濒临截肢肢体保肢治疗的临床综合护理

创伤所致肢体大面积皮肤软组织缺损,致骨、肌腱、血管、神经外露,或发生节段性的骨缺损、神经血管缺损及骨髓炎等,通常将这种毁损伤的肢体称濒临截肢的肢体[1].此类损伤多须采用组织瓣联合移植的方法,才有可能保留肢体、恢复肢体的功能、减少截肢及感染率.我院自2000年6月至2011年6月,应用皮瓣联合移植或皮瓣组合骨瓣联合移植修复濒临截肢肢体75例,获得满意疗效,现将护理体会介绍如下.     

重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔脂肪干细胞体外诱导的成骨分化

背景：骨形态发生蛋白2具有很强的诱导干细胞成骨活性。目的：构建人骨形态发生蛋白2基因真核表达载体,探讨其转染脂肪干细胞后的成骨效果。方法：通过噬菌斑原位杂交筛选人混合细胞cDNA文库获得人骨形态发生蛋白2基因,与真核表达载体pcDNA3.1-连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2。利用脂质体LipofectamineTM2000分别介导人骨形态发生蛋白2基因、EGFP基因转染第4代脂肪干细胞,并经G418进行筛选。结果与结论：酶切鉴定及DNA测序结果证实重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2构建成功。经计算脂质体介导的脂肪干细胞瞬时转染率为（18.0±0.42）%,并经过G418筛选后获得了稳定转染的细胞。细胞生长曲线表明转染后对脂肪干细胞生长、增殖无明显影响。ELISA检测发现人骨形态发生蛋白2组的人骨形态发生蛋白2因子表达量均高于EGFP组及未转染组,且能够稳定表达。经人骨形态发生蛋白2基因转染的脂肪干细胞的Ⅰ型胶原含量、碱性磷酸酶活性以及钙结节数目均比EGFP组及未转染组有明显升高。     

骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞修复兔缺血性股骨头坏死

背景：骨形态发生蛋白2和脂肪源性干细胞都有很强的成骨能力,对于缺血性股骨头坏死的修复有重要意义。目的：观察骨形态发生蛋白2体内复合脂肪源性干细胞成骨治疗兔股骨头缺血坏死的疗效。方法：48只新西兰大白兔采用液氮冷冻法造模,随机分为对照组,髓芯减压组,脂肪源性干细胞组,骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组。结果与结论：脂肪源性干细胞组与骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组兔股骨头坏死区域的组织修复旺盛,新生骨小梁较多且逐步强化,X射线未见明显的囊性变和股骨头塌陷发生。在8周时骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组骨小梁及骨髓组织生长较单纯脂肪源性干细胞组更旺盛。表明骨形态发生蛋白2因子复合脂肪源性干细胞植入股骨头坏死模型后成骨较多,修复坏死区域功能较强。     

兔脂肪干细胞在含有转化因子和转铁蛋白培养基中向软骨细胞的分化

背景：成软骨的种子细胞的选择是软骨组织工程研究中的关键因素。目的：观察脂肪干细胞在含有转化因子和转铁蛋白诱导条件下向软骨细胞分化的能力。方法：取新西兰大白兔颈背部脂肪组织,机械分离及酶消化法获得脂肪干细胞,显微镜下观察细胞黏附及生长情况;加入含有转化因子β1和转铁蛋白的诱导培养基培养2周后以免疫组化方法检测Ⅱ型胶原的表达。结果与结论：从兔脂肪组织中分离出的干细胞原代培养时24h贴壁,96h后达80%融合;于软骨诱导培养基内向软骨诱导7d后形成软骨结节,14d后Ⅱ型胶原免疫组化阳性。结果初步表明兔脂肪干细胞经诱导后可以向软骨细胞分化。     

微型钢板治疗MasonⅡ、Ⅲ型桡骨小头骨折疗效观察

目的探讨指骨微型钢板螺钉内固定治疗桡骨小头骨折的疗效。方法 15例桡骨小头MasonⅡ、Ⅲ型骨折采用切开复位微型钢板内固定,早期进行功能锻炼康复治疗。结果术后随访6～36个月,平均15个月,按Broberg和Morrey肘部评分标准进行判定,优9例,良5例,中1例,无差病例,未发现桡骨小头坏死及骨折不愈合病例。优良率为93.3%。结论应用指骨微型钢板对桡骨小头骨折MasonⅡ、Ⅲ型作内固定,具有复位满意、固定可靠、方法简单、可以早期进行功能锻炼等优点,是治疗桡骨小头骨折较理想方法。     

