寡核苷酸芯片在胃癌相关基因研究中的应用

目的：应用寡核苷酸芯片研究胃癌差异表达基因。方法：根据文献获取基因，查阅相应基因序列设计并合成探针，将探针点样于化学修饰过的载玻片上，制成寡核苷酸芯片。抽提胃癌与相应正常组织总RNA，并以其进行逆转录掺入双色荧光合成荧光标记的cDNA探针，混合后与芯片杂交，经严格洗片后扫描获取图象，计算机分析比较胃癌组织与正常组织的差异表达基因。结果：在288条基因中胃癌组织与正常胃粘膜组织存在差异表达的基因。检测10例标本共有11条基因表达存在明显差异，其中表达明显增高的有7条，表达明显降低的有4条。结论：胃癌组织与正常胃粘膜组织存在大量差异表达的基因，胃癌的发生发展与这些基因密切相关；寡核苷酸芯片在胃癌相关基因的研究具有重要意义。     

应用寡聚核苷酸芯片检测白血病与其同胞供者的白血病基因表达差异

为了应用寡聚核苷酸基因表达谱芯片研究9对白血病患者／同胞供受者对之间的基因表达谱差异以识别主要的疾病相关基因，将163条白血病／肿瘤发病相关基因组群列入芯片设计，合成寡核苷酸探针，用点样仪点片制成基因芯片。提取病初白血病患者及其供者的骨髓／外周血标本或其相对应的健康同胞供者经G-CSF动员后并经CS-3000细胞分离机采集的浓集的9份外周血造血干细胞的总RNA；分别逆转录并进行寡核苷酸探针杂交。结果表明：与其相应的正常供者配对比较，发现4例ALL患者中存在6条显著差异表达基因，其中上调表达基因5条(RIZ，STK-1，T—cell leukemia／lymphoma 1A，Cbp／p300，Opl8)，下调表达1条(hematopoietic proteoglycan core protein)；5例AML-M4和AML-M，患者中亦存在7条显著差异表达基因，其中上调表达6条(STAT5B，ligand p62 for the Lck SH2，CST3，LTC4S，myeloid leukemia factor 2，epb72)，下调表达1条(CCR5)。结论：选择有高度遗传关联的兄弟姐妹供受者对作为差异研究比照对象，利用寡聚核苷酸基因芯片技术进行疾病基因的筛查，筛查出了13条主要异常基因；进一步确认了上述基因在白血病分子发病机制中的关键性作用。     

DPYD基因芯片的制备及条件的优化

[目的] 制备DPYD基因分型芯片，以该芯片为手段预测肿瘤病人对5-Fu的毒副作用。[方法] 设计并合成探针、引物，制备基因芯片，提取人外周血中DNA，经PCR仪扩增后，与芯片上的探针杂交，并用扫描仪分析结果，部分结果经直接测序证明。[结果] 成功制备了基因分型芯片，优化了制备条件，另外，构建了标准模板，并建立了分型标准。[结论] 该基因芯片的灵敏性及准确性均可.     

肠道病毒71型（EV71）ICR乳鼠动物模型的建立

目的建立ICR乳鼠动物模型,为抗EV71药物的筛选和活性评价提供一定的信息支撑。方法采用EV71国际标准株BrCr株,分别对1日龄、7日龄及21日龄ICR乳鼠经腹腔注射感染,并定期采集感染小鼠器官组织进行病原学诊断,确定EV71的感染情况。结果经腹腔途径感染1日龄和7日龄ICR小鼠出现精神萎靡、肢体麻痹瘫痪、消瘦、死亡等症状。腹腔注射分别在1日龄乳鼠肺、脑、肠及7日龄乳鼠肺、脑、肠、大腿肌肉检测到病毒RNA,而21日龄乳鼠出现轻微症状后自行恢复。本研究同时建立了一种分子生物学方法,为今后研究其他适合EV71的动物模型奠定了基础。结论成功建立EV71感染动物模型。发现不同日龄ICR乳鼠对EV71国际标准株感染的易感能力和感染后发病程度不同,低龄（1日龄和7日龄）乳鼠易感,而高龄（21日龄）乳鼠不易感染。ICR乳鼠可用于EV71病毒感染机制、病毒体内分布等基础研究,并可作为抗EV71病毒药物筛选和活性评价动物模型应用,但模型的稳定程度尚需继续研究。     

量子点标记免疫层析技术检测布鲁氏菌病的方法研究

目的 通过研究量子点标记免疫层析技术检测布鲁氏菌病抗体,制备量子点免疫层析试纸条,验证快速检测布鲁氏菌病的可行性。方法 将蛋白A和布鲁氏菌全菌蛋白分别作为质控线和检测线喷涂在硝酸纤维素膜上,以量子点标记布鲁氏菌全菌蛋白,稀释后喷涂在玻璃纤维素膜上,最后进行组装、切割制成检测用试纸条。应用该试纸条检测布鲁氏菌病患者样本102例,健康人血清47例,以试管凝集试验为对照,比较两组方法的符合率。结果 建立的量子点免疫层析试纸条性能较好,布鲁氏菌病抗体的检测敏感性为99.0%,特异度为95.8%,两者符合率为98.0%;将阳性血清稀释至128倍,通过荧光检测仪仍可检测到T线荧光值,该纸条重复性好,储存时间30 d内稳定性较好,其变异系数为4.1%。结论 该方法操作简单、快速稳定、灵敏度高、成本低,15 min内完成检测,血清用量低,可实现现场快速检测,在布鲁氏菌病的早期检测中具有良好前景。     

