用MTT比色法建立B型CpG ODN活性检测标准

目的:B型CpG ODN,BW006作为疫苗佐剂已进入临床试验阶段,所以需要建立稳定、安全、简便易行的活性检测方法以控制不同批次BW006的生产质量.方法:根据BW006具有刺激人PBMC和小鼠脾细胞增生的特点,选择无放射性污染的MTT比色法作为首选检测方案.用BW006刺激BALB/c小鼠脾细胞作为筛选平台,确定如下反应条件:脾细胞用量、培养板形状、BW006浓度、培养液体积和培养时间以及如何优化MTT检测过程以提高反应灵敏度.结果:用3 mg/L BW006与96孔平底板中含100 mL/L FBS的200μL无酚红RPMI1640培养的6×105个小鼠脾细胞在37℃含50 mL/L C02孵箱中共孵育36 h.随后每孔弃100 μL上清,加入MTT(5 g/L)10 μL,37℃避光孵育4 h使各孔充分形成甲瓒颗粒.每孔加入DMSO 150 μL,经平板振荡器振荡20 min至颗粒完全溶解,在酶标仪上检测A578值即可.结论:建立了无污染、造价低、可操作性强的BW006活性检测方法.     

心理咨询师该拥有怎样的特质？

近些年来，我国的心理咨询与心理治疗事业迅速发展，行业发展的需要已经对心理咨询与治疗工作的质量提出了更高的要求。人们开始关注，除了与心理咨询相关的知识与技能外，能够胜任心理咨询师工作的专业人员必须具备什么样的基本素质和人格特征？     

预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其抗原性的鉴定

目的研究预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其模拟S2蛋白的抗原性。方法用DNAStar软件对S2亚基序列进行分析,预测B细胞表位所在肽段。通过4轮PCR反应人工搭建预测表位cDNA序列并克隆到含有伴侣10基因的pET28a( )载体中,构成重组载体pET28-chap10-S2epi。重组蛋白Chap10-S2epi在E.coliBL21(DE3)中表达并以SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定。用纯化的chap10-S2epi免疫家兔制备抗血清,并通过ELISA判断Chap10-S2epi的抗原性。结果成功构建并在大肠杆菌中表达了Chap10-S2pei融合蛋白。Chap10-S2epi免疫的抗血清能识别真核细胞表达的SARS冠状病毒全长S2刺突蛋白。结论预测的SARS冠状病毒S2刺突蛋白B细胞表位肽能够诱导家兔产生针对S2蛋白的抗体,为研制抗SARS病毒基因工程疫苗奠定了基础。     

ELISA检测小儿血清MP抗体

为了对肺炎支原体(MP)肺炎作出早期诊断,以便得到及时治疗,本文对1987年12月至1988年5月我科住院肺炎患儿182例266份血清中MP抗体进行了检测,发现ELISA适于早期诊断MP感染。     

下颌骨骨折的手术体会

总结4例下颌骨骨折的护理配合方法，对术前访视、器械准备，手术护士的术后配合提出了相应的护理方案。     

乳头瘤病毒表位融合蛋白的基因定点诱变

目的定点诱变热休克蛋白-乳头瘤病毒表位融合蛋白的基因中编码半胱氨酸的密码子,解决下游纯化工作中产生多聚体蛋白的问题。方法在对蛋白质序列进行计算机表位预测及生物学特性分析的基础上,利用PCR的定点诱变技术,使原始基因序列中编码半胱氨酸的TGC突变为编码甘氨酸的GGC,克隆并表达了该基因编码的蛋白质。结果经克隆、测序后证实已成功获得突变基因,其编码的融合蛋白经纯化后没有多聚体的产生。结论利用PCR定点诱变技术对基因进行突变,在不改变蛋白质抗原性质的基础上,优化蛋白质序列,提高蛋白质纯化质量和效率。     

人酸性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌的高效表达

目的：探讨人酸性成纤维细胞生长因子（acidic fibroblast growth factor, aFGF）在大肠杆菌中高效表达的方法及重组人aFGF的生物学活性。方法：①通过PCR法扩增人aFGF引入点突变,对其密码子进行改造;②构建aFGF-pET-28a重组质粒并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;③重组蛋白的纯化及生物学活性研究。结果：通过PCR扩增,将设计的核酸水平突变引入到aFGF DNA中,使其自起始密码ATG后的前50个碱基均为原核细胞偏爱密码子、并保持原氨基酸序列不变,成功地实现了重组人aFGF在大肠杆菌中的高效表达,并通过降低培养温度使大肠杆菌中可溶性目的蛋白的含量大幅增加,原核表达的aFGF亦具有天然生物学活性。结论：通过对aFGF DNA碱基进行改造,可大幅度提高aFGF在大肠杆菌中的表达量,且目的蛋白具有良好的生物学活性。     

CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展

随着对含有CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)的结构、功能以及作用机理的深入研究,CpGODN已经应用于疾病的治疗和预防等许多方面。本文就CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展做一综述     

关于建立高血压前期人群高血压发病病证结合风险预测模型的思考

早期辨识可能发展为高血压病的高血压前期人群,有针对性地干预,可降低高血压病患病率,是疾病防治重心前移的战略需求。目前高血压前期人群发生高血压病的预测研究有一定局限性。提出通过收集高血压前期人群的危险因素及四诊信息,通过数据分析,筛选出高血压前期发展为高血压病的高危危险因素和中医证候要素,采用神经网络、支持向量机、决策树等多重方法建立模型,通过对模型验证、评价,构建危险因素和中医证候相结合的风险预测模型,为早期筛查可能发展为高血压病的高血压前期人群提供科学依据。