正常踝外侧副韧带的解剖及MRI观察对比研究

目的解剖观察踝关节外侧各韧带的形态特点,并与低场MR扫描测量数据进行对比,为临床提高MR诊断踝关节韧带损伤提供依据。方法将10例正常成人尸体足踝关节标本（每例取一侧）进行解剖观察并测量踝外侧各韧带的长、宽、厚度值,与自然位（跖屈约20。）MR扫描测量结果进行统计学分析。结果自然位MR检查能较好地显示各韧带的解剖形态,MR测量距腓前韧带（ATFL）及跟腓韧带（CFL）的平均长度分别为（14．190±0．595）mm和（23．46±1．578）mm,宽度（8．76±0．883）mm和（5．700±0．442）mm,厚度（1．840±0．190）mm和（2．110±0．296）mm。解剖测量距腓前韧带及跟腓韧带的平均长度分别为（14．128±0．610）mm和（23．452±1．506）mm,宽度（8．782±0．916）mm和（5．704±0．453）mm,厚度（1．882±0．224）mm和（2．106±0．313）mm,解剖和MR各测量值间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论自然位是MR检查踝关节韧带损伤的较理想体位,解剖与MR测量值基本一致,低场MRI能较准确显示踝外侧副韧带的形态。     

GJIC渐弱剂18α-甘草次酸对兔脂肪细胞向成骨细胞横向分化的影响

目的探讨缝隙连接通讯渐弱剂18α-甘草次酸(GA)对脂肪细胞向成骨细胞横向分化及细胞间缝隙连接通讯的影响。方法选取3月龄新西兰大白兔腹股沟处脂肪组织,分离提取成熟脂肪细胞,使其去分化得到去分化脂肪细胞,取第三代去分化的脂肪细胞进行成骨诱导,加入GJIC渐弱剂18α-GA设为减弱组,并设立对照组,MTT法观察18α-GA对细胞倍增是否有影响,进行茜素红钙结节染色和I型胶原免疫组化染色对成骨细胞定性检测,Western blot技术和划痕标记染料示踪法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达。结果 MTT法检测结果显示18α-GA对细胞生长增殖无显著影响。茜素红染色显示均发现紫红色结节。免疫组化染色显示减弱组I型胶原表达减弱,SLDT法显示减弱组荧光染料扩散低于对照组,Western blot技术检测结果显示减弱组Cx43蛋白的表达下降。结论 18α-GA可以减弱缝隙连接通讯以降低脂肪细胞向成骨细胞分化的能力。     

SD大鼠脂肪干细胞的体外分离培养及实验研究

目的探索从脂肪组织中分离、培养SD大鼠脂肪干细胞(Adipose tissue-derivedstromal cells,ADSCs)的方法,同时观察其生物学特性。方法取SD大鼠腹股沟区皮下脂肪组织,0.1%Ⅰ-型胶原酶消化分离、培养ADSCs,流式细胞术测定CD44、CD45和CD49d抗原的表达,MTT比色法测定细胞生长活力,诱导培养基向脂肪细胞定向分化,Oil Red O染色鉴定。结果分离出的细胞CD44表达阳性,CD49d表达弱阳性和CD45表达阴性,其生长曲线呈倒"S"形,成脂诱导培养基定向诱导分化,经Oil Red O染色呈红色。结论本次实验所分离出来的SD大鼠ADSCs在体外具有生长稳定,增殖较快并能诱导分化的特点。     

交锁髓内钉治疗股骨干及股骨髁上骨折

目的评价交锁髓内钉治疗股骨干及股骨髁上骨折的临床效果。方法2000年8月至2004年2月共采用顺行交锁髓内钉治疗股骨干骨折36例，逆行交锁髓内钉治疗股骨髁上骨折12例。结果随访时间平均为1年零3个月，骨折均愈合，愈合时间为6．5-11个月，平均为8．5个月。采用Jonher—wruh评分标准，本组优43例，良4例，1例患者膝关节活动屈曲最后仅25度；所有病例无感染、周围神经损伤、髓内钉断裂、锁钉断裂及再骨折等发生。结论应用交锁髓内钉治疗股骨骨折操作简单，固定牢靠，患者卧床时间短，可以早期进行功能锻炼，效果良好。     

利用脂肪干细胞构建软骨修复兔膝关节软骨缺损的初步研究

目的 利用兔同种异体软骨脱细胞基质支架和脂肪干细胞体外构建组织工程软骨,探讨其修复关节软骨损伤的可行性.方法 将新西兰大白兔的脂肪干细胞与软骨脱细胞基质支架复合,于软骨细胞方向诱导培养基中培养两周,构建组织工程软骨.兔24只随机分为A、B、C 3组, A组关节软骨缺损处置入经诱导的脂肪源干细胞复合软骨基质支架, B组缺损处只置入软骨基质支架, C组软骨缺损处不做任何处理.分别于术后第12周处死动物,修复处行大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组化染色和透射电镜检测.结果 A组软骨缺损处被类软骨组织填充,修复区表面光滑;Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色阳性;电镜下可见软骨陷窝内有细胞结构存在,且有大量均匀颗粒状细胞分泌基质成分存在,细胞周围大量胶原纤维.B组软骨缺损处为纤维组织状物填充,C组软骨缺损处无修复组织填充.结论 脂肪干细胞与软骨脱细胞基质复合并向软骨诱导后可良好地修复关节软骨缺损,具有替代正常软骨的潜力.