反义寡核苷酸诱导肝癌细胞对化疗药物的增敏作用

胰岛素样生长因子1型受体（IGF-1R）是一种跨膜酪氨酸蛋白激酶,它在多数肿瘤细胞中均有过量表达,形成并维持肿瘤细胞的转化表型,参与细胞的增殖和分化,与肿瘤细胞的浸润性生长和转移密切相关.有研究表明人肝癌细胞HepG2中IGF-1R呈现高表达.我们应用前期筛选出的、能够显著抑制IGF-1R表达的反义寡核苷酸（IGF1R-AS）,选择治疗肝癌的常用化疗药物顺铂（DDP）、5氟尿嘧啶（5 Fu）和阿霉素（ADM）分别与IGF-1R联用,分析其对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,以探讨联合治疗用于抗肝癌治疗的可能性.     

蛋白质组学技术对冠心病血瘀证相关蛋白的研究

目的用蛋白质组技术观察冠心病血瘀证病人与正常人血浆中的蛋白质变化,以期发现诊断冠心病血瘀证的标志物和揭示冠心病血瘀证的发病机制.方法采集正常健康者、冠心病心血瘀阻证病人的血浆,用双向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定冠心病血瘀证与正常人血浆中的蛋白变化.结果蛋白质组学研究发现冠心病血瘀证病人血浆与正常相比有3个蛋白质下调和6个蛋白质上调,胶内酶切提取蛋白进行质谱鉴定,其中冠心病血瘀证病人血浆与正常相比升高的蛋白质有免疫球蛋白、纤维蛋白原、粒酶,冠心病血瘀证病人血浆与正常相比降低的蛋白质有CD44SP.结论纤维蛋白原、粒酶有望作为诊断冠心病血瘀证的标志物.     

HCV 5''''NCR转基因小鼠模型的初步建立

目的 为进行反义核酸抗ＨＣＶ药物的体内活性评价。方法 以含ＣＭＶ启动子的ＨＣＶ ５＇ＮＣＲ与荧光素酶基因的融合基因为转基因片段，经显微注射导入ＩＣＲ小鼠受精卵原核，由移植鼠获６８只仔鼠，取鼠尾组织经ＰＣＲ方祛鉴定转基因整合鼠，取整合鼠的子代阳性鼠的肝肾组织采用ＲＴ—ＰＣＲ方法进行ｍＲＮＡ表达鉴定，同时取其心、肝及肾组织进行荧光素酶活性检测。结果 共有１３只Ｇ０代阳性整台鼠，整合率为１９．２％；有３只整合鼠后代的肝肾组织中有ｍＲＮＡ表达；有１个转基因小鼠系心、肝、肾组织中显示荧光素酶活性。该系小鼠在外形、生长速度及繁育方面与正常小鼠无异。结用 ＨＣＶ ５＇ＮＣＲ转基因小鼠模型的初步建立提示ＣＭＶ启动子启动转录的ＨＣＶ ５＇ＮＣＲ－荧光素酶融合基因构件在转基因小鼠体内能够表达，这为ＨＣＶ ５＇ＮＣＲ转基因小鼠模型的进一步研究奠定了基础。     

癌细胞株及胃癌组织端粒酶催化亚基基因表达研究

目的：建立人端普酶催化亚基蛋白质ＲＮＡ逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,进行恶性肿瘤细胞和胃癌组织检测,探讨其在癌变中的作用,提供一种癌症检测的新方法。方法：制备癌细胞株和胃癌组织端粒酶提取液和总ＲＮＡ,运用端粒重复扩增法（ＴＲＡＰ）和ｈＴＲＴ ＲＮＡ ＲＴ－ＰＣＲ扩增法检测癌细胞株和胃癌组织端粒酶活性和ｈＴＲＴ ＴＮＡ表达。结果：８株癌细胞和６例胃癌组织均有端粒酶活性和ｈＴＲＴ ＲＮＡ表达;９     

