泽兰对人冠状动脉平滑肌细胞增殖的影舷

目的研究中药泽兰对人冠状动脉平滑肌细胞（HCASMC）增殖的影响。方法利用体外细胞实验,通过人碱性成纤维生长因子和人表皮生长因子刺激细胞增殖,随机分为空白组、不同浓度泽兰水提物（LLST）组（320μg/mL、640μg/mL、1 280μg/mL、2 560μg/mL、5120μg/mL）和不同浓度泽兰醇洗脱物（LLCX）组（40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL）。采用MTT法和流式细胞术分别测定细胞OD值、G0/G1期、S期、G2/M期和apoptosis期细胞百分比,观察泽兰不同浓度药液对细胞增殖的影响。结果 MTT结果显示泽兰LLST和LLCX 10个剂量均可抑制细胞增殖（P〈0.05）。细胞周期结果显示：泽兰LLST 320μg/mL、640μg/mL、1 280μg/mL浓度组和泽兰LLCX40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL浓度组的G0/G1期细胞百分比较空白组增高（P〈0.05）;S期细胞百分比较空白组降低（P〈0.05）。抑制增殖作用的最佳药物浓度分别为1 240μg/mL和160μg/mL。结论中药泽兰具有抑制HCASMC增殖的活性。     

党参皂苷L1对抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的：观察扶正固本、益气类中药党参皂苷L1对缺氧缺糖再给氧所致大鼠大脑星形胶质细胞损伤是否有保护作用。 方法：实验于2004-08／2005-05在北京中医药大学东直门医院中医脑病研究室完成。①选用出生1d的Wistar大鼠40只，雌雄不拘。②分离大脑星形胶质细胞进行原代培养。加入含连二亚硫酸钠10mmol／L的无糖Earle液，置37℃体积分数0．05CO2孵箱中孵育90min进行缺氧缺糖处理。然后吸弃Earle液，加入不含连二亚硫酸钠的无血清DMEM培养液，继续置37℃体积分数0．05CO2孵箱中孵育90min进行再给氧处理。③将在相同或不同细胞培养板中的不同培养孔中细胞按随机抽签法分为6组（每10孔或8孔细胞为1组）;正常对照组（正常细胞培养），模型组（进行缺氧缺糖再给氧处理），尼莫地平组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液加入终浓度0．5mg／L尼莫地平[购自山东新华制药股份有限公司，生产批号：0211048，10mL（2mg）／支1，其余处理同模型组]，缺氧缺糖再给氧＋党参皂苷L1高、中、低浓度组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液分别加入质量浓度1．3，0．13和0.013mg／L党参皂苷L1（由北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室采用高效液相色谱法制备法分离得到，含量为96．2％），其余处理同模型组]。测定乳酸脱氢酶漏出率时缺氧缺糖处理后直接测定，而不做再给氧处理。④四唑盐比色法测定细胞存活率，Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和细胞坏死率、细胞凋亡率，比色法测定乳酸脱氢酶漏出率。 结果：①荧光显微镜观察细胞形态：尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组与模型组比较均可见红染的坏死细胞数量明显减少，尼莫地平、党参皂苷L1各浓度组与模型组比较凋亡细胞数量无明显变化。②星形胶质细胞存活率：模型组明显低于正常组、尼莫地平组和党参皂甙L1中、低浓度组（F=42．464，P〈0．01）。③细胞坏死率和乳酸脱氢酶漏出率：模型组明显高于其他5组（F=69．344，24．994，P〈0．01）。④细胞凋亡率：模型组明显高于正常组（F=3．311，P〈0．05），与尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组比较，差异不明显（P〉0．05）。 结论：中药党参皂苷L1对缺糖缺氧再给氧造成的星形胶质细胞损伤具有保护作用，可抑制细胞坏死，但对凋亡过程无保护作用。     

