基因芯片检测肠道致病菌技术的建立和应用

目的 快速、准确地检测水中存在的肠道致病菌。方法 采用基因芯片技术对水中常见肠道致病菌进行检测和鉴定，包括检测靶基冈的扩增、基因芯片的制备、杂交反应和杂交结果的检测与分析四个步骤。结果 应用基因芯片对涉及9个菌属的143株致病菌在相同的条件下进行了杂交检测，得到菌属(科)特异性的杂交图谱，从而达到对细菌进行检测鉴定的目的。结论 制备的基因芯片能够同时检测沙门菌属、志贺菌属、埃希菌属、葡萄球菌属、变形杆菌属的细菌以及小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血性弧菌等。     

乙型肝炎病毒前C／C基因区硫代和脂肪链—硫代反义寡核苷酸的体外抗…

为了研究修饰的反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）的抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。以２．２．１５细胞为靶细胞，在ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因区设计合成了１６聚硫代和脂肪链－硫代两种修饰的ＡＳＯＮ，用酶联免疫吸附和斑点杂交技术分别检测作用细胞的乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）以及ＨＢＶ ＤＮＡ的分泌情况。结果显示，ＡＳＯＮ在浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ时能特异性抑制细胞９２％￣９５％ＨＢｓＡｇ和８４％￣     

硫代反义寡核苷酸对裸鼠异植瘤HCV 5′NCR基因表达的抑制作用

目的 在HCV 5′NCR转基因细胞模型HepG2.9706细胞建立成功的基础上,采用裸鼠异植瘤模型进行HCV特异性硫代反义寡核苷酸（HCV363、HCV279及HCV349）的体内活性评价。方法 将HepG2.9706细胞接种于4－6周龄的雌性BALB／C裸鼠的侧腹皮下,动物随机分组,约1周后,采用腹腔注射途径,开始给药。结果 针对HCV 5′NCR的硫代反义寡核苷酸HCV363、HCV279及HCV349对异植瘤细胞内HCV 5′NCR调控荧光素酶表达具有明显的序列特异性抑制作用,抑制率分别为80．4％、78．6％及47．9％。三个不同浓度的HCV363作用结果表明随着药物浓度的增加,HCV363对荧光素酶基因的表达抑制活性明显增强,最大抑制率可达82．7％。结论 该研究提示反义寡核苷酸有可能成为HCV感染治疗的新途径。     

党参乙醇总提物的抗辐射作用研究

目的探讨党参乙醇总提物（total ethanol extract from Codonopsis pilosula,TEC）对60Coγ射线损伤的防护及其治疗作用。方法 70只小鼠受60Coγ射线7.5 Gy照射前后,实验组用2种不同浓度的TEC灌胃,照射对照组小鼠用蒸馏水灌胃,观察不同处理组小鼠的存活率及血像变化情况,在此基础上优选出最佳保护方式;另外对40只小鼠给予8.0 Gy致死剂量照射,观察TEC对小鼠的辐射保护作用。结果 （1）致伤前预防给药,两个剂量TEC均明显提高了30 d存活率以及外周血白细胞计数（WBC）和血小板计数（PLT）;（2）致伤后给药两个剂量均没有显示出显著的治疗效果;（3）给予8.0 Gy致死剂量照射,TEC较照射对照组提高存活率50%,有统计学差异（P〈0.05）。结论 TEC具有较强的辐射预防作用,能显著提高受60Coγ射线致死剂量照射小鼠的存活率,降低辐射对小鼠外周血WBC和PLT的损伤作用。     

反义寡核酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究

以质粒为模板，通过聚合酶链反应扩增得到条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒基因组ＲＮＡ中核酶区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ＰＧＥＭ３Ｚ中，经筛选鉴定，得到一重组质粒，经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。     

基于细胞功能的超高通量筛选在化学基因组学药物发现中的应用

尽管许多基因组靶标的功能及它们与疾病的关系仍然不清楚,但基因组信息的获得仍极大地丰富了潜在药物靶标的数量.在化学基因组学研究中,基因组靶标超高通量筛选发生在药物开发的初期,在确定靶标之前进行.靶标选择性调控剂可提供药物先导结构和药理学研究工具以鉴定靶标功能,化学基因组策略的有效实施离不开能对大量基因组靶标进行超高通量筛选的分析检测技术的运用.基于细胞功能的分析实验可以实现化学基因组学研究中超高通量筛选的目的,并且因其功能特性使其在鉴定靶标选择性调控剂时明显优于配体结合试验.     

端粒与端粒酶研究进展

端粒与端粒酶研究进展郑晓飞王升启（综述）孙志贤（审校）关键词端粒酶端粒肿瘤中图号Ｒ７３０２３１Ｑ５５端粒的独特结构、复制方式及功能，端粒酶的结构、功能、催化机制、表达调控及其在细胞衰老、永生化和癌变中的作用使之成为近期生命科学研究的热点。本文就端粒...     

霍乱弧菌O139实时荧光PCR检测方法的建立及应用

目的：建立检测霍乱弧菌O139的实时荧光PCR检测方法，为霍乱弧菌0139的检测提供快速、敏感、特异的检测手段。方法：用复合探针法荧光PCR检测技术，检测0139特异基因——编码糖基转移酶的基因。结果：本方法特异性好，检测非0139肠道菌均无响应；灵敏度高，可检测低至10CFU的细菌；重复性较好，批间批内变异系数均小于3％。对采自浙江省0139霍乱弧菌感染患者的335份标本进行检测，共有133份为阳性，而采用常规细菌培养法，仅检测出90份阳性。结论：本方法的建立为霍乱的诊断提供了又一有效手段。     

复方积雪草对FGS鼠肾细胞因子mRNA表达影响的实验研究

目的：观察复方积雪草的抗肾纤维化作用及其对FGS实验鼠肾细胞因子mRNA表达的影响。方法 BALB／C小鼠尾静脉一次性注射阿霉素诱导FGS肾炎模型，以复方积雪草制剂灌胃治疗4周。分别观察尿蛋白和肾脏病理化，同时提取肾组织总RNA，通过逆转录掺入荧光素，再与细胞因子表达谱基因芯片杂交，并行扫描分析。结果：复方积雪草治疗组蛋白尿较模型明显减轻，同时实验鼠肾小球硬化的病理明显改善：芯片检测证实，复方积雪草可下调PDGF-α、PDGF-β、PDGF受体、VEGF、IL-9、IL-7R2、MIP、c-myc、Jun等细胞因子mRNA的表达，上调GM—CSF的表达。结论：复方积雪草具有抗肾纤维化作用，其作用效应可能是通过对多种细胞因子mRNA共同调控的结果。     

乙型肝炎病毒耐药寡核苷酸基因芯片的制备及特性分析

在构建了乙型肝炎病毒(HBV)拉米夫定抗药性相关HBV多聚酶基因突变体基础上,设计制备了HBV耐药寡核苷酸基因芯片,并对其特性进行了分析,为建立合理高效的HBV治疗方案,指导临床合理用药提供快速检测手段。一、材料与方法1.HBV耐药寡核苷酸芯片制备:因HBV拉米夫定抗药性相关突变主要位于HBV多聚酶基因的L526,A546,M550