三七提取物对GES-1细胞及MNNG转化后GES-1细胞增殖的抑制作用

目的:通过细胞培养方法,由研究灌服三七提取物后的犬血清对胃癌前细胞的抑制作用入手,以期找出三七入血后的最佳作用时间点(段).方法:采用永生化的人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞以及N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitroso-guanidine,MNNG)进一步转化GES-1细胞后获得的细胞(以下简称MC细胞)作为胃癌前病变细胞的体外研究模型;以三七水提物给彼格犬一次性灌胃,取给药前的血清、给药后不同时点的血清作为实验药物血清.以四甲基固氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]法分别检测每个采血时间点上不同浓度(8%、4%、2%)含药血清对GES-1及MC细胞作用72 h后的抑制情况,并根据结果找出抑制作用最佳的药物血清时间点.结果:2 h和6 h含药血清刺激下的抑制率最高,两个时间点含8%药物血清的培养基对两种细胞的抑制作用均十分显著,其中2 h 8% GES-1组抑制率为70.8%(P<0.01),2 h 8%MC组抑制率为45.3%(P<0.01); 6 h 8%GES-1组抑制率为88.5%(P<0.01), 6 h 8%MC组抑制率为42.4%(P<0.01).结论:灌服三七提取物后2 h、6 h取的药物犬血清对GES-1及MC细胞的增殖抑制作用最强.     

益气活血中药对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的通过研究益气活血药对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)致心肌肥大的影响,寻找能抑制血管紧张素Ⅱ所致心肌肥大的益气活血中药.方法通过在培养乳鼠心肌细胞加入血管紧张素Ⅱ,观察细胞总蛋白质、细胞直径和细胞数;在此基础上,进行益气活血中药对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心肌细胞肥大实验药理学的研究.选用药物中,采用其有效成分丹参素、川芎嗪以及黄芪注射液,而党参和党参加丹参则采用血清药理学方法.结果AngⅡ加Losartan组和AngⅡ加丹参大、中、小剂量组分别减少心肌细胞总蛋白质含量14.0%(P＜0.05)、10.9%(P＜0.05)、7.7%和6.4%,减少心肌细胞直径22.0%(P＜0.01)、16.0%(P＜0.05)、13.9%(P＜0.05)和3.4%,而对心肌细胞数量无明显的影响;AngⅡ加川芎嗪大、中、小剂量组分别减少心肌细胞总蛋白质含量11.6%(P＜0.05)、6.8%和4.0%,减少心肌细胞直径16.0%(P＜0.05)、9.1%和66%,各组心肌细胞数量无明显差异,表明丹参素和川芎嗪与Losartan一样可以减少血管紧张素Ⅱ所引起的心肌细胞蛋白质含量的增加以及直径的增加,并呈量效关系,而对心肌细胞数量无明显的影响,不引起心肌细胞增殖;而益气药党参、黄芪和党参对丹参组无此作用.结论活血中药丹参、川芎及其有效成组分丹参素、川芎嗪可抑制AngⅡ引起的心肌细胞肥大并呈一定的量效关系;益气药党参、黄芪和党参加丹参在本研究中未发现有此抑制作用.应用活血化瘀中药抑制心肌细胞肥大的脏器改变,正是"阴在内,阳之守";而其药效表现于外,则显示心功能的改善、心脏跳动节律的正常,正是"阳在外,阴之使也".     

党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的:以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液进行缺氧缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率,APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,评价药效。结果:细胞存活率:与模型组犤(19.69±5.80)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组39.21±12.21)%,0.052mg/L组犤(犦犤(37.91±4.67)%犦能显著提高细胞存活率(P<0.001);细胞坏死率:与模型组犤(44.99±12.81)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(15.66±4.67)%犦,0.052mg/L组犤(23.98±4.04)%犦和0.0052mg/L组犤(20.50±5.19)%犦能显著降低细胞坏死率P<0.001);原位双染法细胞凋亡(率:与模型组犤(17.44±4.82)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(10.58±2.04)%犦,0.052mg/L组犤(11.61±2.35)%犦能显著降低细胞凋亡率(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡率:与模型组犤(8.55±3.84)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(3.85±1.92)%犦,0.0052mg/L组犤(3.45±2.22)%犦能显著降低细胞凋亡率P<0.05);(细胞内Ca2+平均荧光值,与模型组(47.     

