人肝癌细胞中端粒酶RNA的克隆及序列分析

目的：比较不同组织细胞中端粒酶ＲＮＡ（ｈＴＲ）的序列，建立以ｈＴＲ为基础的肿瘤诊断与治疗新技术。方法：采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术从人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２）中扩增出了ｈＴＲ部分ｃＤＮＡ序列，并通过电泳的方法鉴定了其特异性。通过分子克隆技术将上述产物插入Ｔ－质粒后转化入大肠杆菌ＪＭ１０９中，经聚合酶链反应（ＰＣＲ）鉴定了插入片段的特异性及方向，最后采用自动ＤＮＡ序列分析仪分析了上述插     

蛋白质组学技术在新药研究中的应用

由双向电泳、质谱、计算机图像数据处理组成的蛋白质组学的技术体系具有高通量、高分辨率和高重复性的特点，能对微量样品进行全面自动定量分析．并在药物作用靶标、安全性评价、耐药性机制、疾病动物模型研制和中医药现代化等方面有新颖而重要的应用。蛋白质组学技术将在药物研究和开发中带来根本性的变革，我国应尽快将蛋白质组技术用于药物研究中。     

基因芯片结合可环化探针对单碱基突变的检测

目的：将基于连接反应的可环化探针(circularizable oligonucleotide probe，C-probe)技术用于基因芯片对单碱基突变的检测。方法：可环化探针是一种检测核酸分子中单碱基突变的线性寡核苷酸分子，中间部分是通用引物结合区(约40mer)，5’端与3’端是两段与待检测的DNA分子中靶序列互补的目标序列识别区(各约20mer)。与靶序列互补结合后，可环化探针的两个末端在空间靠近并在DNA连接酶的作用下连接形成环状分子，利用荧光分子标记的通用引物对连接产物进行PCR扩增，再利用基因芯片检测荧光标记的PCR产物，从而确定所检测的核苷酸位点的性质。本实验以检测CYP3A4基因外显子5中14026位点的单核苷酸多态性为例，优化了连接反应、荧光标记通用引物的PCR扩增以及探针杂交检测等条件，并用该方法对合成模板和人基因组DNA标本进行检测。结果：以合成的寡核苷酸序列为模板进行10倍系列稀释，确定可环化探针的检测灵敏度，PCR产物的凝胶电泳结果表明，检测灵敏度达到10^3拷贝；可环化探针对合成的野生型和突变型模板具有良好的区分效果。用该方法检测人基因组DNA标本，芯片检测结果与测序结果符合，证实了该方法的可行性。结论：连接反应是最具特异性的酶促反应，将其与基因芯片技术结合用于单碱基突变检测，有助于简化荧光标记过程，提高检测结果的准确性。     

硫代反义寡脱氧核苷酸在树Qu体内对HDV复制与表达的抑制作用

在树Ｑｕ体观察硫代反义寡脱氧核苷酸对ＨＤＶ复制、表达的抑制作用。方法树Ｑｕ同时接种ＨＢＶ阳性血清０．１ｍｏｌ、ＨＤＶ阳性血清０．３ｍｌ后，将１６只ＨＤＶ／ＨＢＶ杂成功的树Ｑｕ随机分为两组，     

基因治疗高血压的研究进展

与传统治疗高血压药物相比，基因治疗不但具有作用特异性强、效果稳定、持续时间长、毒副作用小等优点，而且还有可能从根本上控制具有家族遗传倾向的高血压发生，从而降低人群中高血压的发病率。本文综述了目前基因治疗高血压的研究概况，讨论了基因治疗前景及其面临的主要问题。     

卷柏中单糖抗辐射作用的研究

目的：分析卷柏（Selaginella tamariscina）中糖类化学成分,观察其对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）和BALB/c小鼠的辐射防护作用,为探讨卷柏抗辐射作用机制提供参考依据。方法：薄层色谱法分析卷柏中糖类化学成分;V79细胞经木糖、果糖、阿拉伯糖处理24 h后接受60Co γ射线照射,分别观察细胞活力、克隆形成率和细胞周期;BALB/c小鼠接受6 Gy 60Co γ射线照射前1周给予木糖,观察受照射小鼠的 30 d存活率。结果：卷柏中含有葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、海藻糖等;其中木糖、果糖、阿拉伯糖在20~200 μg?mL-1浓度范围内可剂量依赖地促进照射后V79细胞增殖,在200 μg?mL-1时可提高照射后V79细胞克隆形成率,增加S期细胞比例,缓解G2/M期阻滞,修正紊乱的细胞周期;照射前分别给予木糖100,500 mg?kg-1可剂量依赖地提高受照射小鼠存活率达20%,30%。结论：卷柏中的单糖类成分可提高受照射小鼠的30 d存活率,其机制可能是通过调节受照射后紊乱的细胞周期而发挥辐射防护作用。     

