肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析

目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.     

超氧化物歧化酶药用研究的进展

超氧化物歧化酶 (ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ ,ＳＯＤ)是一种重要的氧自由基清除剂[1] ,能催化超氧阴离子发生歧化反应。从动物血、脏器及某些植物中提取的ＳＯＤ已广泛应用于保健品、食品添加剂及化妆品等领域 ,用重组技术生产的人源性ＳＯＤ对某些适应症已进入临床研究 ,现将有关ＳＯＤ药用研究进展综述如下。1　ＳＯＤ的生化及生物学物性ＳＯＤ是一种酸性金属蛋白质 ,存在于真核细胞胞液 (Ｃｕ ,Ｚｎ ＳＯＤ)、线粒体 (Ｍｎ ＳＯＤ)和原核细胞(Ｆｅ ＳＯＤ)中。由于Ｃｕ ,Ｚｎ ＳＯＤ中酪氨酸和色氨酸的含量很低 ,所以紫外…     

医疗器械GLP与医疗器械生物学评价

目的论述在医疗器械生物学评价中实施GLP的重要性与必要性。方法介绍GLP的背景、历史、目的和适用范围、GLP对实验设施的要求;介绍国外医疗器械GLP的法规要求和国内现状,以及医疗器械GLP试验的范围。结果医疗器械GLP是国外在产品注册上的基本要求,但在我国尚未施行。结论我国施行医疗器械GLP是必然趋势,是实现产品注册与国际接轨的前提。     

睫状神经营养因子突变体的中试工艺研究

目的进行睫状神经营养因子及其突变体的应用开发,研究其中试生产工艺。方法摸索了不同的发酵条件以确定最佳的发酵工艺,采用稀释复性-离子交换色谱-分子筛相结合的方法对其进行复性和纯化。结果得到的蛋白经HPLC检测纯度在95%以上,比活性的达到2.0×106U/mg,末端的15个氨基酸序列和Western blot的结果与要求相符。结论中试工艺简单、迅速,所需设备廉价,有利于大规模生产。     

优化等电聚焦电泳方法评价重组人红细胞生成素质量

目的对等电聚焦电泳(IEF)分析方法进行优化,以更好地评价重组人红细胞生成素(rHuEPO)产品的质量。方法用优化的IEF方法分析rHuEPO异构体分布,同时参照rHuEPO的体内外生物学活性和唾液酸含量结果,综合评判rHuEPO的质量。结果建立的优化等电聚焦电泳方法分析rHuEPO,图谱清晰,检测结果可靠。结论IEF方法的优化为rHuEPO的质量控制提供了快捷,准确的手段。     

注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂质量标准研究

目的:建立注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(HTUPA)的质控方法和质量标准。方法:以纤维蛋白平板法测定HTUPA 的生物学活性,还原型 SDS-PAGE 确定相对分子质量,SDS-PAGE 和反相高效液相色谱测定纯度,毛细管电泳法测定等电点,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按2005年版中国药典三部规定进行。结果:用建立的方法对原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组 DNA 制品质量控制技术指导原则》和2005年版中国药典三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂产品的常规检定。     

重组人白细胞介素-11的胰蛋白酶切肽图分析

目的　建立标准肽图分析法,用于rhIL-11的质量控制。方法　应用Alliance HPLC系统及其温控自动进样器探索最佳胰蛋白酶切和色谱条件。结果　连续3批rhIL-11样品的RP-HPLC图谱完全一致,与rhIL-11对照品比较,有20个峰与对照品吻合,但第6峰的峰高和峰面积均明显较小,且在第9和第10峰之间多一个峰,说明rhIL-11样品蛋白质结构与对照品比较存在细小差别。这种差别经多肽片段分离和氨基酸序列测定证明是由于样品N端多2个氨基酸引起的。结论　本法精确度高、重复性好、自动化程度高,可用于rhIL-11的质量控制。     

TDAR在药物临床前毒理学研究中的应用

目的 TDAR试验被认为是检测药物潜在免疫毒性预测性较好的功能性试验,本文综述总结TDAR检测方法在药物临床前毒理学研究中应用的一般原则,以便同行参考。方法通过综合分析、对比,总结国内外文献资料中关于TDAR的实验方法和评价,得出在药物临床前毒理学研究中应用的一般原则。结果 T细胞依赖性抗体反应（TDAR）是检测免疫功能的主要试验。TDAR通过人为引入外来抗原,反映药物或化学物质对免疫系统整体的影响,目前在药物免疫毒理学研究中逐渐得到广泛应用。结论 TDAR试验是检测药物潜在免疫毒性预测性较好的功能性试验,该试验可以用来在临床前的反复给药毒性试验或者临床试验中检测免疫功能的改变,可以对候选药物的免疫调节和免疫毒性特点进行早期预测。     

DNA-天坛痘苗复合型艾滋病疫苗Balb/c小鼠重复给药毒性研究

目的:对DNA天-坛痘苗复合型艾滋病疫苗进行重复给药毒性研究,以支持其Ⅰ期临床研究方案的制定。方法:Balb/c小鼠肌肉注射DNA疫苗3次后,皮内接种痘苗1次加强免疫。检测疫苗对一般毒理学指标的影响、监测疫苗的免疫原性、免疫毒性。结果:DNA天-坛痘苗复合型艾滋病疫苗具有较强的免疫原性,可以诱导较强的T细胞免疫反应且可以维持较长时间。未见疫苗相关的一般毒性和免疫毒性。结论:DNA天-坛痘苗复合型艾滋病疫苗可以诱导较强的体液免疫和细胞免疫反应,对一般毒理学指标未见显著影响,未见明显免疫毒性。目前该疫苗正处在临床研究阶段。     

ICH遗传毒性研究指导原则修订的最新进展

目的介绍ICH关于遗传毒性研究的指导原则修订的最新进展。方法介绍ICH遗传毒性研究指导原则修订的背景、修订的经过及要点。结果修订的指导原则在标准试验组合、体内试验和体外试验的选择、结果分析及评价等方面做了若干修订,提出了新的要求。结论修订后的指导原则ICH S2更具科学性和可操作性。