几丁质膜作为表皮干细胞培养支架的实验研究

Objective To investigate the feasibility of constructing a skin tissue engineering cover-ing on chitinous membrane using rat epidermal stem cells (ESCs). Methods Rat ESCs were isolated and cultured by cold digestive method and collagen type Ⅳ adherent method. Cell colonies were observed with in-verted microscope. Expressions of DNA and RNA of ESCs were detected with laser scanning confocal micro-scope. Growth curves of cells were determined with Alamar BlueTM colorimetric method. Expressions of sur-face markers of ESCs (CD29, CD71, CD49d, and CD34) were detected with flow cytometer. Positive expres-sions of CK15, CK19, and P63 of ESCs were determined by immunohistochemistry. Influence of original chi-tinous membrane leachate in different dilutions on ESCs was observed. Condition of growth of ESCs on the ve-hicle was observed. Results Isolated cultured cells were verified as ESCs, of which the doubling generation time was 48 hs. CD29 and CD49d were positive;CD71 and CD34 were negative;CKi9, CK15, and P63 were positive. Compared with that of control group, ESCs cultured in chitinous membrane leachate showed slight cell proliferation when diluted to 1:8-1:512 dilutions, but there was no statistically significant difference (P>0.05). The checkerboard-form cell colonies of ESCs could be visualized with naked eyes on the chi-tinous membrane in 2-4 weeks of culture. A multitude of ESCs were seen to grow on fibres under microscope. Conclusions Chitinous membrane may be used as ESCs culture vehicle, and biological compatibility is good.     

碱性成纤维细胞生长因子与透明质酸对培养兔软骨细胞的作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）与透明质酸（ＨＡ）对兔软骨细胞的增殖影响及其协同作用。方法 培养兔膝关节软骨细胞,加入ｂＦＧＦ、ＨＡ,用四氮甲基唑蓝（ＭＴＴ）方法测定其对软骨增殖的影响。结果 ｂＦＧＦ在１０ｎｇ／ｍｌ即可显著促进软骨细胞增殖,当ｂＦＧＦ浓度增至５０ｎｇ／ｍｌ,其促进作用是达到最大值;单纯使用ＨＡ并不促进软骨细胞增殖;当联合应用ｂＦＧＦ与ＨＡ时,ｂＦＧＦ浓度为５０～５００     

盐酸小檗碱对内质网应激caspase-12/caspase-3信号通路介导的小鼠肠上皮细胞凋亡的影响

目的观察内质网应激(ERS)对肠上皮细胞(IEC)凋亡的影响,探讨盐酸小檗碱(BBR)治疗溃疡性结肠炎(UC)的部分作用机制。方法原代培养小鼠IEC并行免疫荧光鉴定后,采用过氧化氢(H2O2)作用细胞24 h制备体外肠细胞ERS模型,同时给予不同剂量的BBR干预。采用CCK8法检测细胞活性变化,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)、门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)和caspase-3蛋白的表达水平。结果 0.4 mmol/L的H2O2作用24 h后,与空白对照组比较,IEC的存活率明显下降,凋亡率明显上升,GRP78、活化形式的cleaved caspase-12和cleaved caspase-3表达水平均升高;若同时给予中、高剂量(1.0μmol/L、10.0μmol/L)BBR干预,与模型对照组相比,IEC的存活率升高,凋亡率下降,且GRP78、cleaved caspase-12和cleaved caspase-3的表达水平均明显下降,差异有统计学意义。结论 BBR能通过抑制ERS时caspase-12/caspase-3凋亡信号通路活化,从而抑制IEC的过度凋亡,保护肠黏膜屏障,这可能是BBR治疗UC的部分作用机制。     

环孢素A眼用乳剂凝胶的研究

目的:制备一种环孢素A眼用乳剂凝胶(CsAE-gel),并对其含量和体外释放度进行考察.方法:采用响应面Box-behnken设计对CsAE-gel中乳剂的处方及工艺进行优化,另外通过调节pH考察凝胶黏度对乳剂稳定性的影响,以建立最终处方.采用HPLC方法测定CsAE-gel中CsA含量,色谱柱为Waters XBridge C18(4.6 mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲醇-磷酸(550∶400∶50∶0.5,v/v),检测波长210 nm,柱温70℃.并考察了凝胶黏度及灭菌对体外释放的影响.结果:CsA在浓度0.4～16μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=1),日内和日间RSD分别为0.24%和0.41%,平均回收率为99.0%.灭菌及凝胶黏度对CsAE-gel体外释放均无显著影响.结论:CsAE-gel稳定性好,体外释放效果良好,流变学性质符合眼用制剂要求.     