补中益气丸低剂量辐射防护作用的实验研究

目的探讨补中益气丸对3Gyγ射线辐射小鼠的保护作用。方法将60只小鼠随机分为正常组、辐射组、阳性药氨磷汀（WR2721）组、补中益气丸低、中、高剂量组。除正常组外其余各组接受3Gy60Coγ射线照射,观察各组小鼠外周血象变化。结果与辐射组比较,WR2721组在照射后1、5、9、12、16、20、27、31、34d白细胞数显著升高（P〈0．05,P〈0．01）,补中益气丸中剂量组（2．34g·k^-1）在5、9、20、27、31、34d白细胞（WBC）数显著提高（P〈0．05,P〈0．01）,补中益气丸低剂量组（1．17g·kg^-1）在20、27、31d时WBC数提升（P〈0．05,P〈0．01）,补中益气丸高剂量组（4．68g·kg^-1）在20d时WBC数显著提升（P〈0．05）。血小板（PLT）值与辐射组比较,WR2721组和补中益气丸高剂量组在照射后1d显著性减轻辐射对PLT的损伤（P〈0．01）。结论补中益气丸各剂量组能显著提升辐射损伤小鼠外周血WBC数,高剂量组能减缓并减轻外周血中PLT的损伤,补中益气丸具有低剂量叮射线辐射防护作用。     

基于反溶剂冻干技术穗花杉双黄酮的制备和分析表征

目的 采用反溶剂冻干法制备穗花杉双黄酮微粉,以解决该药水溶性差的问题,提高药物口服生物利用度.方法 通过考察反溶剂冻干法反应溶剂与水的比例、药物溶液浓度、反应温度、搅拌速度和搅拌时间对颗粒粒径的影响,得到适宜的微粉化条件.在此基础上分别利用激光粒度分析、扫描电镜、傅立叶转换红外光谱、粉末X线衍射和体外溶出实验对原料药和微粉进行分析表征.结果 最佳处方制备的微粉颗粒粒径在0.08 μm左右,冻干后样品为无定形.结论 本方法制备的穗花杉双黄酮微粉溶解度和溶出速率显著提高,为改善药物的口服生物利用度提供了基础.     

丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶区的cDNA的体外转录

以质粒ｐＳＶＬＤ３为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到１条１３９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶区的ｃＤＮＡ，将此片段克隆到ｐＧＥＭ－３２中，经筛选、鉴定，得到克隆株ｐＨＤＮＡ１０８，提取质粒后经双脱氧末端终止法测序，发现有２个碱基变异。以该质粒为模板，通过Ｔ７ ＲＮＡ聚合酶转录出ＨＤＶ基因组ＲＮＡ中核酶区的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。     

HCV脱氧核酶在荧光素酶表达细胞中活性的初步观察

脱氧核酶 (ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｚｙｍｅ ,ＤＲｚ)是具有生物催化活性的小分子酶性ＤＮＡ(ｃａｔａｌｙｔｉｃＤＮＡ) ,能定点剪切ＲＮＡ分子 ,其活性中心系所谓 10～ 2 3基序 (ｍｏｔｉｆ)。本研究对丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)靶向性ＤＲｚ、硫代修饰的ＤＲｚ (ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｄｅｏｘｙｒｉｂｏｚｙｍｅｓ,ＴＤＲｚ)和突变硫代ＤＲｚ(ｍｕｔａｎｔｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅＤＲｚ,ＭＤＲｚ)在靶基因调控性荧光素酶表达细胞中的活性进行了初步观察。ＤＲｚ、ＴＤＲｚ、ＭＤＲｚ由上海Ｓａｎｇｏｎ公司合成。ＨｅｐＧ2…