扶正护脑胶囊对脑出血大鼠血清肌钙蛋白和心肌内皮素的影响

目的研究扶正护脑胶囊对脑出血大鼠血清肌钙蛋白Ⅰ（cTn Ⅰ）和心肌内皮素（ET）的影响及其作用机制。方法80只动物随机分为假手术组、模型组、扶正护脑胶囊组和安宫牛黄丸组，分别于术前及术后6h、24h、72h四个时相点取材。分别采用酶联免疫法（ELISA）和放免的方法检测血清cTnI和ET。结果血清cTnI：术后6h安宫牛黄组丸优于扶正护脑组（P〈0．05）；术后24h，两组比较无统计学意义（P〉0．05）；术后72h扶正护脑组优于安宫牛黄丸组（P〈0．05）。心肌ET：术后6h、24h安宫牛黄丸组优于扶正护脑组（P〈0．05），但术后72h扶正护脑组优于安宫牛黄丸组（P〈0．05）。结论扶正护脑胶囊能够减轻脑出血引起的心肌损伤，后期疗效好。     

三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用.方法建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤.流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量.结果神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加.结论三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关.     

益髓灵对小鼠脾细胞IL—2诱生和NK细胞活性的影响

为探讨临床疗效机理，我们研究了益髓灵对小鼠脾细胞ＩＬ－２和ＮＫ细胞活性的影响，结果提示，该药能使小鼠脾细胞ＩＬ－２和ＮＫ细胞活性增加，并和用药浓度有一定的关系，证明合理的用药浓度能提高小鼠机体免疫功能。     

流式细胞术检测细胞凋亡的分析软件比较

采用PI染色法 ,以流式细胞术通过检测DNA含量分析细胞凋亡 ,比较ModFitLT及CEL LQuest软件的分析数据。结果显示 :ModFitLT与CELLQuest软件均可分析细胞凋亡 ,ModFitLT软件更客观、准确。我们建议使用ModFitLT软件进行细胞凋亡相对定量分析 ,CELLQuest软件只用于细胞凋亡的定性分析。     

脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注模型的建立及牛胆酸的保护作用

目的:建立脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注模型,并观察了牛胆酸对其影响。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,以氧糖剥夺(Krebs液)再复氧复糖模型模拟缺血再灌注损伤,并用牛胆酸进行了干预,用MTT比色法测定A值代表细胞生存活性。结果:氧糖剥夺4h再复氧复糖12h可造成培养大鼠脑微血管内皮细胞损伤,牛胆酸干预后A值明显高于模型组(P<0.01)。结论:牛胆酸可显著减轻脑微血管内皮细胞体外模拟缺血再灌注细胞损伤。     

解毒活血益气方药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖及脂质过氧化的影响

目的:研究解毒活血益气方药物血清对血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)增殖、脂质过氧化的影响.方法:首先建立颈动脉粥样硬化狭窄模型,运用球囊原位扩张和喂饲高脂饲料致经皮动脉腔内成形术(percutaneous transluminal angioplasty,PTA)后再狭窄模型,造模成功后给予含解毒活血益气组方和阳性对照药(普伐他汀、巴米尔)的饲料进行治疗4周,获取模型动物和给药动物血清;采用MTT法、黄嘌呤氧化酶法和MDA测试盒观察药物血清作用12、24h时,对VSMC增殖、总SOD活力和MDA含量的影响.结果:解毒活血益气方在不同时相均能显著抑制VSMC的增殖;解毒活血益气方显著降低MDA的含量和增加总SOD活力,并呈现出良好的时效性.结论:解毒活血益气方可能通过抑制VSMC增殖,对抗脂质过氧化损伤等机制,干预PTCA术后再狭窄.     

温脉通对VSMC增殖及培养液中SOD MDA的影响

血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖是动脉粥样硬化等疾病的主要病理过程之一[1],抗VSMC增殖就可有效地防治动脉粥样硬化.本实验选择陈淑长教授临床治疗早期肢体动脉硬化性闭塞症(ASO)的有效方药温脉通,观察其对VSMC增殖及细胞周期的影响,同时测定培养液中SOD活性、脂质过氧化物的含量,探讨该方抑制VSMC增殖、防治ASO的作用机理.