蜂胶提取物对肿瘤化疗药物减毒作用的实验与临床研究

蜂胶是蜜蜂巢中的一种树脂状物质,是蜜蜂从其周围环境的植物幼芽和枝条所采集,经加工而成的一种芳型固体物,含有多种黄酮、阿巍酸、槲皮素、多糖及维生素等有药理活性的化合物.为了探讨其在肿瘤防治中的作用,本文从蜂胶减轻化疗药物毒性方面进行了动物及临床实验.将昆明种小鼠右腋皮下接种S180肉瘤细胞(3×10_7个/ml)0.2ml,次日随机分成5组,空白对照组给蒸馏水;溶剂对照组给20%吐温-80;阳性对照组给环磷酰胺;实验组分别给2.5%的蜂胶提取物或2.5%的蜂胶提取物与环磷酰胺混合液,每次每鼠灌喂0.5ml,每天给药1次,连续10d,停药后次日称     

NKG2D真核表达载体的构建及其对YT细胞生物学功能的影响

目的：建立NK细胞受体NKG2D真核表达载体，通过转染NK细胞系YT，初步探讨NKG2D分子对YT细胞系杀伤功能的增强作用。方法：用RT-PCR方法从NK-92细胞中调取NKG2D基因片段，克隆到pGEM-TEasy载体并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ消化pGEM-T Easy／NKG2D重组质粒，分离NKG2D片段，并插入真核表达质粒pEGFP-N1的相应限制酶位点，酶谱分析鉴定重组表达载体pEGFP-N1／NKG2D。然后经脂质体介导转染CHO细胞和YT细胞。应用荧光显微镜观测、Western blot方法和免疫组化染色对转染细胞内pEGFP-NilNKG2D的表达进行鉴定，MTF方法观察YT细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。结果：RT-PCR扩增获得650bp基因片段，经DNA序列分析证明所获得的DNA序列与文献报道的NKG2D序列一致。转染的CHO细胞在荧光显微镜下发出强绿色荧光，Western blot分析显示重组蛋白能特异地与抗人NKG2D单克隆抗体结合；免疫组化检测显示，转染的CHO中有棕色颗粒，证明所构建的NKG2D真核表达载体可以在细胞中表达；转染NKG2D真核表达载体的YT细胞对乳腺癌细胞具有更强的杀伤效果。结论：所获得的表达NKG2D分子的真核表达载体，通过转染YT细胞，初步鉴定所表达NKG2D分子具有生物学功能，可以提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。     

人次级淋巴组织趋化因子的基因克隆及原核表达

目的：获得人次级淋巴组织趋化因子（SLC）基因，并通过大肠杆菌实现人SLC的非融合表达。方法：提取淋巴结组织总RNA，RT-PCR法扩增人SLC成熟肽基因，克隆到pMD18-T载体中，DNA测序。用限制性内切酶切下目的基因，与相应酶切的表达载体pBV220连接、筛选、鉴定。42℃热诱导表达目的蛋白，SDS-PAGE和Western印迹法鉴定重组蛋白，分子筛选初步纯化目的蛋白。结果：表达蛋白占菌体15％以上，免疫印迹证实为特异性蛋白，分子筛纯化后纯度达90％。结论：成功获得人SLC的原核表达。     

胰岛素降解酶基因多态性与多囊卵巢综合征相关性的研究

目的:探讨胰岛素降解酶基因(IDE)多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的关系。方法:用聚合酶链反应-限制性片段多态性技术,检测315例PCOS患者(PCOS组)和327例健康妇女(对照组)的IDE基因多态性。结果:IDE基因rs1887922位点基因型分布及等位基因频率在PCOS组总体以及各亚组(胰岛素抵抗组及非胰岛素抵抗组),与健康对照组之间比较均无显著差异。而IDE基因rs2209972位点基因型分布虽然在P- COS组总体及非胰岛素抵抗亚组与健康对照组之间比较无显著差异;但PCOS组总体相应位点的C等位基因频率高于对照组,差异有显著性(P<0.05),PCOS胰岛素抵抗亚组相应位点的基因型频率及等位基因频率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。rs2209972位点不同基因型PCOS患者空腹胰岛素水平及HOMA-IR存在显著差异(P<0.05)。结论:胰岛素降解酶基因多态性可能与PCOS患者胰岛素抵抗相关。     

hKGF 2在不同原核载体中的构建、表达和纯化分析

目的 比较人角质细胞生长因子2（hKGF2）在不同原核表达载体和宿主菌中的表达及相应蛋白纯化及生物学活性。方法 RT-PCR法从培养的人胚胎肺成纤维细胞提取成熟hKGF2 cDNA,克隆测序后，分别与pBV220和pET-30a(+)表达载体连接，转化不同宿主菌进行诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及Western blot进行蛋白鉴定。针对不同原核表达载体分别用阳离子交换层析和镍亲和层析（Ni-NTA）纯化目的蛋白，电泳分析蛋白纯化结果，并分别检测其生物学活性。结果 目的基因片段克隆入pBV220载体后在E.coli JM109中表达量最高，约占菌体总蛋白的15%；克隆入pET-30a(+)载体在E.coli BL21（DE3）中表达量约占菌体总蛋白的25%；均为可溶性表达，不同方法纯化后蛋白纯度达95%以上，均能有效促进人胚胎肾上皮细胞增殖。结论 hKGF2基因在不同的宿主菌中蛋白表达不同，以融合蛋白表达纯化效果更好。     