胃食管反流相关性咽喉部肉芽肿20例

我科近年收治20例胃食管反流相关性咽喉部肉芽肿病例,报告如下。     

蛋白多肽类药物的水凝胶给药系统

蛋白药物由于药效强、特异性高的特点近年来受到广泛的关注.而将蛋白药物引入水凝胶中,利用环境刺激敏感性水凝胶,能够对体内环境微小变化做出响应,从而控制蛋白药物在体内的释放;本文综述了基于蛋白药物合成材料的交联聚合物水凝胶,详述了温度敏感性水凝胶的研究概况以及水凝胶目前存在的问题和未来展望.     

医学院校研究生科研诚信缺失的原因与对策研究

科研诚信是研究生应具备的基本科研素质.近年来,高校中科研不端行为频频发生,而研究生是高校科研工作和学科建设的主力军,因此,加强研究生的科研诚信教育具有重要的现实意义.文章通过调查问卷分析了医学院校研究生科研诚信缺失的原因,并从建立健全研究生学术道德与规范管理制度、营造科研诚信的教育环境、加强研究生自身科研诚信意识培养和改革研究生培养模式等方面探讨了加强医学研究生科研诚信教育的几点对策.     

CD44在不同肿瘤细胞表面阳性表达率的实验研究

目的 检测CD44在肿瘤细胞表面的阳性表达率,为以CD44为靶点的肿瘤靶向治疗提供新的理论依据.方法 采用流式细胞术检测HCT116人结肠癌细胞,SGC-7901、MGC-803胃癌细胞,A549人肺腺癌细胞,HepG2人肝癌细胞,CNE-2人鼻咽癌细胞,U87MG恶性胶质瘤等肿瘤细胞表面CD44表达情况.结果 各肿瘤细胞表面均表达CD44.其中胃癌SGC-7901、MGC-803、肝癌HepG2、鼻咽癌CNE-2细胞表面CD44细胞的阳性率分别为17.90％±1.67％、18.36％±9.27％、24.61％±4.0％和19.03％ ±1.52％,呈高表达状态.结论 SGC-7901、MGC-803、HepG2、CNE-2细胞与HCT116、A549和U87MG细胞表面CD44阳性表达率相比有显著性差异（P＜0.05）.     

瓜蒌薤白半夏汤对血管紧张素Ⅱ诱发心肌成纤维细胞增殖与胶原合成的抑制作用

目的探讨瓜蒌薤白半夏汤抑制心肌纤维化的作用机制。方法采用胰酶消化法进行新生大鼠心肌成纤维细胞（CFs）培养,予CFs 10-6mol/L孵育24h构建离体心肌纤维化病理模型,分别予5%、10%和15%瓜蒌薤白半夏汤含药血清干预24h。采用En-V ision免疫组织化学方法检测组织平滑肌肌动蛋白-α（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）及波形蛋白（VN）,进行心肌成纤维细胞的鉴定;MTT法和3H-TdR掺入法进行细胞增殖和DNA合成检测,羟脯氨酸法进行胶原含量检测。结果 AngⅡ10-6mol/L孵育CFs 24h后,CFs增殖及胶原合成增加;瓜蒌薤白半夏汤含药血清可以抑制CFs增殖及胶原合成。结论瓜蒌薤白半夏汤能够改善心肌纤维化,其作用机制可能与抑制CFs增殖、DNA及胶原合成有关。     

基于中医理论探讨老年衰弱综合征

老年衰弱综合征是一组由机体退行性改变、多种慢性疾病引起的机体易损性增加及抗应激能力减退的临床综合征,属于中医虚损类疾病。基于历代中医文献研究,老年衰弱的病机特点为五脏俱虚,脾肾尤甚;气液亏损,阴阳失衡;虚实夹杂,动态变化。病理变化特点为虚实夹杂、动态变化。治疗时需遵循扶正补虚,兼以祛邪;合理辨治,全面管理的治则,贯以治未病思想。