肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析

目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.     

应用shRNA技术研究NDRG2在人胃癌细胞SGC7901增殖中的作用

目的：构建针对人N-myc下游调节基因2（NDRG2）的短发夹RNA（shRNA）表达载体pSNAV-shRNA，观察其在SGC7901细胞中对NDRG2的抑制作用以及NDRG2被抑制后细胞增殖能力的变化。方法：PCR扩增针对NDRG2的shRNA表达框架，构建pSNAV-shRNA质粒，转染SGC7901细胞，通过RT—PCR，免疫印迹试验检测其对NDRG2表达的影响；通过细胞周期分析，软琼脂集落形成试验检测细胞增殖能力的变化。结果：将构建好的pSNAV—shRNA质粒转染SGC7901细胞后，NDRG2的表达受到明显的抑制，细胞周期G1期阻滞，集落形成能力降低。结论：构建的pSNAV—shRNA质粒能够有效抑制NDRG2在SGC7901细胞中的表达，降低SGC7901细胞的增殖能力。     

GLP法规下医疗器械生物学试验的实施要点

目的论述GLP法规下医疗器械生物学试验的实施要点。为我国推行医疗器械GLP以及为从事医疗器械检测检验的实验人员提供参考。方法介绍医疗器械生物学试验的特点、生物学评价的原则及生物学试验的实施要点。结果与结论医疗器械生物学试验应根据其材料和用途等特征选择合适的试验方法,依据风险评价、风险-利益分析、GLP及重新评价等原则进行安全性评价。     

流体膜中重组人角质细胞生长因子-2含量测定

目的以甲壳素为主要基质制成以重组人角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)为主要活性成分的新型制剂流体膜用于治疗烧烫伤促愈合,为该新制剂的质量标准制定可行的活性成分定量测定方法。方法利用rh-KGF-2的特异性抗体性质,采用酶联免疫法(间接ELISA法)测定其在该制剂中的含量,并进行了方法学验证。结果制剂中其它成分不干扰rhKGF-2的测定;线性范围为0~9μg.mL-1,回归系数为0.97,检测限度为0.56μg.mL-1;批内和批间精密度均较高,CV%分别为2.0%,1.01%;回收率为99.1%。测定了3批试制品,平均含量为1.62μg.mL-1。结论本方法简便,准确,可用于该制剂中rhKGF-2的含量测定。     

重组腺病毒人白细胞介素2的质量分析

目的通过对重组腺病毒人白细胞介素2(Adv-IL2)的质量研究和实验方法参数的选择,建立Adv-IL2的质量控制标准。方法选用CPE法测定病毒滴度;将病毒转染Hela细胞,表达出IL-2,分别用MTT法和ELISA法测定IL-2的活性和表达量。建立了UV和IE-HPLC系统分析纯度;琼脂糖凝胶电泳检查基因组分子量和基因组酶切图谱;PCR法鉴定病毒特征基因E2B区、IL-2表达基因盒和外源因子(复制型病毒RCV,HIV,HBV和HCV);按照《中国生物制品规程》的有关规定进行了其他项目检查。结果测定的重组腺病毒人白细胞介素2原液滴度达3×10¹⁰ pfu·mL^-1。IL-2表达活性达700 U·mL^-1,表达量约25 ng·mL^-1。制品的A_{260 nm}/A_{280 nm}为1.23;IE-HPLC纯度检查大于98%。基因组分子量和基因组酶切图谱以及病毒特征基因E2B区和IL-2表达基因检查结果均在理论值范围;复制型病毒RCV,HIV,HBV和HCV检测均呈阴性;其他项目均符合规定。结论建立了重组腺病毒人白细胞介素2的质量标准,并可有效地控制制品的质量。