家兔动脉成形术后血管内膜增殖与普伐他汀联合阿司匹林的干预效应

目的:观察普伐他汀、阿司匹林联用对家兔颈动脉血管成形术后内膜增殖进展的影响及其作用机制。方法:实验于2002-03/12在北京中医药大学教育部中医内科学重点学科实验室完成。雄性日本大耳白兔30只,体质量1.8～2.0kg,动物适应性喂养1周后随机数字表法分为正常对照组(n=9)、假手术组(n=6)、模型组(n=9)、治疗组(n=6)。模型组和治疗组动物氯胺酮、速眠新混合肌注麻醉,沿气管正中切开皮肤,剥离颈总动脉,给予电刺激。术后第2天开始饲喂高脂饲料(胆固醇:0.7%,猪油:3%,普通饲料96.3%);正常对照组无任何干预措施;假手术组仅剥离颈总动脉,不做电刺激,喂高脂饲料;动物连续喂养8周后超声评价颈总动脉,根据B超选择颈总动脉有斑块或血流明显改变者作颈总动脉球囊扩张术。正常对照组、模型组、假手术组喂普通饲料,治疗组喂普伐他汀与阿司匹林含药饲料(普伐他汀5.046mg/kg,阿司匹林2.268g/kg),4周后测血脂和C-反应蛋白浓度、血清一氧化氮及转化生长因子β水平,观察颈动脉组织病理形态学改变,半定量分析增生内膜中胶原含量的变化,免疫组织化学方法分析增生内膜中巨噬细胞和平滑肌细胞阳性百分率。结果:纳入大耳白兔30只,正常对照组中途死亡1只,死因为牙齿畸型影响进食;模型组1只因电刺激8周时超声评价颈动脉未形成斑块及血流无明显改变而剔出实验,进入分析28只。与模型组比,普伐他汀与阿司匹林联用4周后,治疗组胆固醇及三酰甘油水平明显下降[(4.12±2.30),(0.74±0.17)mmol/L;(0.47±0.27),(0.39±0.14)mmol/L;P<0.05],血清C-反应蛋白水平和转化生长因子β水平均降低[(0.86±0.27),(0.57±0.30)mg/L;(3.45±0.77),(3.23±0.34)ng/L;P<0.05],一氧化氮水平升高[(41.79±35.78),(90.14±32.54)mmol/L;P<0.05],动脉内膜增殖程度明显减轻,管腔狭窄率降低,内中膜厚度及内中膜面积比降低[(71.91±14.90)%,(47.20±18.74)%;(0.41±0.17),(0.26±0.04)mm;1.66±0.63,0.78±0.34;P均<0.05],动脉内膜胶原含量减少(30.92±10.05,21.93±5.81,P<0.01),动脉内膜巨噬细胞阳性百分率降低[(13.94±4.91)%,(7.29±7.28)%,P<0.05],平滑肌细胞含量无明显差异(38.37±5.67,35.79±10.68,P>0.05)。结论:普伐他汀与阿司匹林联用具有抑制内膜增生和减少新生内膜胶原含量的作用,其机制与两药抑制炎症反应、保护内皮功能及抑制细胞外基质生成等有关。     

黄连解毒汤有效成分对缺氧/复氧时脑微血管内皮细胞核因子-κB的影响

目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧/复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制。方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型。用0.128,0.064,0.032μmol.mL^-1栀子苷,0.028,0.014,0.007μmol.mL^-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006μmol.mL^-1小檗碱分别作用于损伤的细胞,采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术检测核因子-κB(NF-κB)亚单位p65的表达,计算平均吸光度和平均面积,比较NF-κB蛋白表达的变化,计算核移位百分率和细胞核与细胞浆的透光度比值比较NF-κB核移位的变化。结果:模型组NF-κB蛋白表达和核移位显著高于正常组(P<0.01)。所有给药组的平均吸光度值低于模型组,但差异无统计学意义。所有给药组的平均面积均低于模型组(P<0.01)。所有给药组的核移位百分率低于模型组且高于正常组(P<0.01,P<0.01)。所有给药组细胞核与细胞浆的透光度比值高于模型组(P<0.01)。结论:栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧/复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞,其保护机制之一是抑制NF-κB蛋白表达和核移位。     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。