光纤生物传感器检测嗜肺军团菌方法的建立

目的建立光纤生物传感器检测嗜肺军团菌的方法,为嗜肺军团菌提供一种快速、现场的检测手段。方法先用抗原或抗体包被光纤,再加入待测物质孵育6-10 min,最后加入荧光探针反应6-10 min,根据理化换能元件可以将荧光信号转换成电信号的原理,实现对样品的定性或定量检测目的。同时探讨了光纤修饰方法,包被缓冲液以及离子强度等因素对实验结果的影响。结果光纤生物传感器法检测嗜肺军团菌时,最低可检测到3×104cfu/mL,检测响应时间为20 min;伤寒沙门菌、大肠杆菌、结核杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌、痢疾志贺菌的检测结果均为阴性,显示出良好的特异性。结论光纤生物传感器检测嗜肺军团菌时,表现出快速、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,可作为嗜肺军团菌的一种初筛方法。     

病毒-宿主相互作用的系统生物学与宿主靶向抗病毒策略

以病毒蛋白为靶的抗病毒药物面临易产生耐药、抗病毒谱较窄等诸多问题,宿主分子靶向已经成目前抗病毒药物研究的重要策略,宿主靶标的辨识是宿主靶向药物设计的关键。病毒-宿主相互作用的系统生物学研究将成为抗病毒药物宿主靶标辨识和宿主-病毒联合靶向治疗策略设计提供有力工具。近年来通过蛋白质组学、大规模基因沉默、基因芯片等实验得到了大量的病毒感染相关宿主分子和病毒-宿主分子相互作用关系,为在病毒-宿主分子网络水平揭示病毒生存策略奠定了基础。整合病毒感染基因表达谱和人蛋白相互作用网络可以构建病毒感染激活网络,进而通过网络分析获得关键的宿主因子。正在发展的动态蛋白质组学和动态网络分析技术将为建立更加真实的病毒-宿主分子网络模型,进而辨识有效的宿主靶标提供有力工具。     

蛋白质组学及其在肿瘤研究中的应用

蛋白质组学技术如样品制备、双向电泳(2-DE)、凝胶染色、质谱分析、生物信息学、差异凝胶电泳(DIGE)、同位素亲和标签(ICAT)、蛋白质芯片等的研究取得较大进展,蛋白质组学在探讨肿瘤发病机制及诊断等方面得到广泛应用.现就蛋白质组学相关技术研究进展及其在肿瘤研究中的应用作一综述.     

流感泰得小分子化合物修饰前后细胞摄取的比较

目的在反义寡核苷酸流感泰得（Flutide,FT）上偶联神经氨酸酶抑制剂奥司他韦,以期通过特定小分子化合物的修饰提高细胞对流感泰得的摄取,进而提高其抗流感的作用。方法采用3′荧光标记控孔玻璃珠（3′FAMCPG）合成全硫代修饰的流感泰得,并对其5′端进行巯基修饰,与结构改造后的奥司他韦分子进行连接得到流感泰得与奥司他韦偶联物（FTO）;修饰前后的反义药物直接转染流感病毒感染的人肺癌上皮A549细胞,通过荧光显微镜观察及流式细胞技术检测FTO与FT的胞内荧光强度来进行反义药物偶联小分子化合物前后胞内摄取量的比较;采用CCK8细胞增殖检测技术进行FT与FTO体外抗流感病毒活性评价。结果得到一种新的寡核苷酸偶联物FTO;荧光显微镜观察结果显示,细胞给予FTO后荧光强度强于FT;流式细胞检测结果表明,修饰后的FTO胞内平均荧光值明显高于修饰前的FT,其中给药12h时,病毒感染细胞＋FTO（BFTO）组的平均荧光值比病毒感染细胞＋FT（BFT）组增加了（102.3±56.0）%,正常细胞＋FTO（ZFTO）组的平均荧光值比正常细胞＋FT（ZFT）组增加了（89.4±44.7）%;给药24h后BFTO组的平均荧光值比BFT组增加了（115.2±28.4）%,ZFTO组的平均荧光值比ZFT组增加了（102.9±12.1）%,（P〈0.05）;体外抗流感病毒活性评价显示,FTO与FT的IC50值分别为（1.57±0.08）μmol/L与（4.44±0.11）μmol/L。结论流感泰得采用奥司他韦修饰后有助于提高其在细胞内的摄取量以及抗流感病毒活性。