神经外科监护记录中容易出现的问题及应对措施

监护记录单是客观反映病人病情变化的原始凭证，同时也容易成为各种医疗、护理纠纷中争论的焦点和关键的依据。神经外科重症监护室由于是封闭化管理，病人与家属隔离，护士针对病人，尤其是针对危重病人所做的一切如观察、处置、抢救用药等诸多医疗、护理措施，家属只能在记录单上了解到，且神经外科监护室重患多，病情急重，     

结核分支杆菌Ag85B融合蛋白表达载体的构建及纯化

目的：构建结核分支杆菌Ag85B基因在大肠杆菌的融合表达载体,制备MBP／Ag85B融合蛋白并将其纯化。方法：常规方法构建重组表达质粒pMAL-p2-Ag85B,内切酶EcoRⅠ/HindⅢ酶切鉴定;重组表达质粒pMAL-p2-Ag85B转化大肠杆菌,经0．3mmol／L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D thiogalactoside,IPTG）诱导表达产生融合蛋白（MBP／Ag85B）,Western blot鉴定表达产物。pMAL纯化树脂（Amylose resin）对MBP／Ag85B融合蛋白纯化。结果：重组质粒pMAL-p2-Ag85B经EcoRⅠ／HindⅢ酶切后,1％琼脂糖凝胶电泳证实Ag85B正向插入pMAL-p2载体,重组菌经IPTG诱导后,有约70kD蛋白表达,与预期的融合蛋白分子量相符,蛋白表达量约占细菌总蛋白量的40％;Western blot显示,MBP／Ag85B融合蛋白与人抗结核IgG抗体呈特异性反应;经Amylose resin纯化后,MBP／Ag85B融合蛋白的纯度可达95％以上。结论：成功构建结核分支杆菌Ag85B重组融合蛋白表达质粒并制备及纯化其融合蛋白,为进一步研究Ag85B生物学功能及其抗原表位分析奠定了物质基础。     

骨外骨肉瘤1例

患者男性, 65岁。右前臂肿物 6个月。肿物质硬,无痛,无红肿,可随前臂屈伸滑动,未予治疗。近来肿物逐渐增大。查体:右前臂尺侧关节处一肿物 13cm×9cm×8cm,光滑,与周围组织分界清楚。硬度不均,较硬处如骨头。右手背至前臂有一陈旧性线形瘢痕,长约 16cm,拇指受瘢痕影响轻度活动受限,余 4指及关节活动正常。桡动脉搏动正常,滑车淋巴结及腋窝淋巴结未触及肿大。2002年 11月 7日右前臂X线正侧位片示:右前臂尺侧一巨大块状软组阴影,肿物内见簇状钙化斑,肿物与骨质及关节无关 (图 12002年 11月 17日在全麻下行肿物切除术,术中见肿物被肌群包…     

BRMS1 mRNA和CD44V6 mRNA在子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的：探讨乳腺癌转移抑制基因 （breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1） mRNA和CD44V6 mRNA的异常表达与子宫内膜癌侵袭及转移的关系.方法：采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法,检测42例子宫内膜癌、12例子宫内膜不典型增生和 15例正常子宫内膜组织中BRMS1 mRNA和CD44V6 mRNA的表达情况,分析其与各种临床参数的关系.结果：1）子宫内膜癌患者的BRMS1基因表达率为37.5%,明显低于不典型增生的75.0%和正常内膜的86.7%;与临床分期（χ^2=4.978）、肌层浸润深度（X^2=5.299）及淋巴结转移（χ^2=4.200）均密切相关,P值均＜0.05; 2）子宫内膜癌患者的CD44V6基因表达率为69.0%,显著高于不典型增生的16.7%和正常内膜的0,P＜0.01; 与临床分期（X^2=5.802）及淋巴结转移（X^2=5.570）均密切相关,P值均＜0.05;3）BRMS1与CD44V6 mRNA的阳性表达率之间无相关关系,肯德尔相关系数为0.069,P＞0.05.结论： BRMS1和CD44V6 mRNA的异常表达是子宫内膜癌发生发展、浸润转移的重要分子学改变,同时检测两者可作为临床预测和评估其侵袭及转移的重要参考指标.     

亚硒酸钠抗实验性高脂血症的研究

亚硒酸钠抗实验性高脂血症的研究陆通，游力，王芸（山东省医科院基础医学研究所，济南２５０００１）近年来一些流行病学调查资料表明，硒（Ｓｅ）与心、血管病的发生率和死亡率密切相关，机制尚不明确。鉴于高脂血症（ＨＬＥ）是冠心病、脑动脉硬化等症的重要致危因素，...