红芪多糖和黄芪多糖对小鼠体液免疫功能的影响

黄芪[Astragalus Membranaceus(Fish)Bge]是祖国医学中最常用的补益药之一,红芪(Radix Hedysari)与黄芪系同科异属,盛产于甘肃等地。中医用药红芪、黄芪不分,在西北地区尤为普遍。关于黄芪的免疫药理研究报道较多,而对红芪的研究尚在初始阶段。现已证明,红芪多糖对小鼠巨噬细胞的吞噬功能及E-花环形成率有明显的促进作用,但对体液免疫功能的作用尚未见报道。本文主要研究了红芪多糖和黄芪多糖对小鼠体液免疫功能的影响,并将二者平行实验进行比较,结果如下。     

自旋标记鬼臼毒素衍生物对人淋巴性白血病Molt 4B细胞周期和大？…

AIM: To examine the effect of the spin labeled derivatives of podophyllotoxin, N-podophyllic acid-N"-[4-(2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy)] thiosemicarbazide (GP4) and 4-[4"-(2",2",6",6"-tetramethyl-1"-piperidinyloxy) amino]-4'-demethylepipodophyllotoxin (GP7) on the cell cycle and macromolecular synthesis of human lymphoid leukemia Molt 4B cells in vitro. METHODS: MTT assay, 3H incorporation, and flow cytometer were used. RESULTS: GP4, GP7, and etoposide 0.02-100 mmol.L-1 cultured for 48 h inhibited the proliferation of human lymphoid leukemia Molt 4B cells. IC50 values of GP4, GP7, and etoposide were 0.11, 4.7, and 1.6 mmol.L-1, respectively. DNA and protein syntheses were obviously suppressed by GP4, GP7, and etoposide 10 mmol.L-1 for 48 h. After Molt 4B cells were treated with GP4, GP7, and etoposide 10 mmol.L-1 for 6 and 12 h, the mitotic index was increased by GP4 and reduced by GP7 and etoposide. According to flow cytometric BrdU/DNA analysis, GP4 slightly retarded S phase and mainly arrested cell cycle progression in G2/M phase, whereas GP7 similar to etoposide induced cells accumulated at S phase and retarded the cells in G2 phase. CONCLUSION: GP4 and GP7 inhibit the proliferation of Molt 4B cells, but the mechanisms are different.     

肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析

目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子活性测定标准品的研制

目的建立效价测定用的重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)国家标准品.方法标准品按WHO有关要求进行制备、分装、冻干、检测,用GM-CSF国际标准品为标准进行协作标定.结果冻干重组GM-CSF标准品经检测外观,无菌实验合格,水分为0.93%,加速热稳定实验表明其生物学活性在温度为-20℃,4℃和25℃,37℃条件下23个月保持稳定.该标准品经3家实验室协作标定共21次测定,几何平均效价为1.77×105IU/支.实验均数的95%可信区间为(1.64～1.90)×105IU/支,单次实验的95%参考值范围为(1.23～2.34)×105IU/支,平均可信限率为6.962%.结论该批重组GM-CSF国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,效价定为1.8×105IU/支,编号为98/01.     

毕赤酵母表达重组hPK-5蛋白不均一性的鉴定

对毕赤酵母表达重组人纤溶酶原Kringle 5(hPK-5)蛋白的不均一性进行了鉴定.应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法及分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行纯度分析.采用糖蛋白染色法鉴定是否为糖蛋白.以Edman降解法测定N端氰基酸,采用高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱(HPLC-ESI-Q-TOF-MS)联用技术测定蛋白质精确分子质量.结果表明:SDS-PAGE测定为单一条带,纯度大于95%,SEC-HPLC测定为单一色谱峰,纯度大于95%,RP-HPLC测定为几个紧密相连的峰.糖蛋白染色为阴性.N端氨基酸测定结果表明含多个N端氨基酸.液质联用测定精确分子质量的结果表明hPK-5蛋白是相对分子质量分别为10 744.88,10 646.00,10 533.00和10 419.63的混合物.以上结果准确鉴定出毕赤酵母表达的该重组hPK-5蛋白是C端完整而N端依次缺失0～3个氨基酸的不均一蛋白.     

睫状神经营养因子突变体的中试工艺研究

目的进行睫状神经营养因子及其突变体的应用开发,研究其中试生产工艺。方法摸索了不同的发酵条件以确定最佳的发酵工艺,采用稀释复性-离子交换色谱-分子筛相结合的方法对其进行复性和纯化。结果得到的蛋白经HPLC检测纯度在95%以上,比活性的达到2.0×106U/mg,末端的15个氨基酸序列和Western blot的结果与要求相符。结论中试工艺简单、迅速,所需设备廉价,有利于大规模生产。     

加快我国轮状病毒相关产品研发与质控技术平台的建设

轮状病毒（RV）是引起儿童重症腹泻最主要的病原体，由RV引起的腹泻约占秋季腹泻的50％。全世界每年因RV感染可导致2400万人次就诊、230万人次住院和60万人死亡。目前对于这种腹泻的治疗除补液以外没有特效治疗药物，因此预防接种疫苗是最有效和现实的措施。RV疫苗已成为全球疫苗和免疫联盟（GAVI）决定优先考虑研发的疫苗，以促进《千年发展目标》中目标4即“降低儿童死亡率”这一目标的实现。     

糖链切除对IgG1型单抗结构及功能的影响

目的:分析IgG1型单抗中糖链切除对其结构与功能的影响。方法:分别测定糖链切除前后该抗体的圆二色谱、抗原结合能力以及体外补体依赖的细胞毒(CDC)活性,分析糖链切除对该单抗结构与功能的影响。结果:糖链切除后抗体的圆二色谱发生改变,抗原结合能力下降,体外CDC活性基本消失。结论:糖链是维持该IgG1型单抗正常的结构和功能的重要组成部分。     

DNA-天坛痘苗复合型艾滋病疫苗Balb/c小鼠重复给药毒性研究

目的:对DNA天-坛痘苗复合型艾滋病疫苗进行重复给药毒性研究,以支持其Ⅰ期临床研究方案的制定。方法:Balb/c小鼠肌肉注射DNA疫苗3次后,皮内接种痘苗1次加强免疫。检测疫苗对一般毒理学指标的影响、监测疫苗的免疫原性、免疫毒性。结果:DNA天-坛痘苗复合型艾滋病疫苗具有较强的免疫原性,可以诱导较强的T细胞免疫反应且可以维持较长时间。未见疫苗相关的一般毒性和免疫毒性。结论:DNA天-坛痘苗复合型艾滋病疫苗可以诱导较强的体液免疫和细胞免疫反应,对一般毒理学指标未见显著影响,未见明显免疫毒性。目前该疫苗正处在临床研究阶段。     

关于生物制品残余DNA质量控制问题

随着生物医药技术的飞速发展,越来越多的哺乳动物细胞,尤其是连续传代细胞系用于生产疫苗和治疗性生物制品。重组蛋白制品的用量随着临床治疗效果的需求越来越大,由微克级上升到了毫克甚至克级,需要长期反复用药的生物制品也越来越多。同时疫苗的使用者为健康人群,而且很多疫苗使用人群也扩大到婴幼儿,这使得药品监管部门不得不更加重视疫苗等生物制品的安全性,其中细胞残余DNA的质量控制一直是人们关注的热点。本文就不同时期国内外对于DNA残留问题的看法、DNA残留量质控标准的制定、DNA残留量检测方法等研究进展作一综述,并提出残余DNA问题未来需要进一步开展的工作。