对中药基本内容给予现代科学的阐述。液质联用技术的发展为…     

基于定量蛋白质组学技术探究半夏泻心汤对慢性胃炎大鼠影响的作用机制

目的 应用定量蛋白质组学探究半夏泻心汤抗慢性胃炎的生物学基础。方法 实验大鼠分为正常组、慢性胃炎模型组、半夏泻心汤组,采用56%乙醇灌胃法,4周建立慢性胃炎模型,给药治疗后,取胃组织进行苏木素-伊红（HE）染色,观察各组大鼠胃组织病理损伤及改善情况,提取胃组织蛋白质,运用串联质谱标签（TMT）定量蛋白质组学研究各组之间的差异蛋白情况,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）验证关键的差异表达蛋白。结果 从大鼠胃组织中鉴定出4 452个蛋白,其中模型组与正常组差异蛋白为318个。经半夏泻心汤干预后,与模型组相比,共有258个差异蛋白,这些差异蛋白主要富集于cell killing,nucleoid及hijacked molecular function等。京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集发现,作用涉及到三羧酸循环,steroid hormone biosynthesis,retrograde endocannabinoid等信号通路,同时还涉及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）和核转录因子（NF）-κB信号通路。Western blot验证发现14-3-3 theta,干细胞因子（SCF）,肌腱蛋白C（TN-C）,半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）,细胞间黏附分子-1（ICAM-1）,线粒体丙酮酸载体（Mpc1）和免疫相关蛋白GTP酶4（GIMAP4）可能是该方治疗慢性胃炎的关键蛋白。结论 半夏泻心汤治疗慢性胃炎的作用机制涉及到能量代谢、激素调节、炎症反应及免疫过程,利用差异蛋白质组学寻找的靶点蛋白及其涉及的信号通路可能是半夏泻心汤治疗慢性胃炎的生物学基础。     

美托洛尔联合阿托伐他汀治疗对心肌梗死患者心功能、凝血功能的影响

目的美托洛尔联合阿托伐他汀治疗对心肌梗死患者心功能、凝血功能的影响。方法选取2017年10月-2019年1月我院收治的心肌梗死患者72例,按随机数字表法分为对照组和观察组,各36例。两组患者均给予常规基础治疗,对照组联合美托洛尔治疗,观察组在对照组治疗基础上联合阿托伐他汀治疗。比较两组治疗前、治疗后4周心功能和凝血功能指标及不良反应发生情况。结果治疗后4周,两组心功能指标较治疗前均改善,且观察组LVEF、LVEDV、LVESV水平均高于对照组,LVEDD水平低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。两组凝血功能指标较治疗前均改善,且观察组APTT、PT均高于对照组,FIB、PLT水平均低于对照组(P0.05)。两组治疗过程中肝功能受损、肌球蛋白血症、胃肠道反应、头痛眩晕及失眠多梦等不良反应发生率比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论美托洛尔联合阿托伐他汀治疗可重塑心肌梗死患者的心功能,改善患者凝血功能,且安全性高。     

HPLC法测定余甘汁口服液中维生素C和没食子酸的含量

目的:建立余甘汁口服液中维生素 C（Vc）和没食子酸的含量测定方法。方法:采用HPLC法,测定Vc时,色谱柱为Hypersil-NH2柱,流动相为乙腈-80mmol·L-1磷酸二氢钾（75:25）,流速:1mL·min-1,柱温:25℃,检测波长:254nm;测定没食子酸时,色谱柱为Ultrasphere　ODS柱,流动相为甲醇-1％冰乙酸（17:83）,流速:1mL·min-1,柱温:35℃,检测波长271nm。结果:Vc在0.04～0.6μg范围、没食子酸在0.04～0.24μg范围内呈线性关系,Vc的平均回收率为99.36％;没食子酸的平均回收率为99.32％。结论:本法简单、可靠,可有效地控制制剂的质量。     

股外侧肌浅区部分肌肉移植动力重建可行性的初步研究

目的探讨股外侧肌浅区部分肌肉移植行创伤性肌肉缺损功能重建的可行性。方法 2020年3月-2023年3月,西安凤城医院手足显微外科应用股外侧肌浅区移植行肌肉动力重建9例, 其中前臂GustiloⅢB型损伤5例(屈指肌群缺损2例,伸指肌群缺损3例;左侧2例,右侧3例);掌背侧屈指肌和伸指肌同时缺损1例;右第1掌骨缺损伴皮肤及鱼际肌缺损1例;右臂完全离断肌皮神经自肱二头肌抽出1例;右小腿GustiloⅢC型损伤伴胫骨前肌、长伸肌和趾伸肌缺损1例。均通过急诊切取股外侧肌浅区部分肌肉行外伤性肌肉缺损动力重建,术中股外侧肌浅区嵌合移植时在神经入肌前3.0cm部位,切取近端长3.0cm多余神经组织行苏木精-伊红(HE)染色定量神经纤维数检测,术后通过肌骨B超、肌电图和肌力等动态观察、随访评估。期间另外选取在本院行股外侧肌浅区嵌合移植修复的48例进行肌纤维平均长度和厚度的测量,与股薄肌肌纤维长度、神经纤维数进行对比。同时组织本院职工志愿者71例, 用肌骨B超进行股外侧肌浅区收缩状态(C)和静息状态(R)的横截面积并记录, 计算其比值(CR值)。9例患者术后均采用门诊复诊、电话和网络方式进行随访, 观察...     

