基因芯片法测定中国人群细胞色素P4502D6的基因多态性

目的：根据细胞色素P4502D6基因序列的多态性分布特点，针对在中．国人群药物代谢中具有潜在作用的突变位点C188T和G4268C，设计寡核苷酸探针，制备寡核苷酸芯片，探讨基因芯片技术应用于CYP2D6基因分型的可行性，观察中国人群细胞色素P4502D6的基因多态性。 方法：实验于2005-02／08进行。以克隆并已测序的细胞色素P4502D6基因重组质粒作为标准样品，扩增产物与芯片进行杂交，制备基因芯片，测定312名中国健康志愿者（已签署知情同意书）细胞色素P4502D6基因分型，并使用直接测序法对结果进行验证。 结果：312名全部进入结果分析。①312名中国．健康志愿者中CYP2D6＊2和CYP2D6＊10的变异频率分别为CYP2D6＊2W＊10W 8．3％，＊2H＊10W13．5％．＊2M＊10W 10．6％．＊2M＊10H 17．0％，＊2M＊10M 34．6％，＊2H＊10H 9．6％，＊2H＊10m 6.4％。②对部分样本采用直接测序的方法进行进一步确证，结果完全吻合。 结论：①CYP2D6＊2和CYP2D6＊10突变型等位基因在中国人群中出现的频率较高。②基因芯片法简便、快捷，适用于中国人群细胞色素P4502D6基因分型研究。     

寡核苷酸芯片方法检测儿童急性淋巴细胞性白血病融合基因

目的 探讨寡核苷酸芯片在儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)融合基因检测中的应用.方法 针对儿童ALL常见的5种融合基因:TEL/AML1、E2A/PBX1、BCR/ABLp190、BCR/ABLp210、MLL/AF4,设计特异的融合基因片段为芯片探针,合成后用点样仪点片制成寡核苷酸芯片.提取疾病初期白血病患儿的骨髓/外周血标本的总RNA,进行多重巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光标记并与芯片杂交,以检测白血病细胞中特异融合基因.结果 该芯片可以从患儿骨髓样本RNA中准确检测到阳性内参序列、特异的融合基因以及融合位点.结论 采用寡核苷酸芯片方法,可快速、同时筛选出5种染色体结构畸变产生的融合基因及融合位点,为ALL患儿危险分层、治疗选择、预后判断提供重要依据.此种方法应用于筛查初治白血病患儿融合基因表达时优缺点并存,具有一定临床实用价值.     

基因治疗高血压的研究进展

与传统治疗高血压药物相比,基因治疗不但具有作用特异性强、效果稳定、持续时间长、毒副作用小等优点,而且还有可能从根本上控制具有家族遗传倾向的高血压发生,从而降低人群中高血压的发病率.本文综述了目前基因治疗高血压的研究概况,讨论了基因治疗前景及其面临的主要问题.     

以细胞凋亡通路为靶点的抗肿瘤分子治疗研究进展

细胞凋亡异常与肿瘤的发生存在密切的关系。通过靶向细胞凋亡通路中的关键分子，诱导肿瘤细胞凋亡，成为肿瘤分子治疗的一个热点和方向。本文就细胞凋亡的分子机制及针对凋亡通路中的关键调控分子为靶点的抗肿瘤研究进展进行综述。     

四物汤对人骨髓基质细胞蛋白质表达的作用

目的：考察四物汤对骨髓基质细胞HFCL增殖及蛋白质表达的影响,探讨四物汤补血作用的分子机制。方法：分别用MTT法、流式细胞术和蛋白质组学方法测定四物汤对HFCL增殖、细胞周期及蛋白质表达的影响。结果：四物汤能促进HFCL的增殖,提高其增殖指数,并使HFCL的12种蛋白质表达上调,5种下调。结论：四物汤能促进HFCL增殖,作用于多个蛋白质靶点,间接发挥补血作用。     