非洲猪瘟病毒CD2v胞外区蛋白的真核表达及其单克隆抗体的制备与功能分析

目的 利用真核表达系统制备非洲猪瘟病毒（ASFV）CD2v分子N端胞外区融合蛋白,并作为抗原免疫和筛选特异性识别CD2v单克隆抗体。方法 以pcDNA3.1-CD2v-HA质粒（含ASFV-BA71v株EP402R基因全长编码序列和HA标签）为模板,扩增CD2v蛋白胞外区碱基序列,构建真核表达载体pcDNA3.1-N-CD2v-His,通过Expi-293表达系统获得重组N-CD2v-His蛋白。将纯化后的蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤细胞技术制备特异识别CD2v分子单克隆抗体,对获得的抗体经酶联免疫吸附实验（ELISA）、Western印迹以及间接免疫荧光等方法进行鉴定。结果N-CD2v-His融合蛋白基因被成功构建到真核表达载体上,转染Expi-293F细胞收获重组蛋白,纯蛋白经SDS-PAGE分析发现,N-CD2v-His融合蛋白条带呈高度糖基化修饰的梯状分布。用该融合蛋白免疫小鼠,经杂交瘤细胞筛选,获得2株高亲合活性单克隆抗体,2株抗体经间接ELISA、Western印迹及免疫荧光实验等检测均能特异识别糖基化修饰的CD2v全长蛋白。结论 成功制备了抗CD2v特异性单克隆抗体,为进一步...     

反义寡核苷酸药代动力学研究中的定量分析技术

反义寡核苷酸药物的药代动力学研究要求具备相应的生物定量方法。本文就近年来在临床前和临床药代动力学评价中常用的几种定量方法,包括放射性同位素法、毛细管凝胶电泳法、高效液相色谱法、液质联用和基于杂交技术的酶联免疫法,对其各自的特性、应用前景、操作方法及局限性等方面进行了综述。     

线粒体蛋白质组学及其在疾病诊断中的应用

线粒体是提供细胞能量的细胞器,同时还参与细胞内许多重要的生理过程。随着蛋白质组学技术的发展,线粒体蛋白质组学已成为亚细胞结构蛋白质组学研究的一个典范。许多物种的线粒体及其亚结构的蛋白质组学已得到研究,并构建了一些线粒体蛋白质组数据库;对不同生理、病理状态下的线粒体蛋白质组学也进行了大量的研究,发现了一些疾病相关的线粒体蛋白质,为线粒体相关的疾病诊断和治疗提供了重要的标志物和靶标。     

四物汤及其单药主要活性成分免疫药理研究进展

中医经典良方四物汤及其单药主要活性成分当归多糖、地黄多糖、川芎嗪、芍药苷、阿魏酸等均具有一定的免疫调节作用,反映在对免疫器官骨髓造血和胸腺脾脏功能的改善,活化免疫细胞以及促进细胞因子分泌等方面。该文主要对近年来与其免疫药理相关的文献进行综述。     

硫醇修饰的磁性银花纳米粒子SERS基底在氯霉素检测中的应用

目的：制备一种新型的硫醇修饰的磁性银花纳米粒子SERS基底对氯霉素（ CAP）进行拉曼检测,确定SERS基底的增强效果。方法选择烷基硫醇作为基底的表面修饰剂,自组装到磁性银花纳米粒子的银壳表面,通过疏水作用,将CAP分子富集到基底表面,从而实现检测CAP分子拉曼信号的增强。结果3种不同硫醇修饰的基底对CAP的增强顺序是正己硫醇＞十二硫醇＞十八硫醇。利用Fe3 O4＠SiO2-Ag-C6 SERS基底对浓度范围10－3～10－10 mol／L的CAP溶液和10－3～10－9 mol／L的牛奶中CAP进行拉曼检测,检测限分别为0．1 nmol／L（32 ppt）和1 nmol／L（323 ppt）。结论硫醇修饰的磁性银花纳米粒子是一种高活性的SERS基底,可用于低浓度物质的检测分析。     

知母菝葜皂苷元3-位糖基化衍生物的合成

目的 为寻找活性更好的抗老年痴呆的知母螺旋甾烷型皂苷，设计并合成了一系列知，警奠皂苷元3-位糖基化衍生物。方法 使知母中提取的菝莫皂苷元3位羟基与活化的保护单糖反应，再脱去单糖保护得到目标化合物，用核磁共振氢谱、质谱和元素分析确证其结构。结果与结论 所合成的7个(A6～G6)知母螺旋甾烷型皂苷衍生物中，除半乳糖基知母螺旋甾烷型皂苷衍生物外。