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS 技术分析黄芩清肺汤中黄芩、栀子单煎与合煎的成分变化

目的研究黄芩清肺汤中黄芩、栀子配伍前后的成分变化,探讨二者配伍的合理性。方法采用超高效 液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱联用（UPLC-LTQ-Orbitrap-MS）技术建立黄芩、栀子配伍前后的化学指纹 图谱,通过正交偏最小二乘判别法分析药对配伍前后的化学成分变化,并对筛选到的化学标记物进行鉴定。 结果黄芩、栀子合并液与合煎液化学成分存在明显差异,合煎后京尼平苷酸（geniposidic acid）、栀子苷 （gardenoside）等含量显著下降,黄芩素（baicalein）、槲皮素（quercetin）等含量显著升高。结论黄芩清肺汤中黄 芩、栀子配伍后,可促进多种活性成分在合煎液中的溶出,这些成分可能是黄芩、栀子配伍协同增效的物质 基础。     

活血合剂中阿魏酸和芍药苷的含量测定

目的建立RP-HPLC法同时测定活血合剂(丹参、当归、赤芍、丹皮、黄芪和鸡血藻)中阿魏酸、芍药苷的含量.方法采用反相高效液相法.色谱条件阿魏酸ZORBAx*ODS色谱柱;流动相甲醇-0.5%HAC水溶液(4258),检测波长为313nm,流速1.0mL·min-1.芍药苷ZORBAX×ODS色谱柱;流动相甲醇-水(2575),检测波长为230nm,流速1.0mL·min-1.结果阿魏酸、芍药苷在上述色谱条件下,分离效果理想,阿魏酸在0.125～1.0μg范围内;芍药苷在0.25～2.0μg范围内,线性关系良好.结论方法简便、准确,重现性好,可作为活血合剂的含量测定方法.     

HPLC-MS/MS测定葛根芩连汤对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响

研究葛根芩连汤及其主要药效成分对大鼠肝微粒体CYP450酶5种同工酶活性的影响。采用体外肝微粒体孵育技术将葛根芩连汤及其主要药效成分与各个探针底物共同孵育,利用LC-MS/MS建立CYP450 5种亚型探针底物的代谢产物的分析方法,考察微粒体蛋白浓度和孵育时间与代谢产物生成量之间的关系来确定蛋白浓度和孵育时间。运用HPLC-MS/MS检测CYP450酶5种同工酶特异性探针底物(非那西汀、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾丸酮)相应代谢产物(对乙酰氨基酚、4-羟基氯唑沙宗、右菲烷、6-羟基氯唑沙宗、6β-羟基睾酮)的生成速率(V)来确定CYP450的各亚酶活性。结果表明,对乙酰氨基酚、4-羟基甲苯磺丁脲、右菲烷、6-羟基氯唑沙宗及6β-羟基睾酮线性关系良好,精密度、稳定性、平均回收率符合要求,所建方法可行;优化的肝微粒体体外孵育条件,符合药物相互作用指导原则的要求;葛根芩连汤对CYP450 5个亚型(CYP1A2,CYP2C11,CYP2D2,CYP2E1,CYP3A1/2)酶均有不同程度的抑制,其主要药效成分中小檗碱在高浓度下可对各亚型酶有一定的抑制(CYP1A2,CYP3A1/2除外)。     

半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝脏 CYP450酶活性的影响

目的:研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶的影响,从肝脏代谢角度评价半夏泻心汤组方的合理性。方法:将大鼠随机分为全方组、辛开组、苦降组、甘补组及空白对照组,分别灌胃水煎液,运用肝微粒体体外温孵法,对探针底物进行孵育,并结合超高效液相检测方法,测定各探针底物代谢产物的含量,计算代谢速率,以反映各给药组的肝微粒体CYP2C6,CYP2E1,CYP3A1/2亚型酶活性。结果:与空白组相比,全方组,苦降组对各亚型酶均起抑制作用(P<0.01);辛开组对CYP2C6有抑制作用(P<0.01),而对CYP2E1和CYP3A1/2无显著抑制作用;甘补组对CYP2C6和CYP2E1亚型起抑制作用(P<0.01),而对CYP3A1/2无抑制作用。结论:全方对大鼠肝微粒体CYP450酶起抑制作用,比较各配伍组间差异,苦降组抑制作用较其他配伍组显著。     

UPLC快速测定葛根芩连汤肠外翻囊样品中6个黄酮类成分含量

目的:建立UPLC法同时测定葛根芩连汤肠外翻囊样品中6个黄酮类成分(葛根素、大豆苷、甘草苷、野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷)的含量。方法:样品用甲醇提取,采用Agilent Proshell 120 EC-C18(4.6 mm×50 mm,2.7μm)色谱柱,以0.2%醋酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL.min-1,紫外检测波长270 nm,柱温30℃。结果:葛根素、大豆苷、甘草苷、野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷质量浓度分别在0.1870～93.50μg.mL-1(r=0.9999),0.02730～13.65μg.mL-1(r=0.9999),0.02550～12.75μg.mL-1(r=0.9999),0.05580～27.90μg.mL-1(r=0.9998),0.2124～106.2μg.mL-1(r=0.9999),0.09140～45.70μg.mL-1(r=0.9999)范围内有良好的线性关系;日间、日内精密度变异均小于2%;平均回收率(n=9)分别为101.4%,97.88%,99.15%,99.72%,98.50%,101.4%;稳定性良好。结论:所建立的分析方法操作简便、快速、灵敏,结果准确,重复性好,所需样品少,并已成功应用于葛根芩连汤大鼠肠吸收动力学的研究。