复合探讨PCR定量检测HBV方法的建立及临床应用

我们采用复合探针技术,设计、建立的实时、荧光定量检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方祛,对实验条件进行了优化,并对临床提供的２０２份血清标本进行ＨＢＶ ＤＮＡ检测,与ＥＬＩＳＡ方法结果进行比较。 一、资料与方祛 １ 资料：２０２份血清标本由重庆医科大学附属第一医院提供;ＨＢＶ标准质粒由军事医学科学院放射研究所配制,定量;仪器为ｉＣｙｃｌｅｒ自动荧光ＰＣＲ仪（美国ＢＩＯ－ＲＡＤ公司生产）;ＨＢＶ ＥＬＩＳＡ试剂盒由上海科华实业有限公司提供;特异性引物的设计和合成为根据Ｐｒｉｍｅｒ３软件,自行设计并合成了以下引物序列：…     

API4基因为靶的反义寡核苷酸体内外抗肿瘤研究

反义技术是近十几年兴起的一种生物高技术 ,用反义技术封闭和抑制特定基因的表达是基因治疗的重要组成部分。本研究选取ＡＰＩ4基因为靶标进行抗肿瘤反义寡核苷酸的筛选。ＡＰＩ4是凋亡抑制因子在最终发展成肿瘤的转化细胞中表达 ,可抑制ｃａｓｐａｓｅ活性和抗癌药物等诱导的凋亡。选择ＡＰＩ4ｍＲＮＡ二级结构中不稳定区域为反义药物作用的靶点 ,设计了 12条序列 ,将ＨｅｐＧ2细胞接种于 96孔培养板 ,每孔接种 5× 10 3 细胞。待长成 5 0 %～ 6 0 %细胞层后 ,无血清状态下 ,采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ试剂转染。每条反义寡核苷酸设置 0 .2…     

AIM-1基因为靶的反义寡核苷酸抗肿瘤活性研究

[目的]以AIM－I基因为靶筛选抗肿瘤药物。[方法]根据AIM－1mRNA的二级结构设计了9条反义寡核苷酸药物,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,从中筛选出一条序列并对之进行优化。最后对7＃进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率进行分析。[结果]17＃在体内外具有良好的抗肿瘤活性。[结论]AIM－1可作为肿瘤治疗的新靶点。     

乳糖化多聚赖氨酸导向反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒的作用

目的 研究乳糖化多聚赖氨酸（Gal-PLL）导向反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒（HBV）基因表达的特异性抑制作用。方法 根据聚合酶链反应（PCR）产物直接测序结果,在HBV U5样序列区合成了一段16聚硫代磷酸的反义寡核苷酸,并将其与肝靶向配体GaL-PLL连接,在2.2.15细胞比较,观察了它们对HBV基因表达的影响,结果 通过测序确定了2.2.15细胞中的HBV DNA属于HBV表面抗原ayw1亚型,并将此用于反义寡核苷酸的序列设计;经荧光组化分析表明,Gal-PLL对大鼠肝组织有选择性亲和力;Gal-PLL与DNA形成复合物的最佳摩尔比为2：1,在相同实验条件下,硫代磷酸反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为70％和58％,而Gal-PLL硫代磷酸反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为96％和82％,同时培养上清液和细胞中HBV DNA的含量明显下降,无关序列寡核酸无明显效果,寡核苷酸对细胞未产生毒性,结论 肝靶向配体和反义寡核酸的复合物可以通过无唾液酸糖蛋白受体靶入2.2.15细胞内,并对HBV基因表达和复制产生特异性抑制作用。     

肾分化调控的相关因子

随着新技术的应用,人们相继发现了参与肾分化调控的相关因子,有关的基因、蛋白对肾细胞分化、器官形成发挥了重要作用。本综述介绍了ＷＴ－１、Ｐａｘ－２、Ｗｎｔ４、ＢＲ－２等基因及肾素－血管紧张肽系统、转化生长因子β和肝细胞生长因子、整合蛋白等因子在肾分化中的调控功能,为阐明肾发育及疾病发生机制提供线索。