通窍活血汤含药脑脊液调控ASK1/MKK4/JNK信号通路对OGD/R损伤HT22细胞的保护作用北大核心CSCD

该文探讨通窍活血汤含药脑脊液(TQHXD-CSF)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤小鼠海马神经元(HT22)细胞的保护作用及其作用机制是否与调控ASK1/MKK4/JNK信号通路有关.将HT22细胞随机分为5组,分别为空白脑脊液组(control组)、OGD/R组、TQHXD-CSF组、凋亡抑制剂组(Z-VAD-FMK,20μmol·L^(-1))、TQHXD-CSF+凋亡抑制剂组.除control组外,其余各组细胞在氧糖剥夺6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模并分组给药.CCK8法检测HT22细胞活力,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶释放量,倒置显微镜观察HT22细胞形态.Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA水平.再将HT22细胞随机分为6组,分别为control组、OGD/R组、si-NC组、si-ASK1组、TQHXD-CSF组、TQHXD-CSF+si-ASK1组.CCK8法检测细胞活力,细胞动态分析仪动态监测细胞增殖,Hoechst染色和流式细胞术检测HT22细胞凋亡情况,Western blot检测MKK4、p-MKK4、JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、Cyt C、Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达情况.结果显示,与OGD/R组相比,TQHXD-CSF可以显著提高细胞存活率,改善细胞形态,降低Bax/Bcl-2、caspase-3蛋白和mRNA的表达量.当沉默ASK1后,与OGD/R组相比,TQHXD-CSF组细胞存活率显著提升,降低细胞荧光强度,降低细胞凋亡率,p-MKK4、p-JNK、p-c-Jun、Cyt C、Bax/Bcl-2和caspase-3的蛋白表达量减少,但其效果不及TQHXD-CSF+si-ASK1组.综上,TQHXD-CSF可抑制OGD/R损伤的HT22细胞ASK1/MKK4/JNK通路介导的细胞凋亡,对缺血再灌注神经元细胞损伤具有保护作用.     

丹灯通脑胶囊含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的研究丹灯通脑胶囊含药脑脊液对缺糖缺氧再复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用。方法 SD大鼠每日灌胃给予丹灯通脑胶囊(490 mg/kg)2次,连续4 d,以制备含药脑脊液,原代培养大鼠BMECs,并对其进行Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定。然后,利用倒置显微镜观察BMECs形态,CCK-8法观察细胞活力,通过测定跨内皮细胞电阻(TEER)来评价BMECs通透性变化,取细胞上清检测BMECs总一氧化氮(NO)和内皮素1(ET-1)水平,以及BMECs组织型纤溶酶原激物(t PA)、纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)水平。结果含药脑脊液可显著对抗OGD/R所造成的损伤,明显改善BMECs形态。与模型组比较,含药脑脊液组细胞活力显著升高,TEER值显著增加,细胞通透性降低,细胞培养上清液中总NO、t PA水平明显增加,ET-1、PAI-1是水平显著降低。结论丹灯通脑胶囊含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs具有保护作用。     

农村既往有偿献血社区居民艾滋病病毒检测意愿调查

目的 了解农村既往有偿献血社区居民艾滋病病毒(human immunodeficiency virus，HIV)检测意愿。方法 选择10个存在既往有偿献血事件的村庄，采用入户调查和村中拦截行人的方式对18～59a村民进行问卷调查。结果 调查有效问卷共477份，大部分人愿意接受艾滋病病毒检测，随机抽样、普查和只查献血员进行艾滋病病毒检测的接受率分别为85．95％、93．08％和60．17％，经统计学检验三者之间差异有显著性，人们进行艾滋病病毒检测的意愿与调查方式有关。不愿意接受检测的主要原因是认为自己没有感染的可能和担心别人怀疑自己感染了艾滋病；愿意将HIV阳性检测结果告知配偶、家庭其他成员和家庭以外的人的比例分别为86．37％、53．67％和21．59％。结论 在农村既往有偿献血社区，大部分人愿意接受艾滋病病毒检测，人们较易接受对全体村民进行HIV检测；其检测结果告知范围人们更倾向于局限在家庭范围内。     

康复新液联合西帕依固龈液治疗固定正畸早期牙龈炎的临床效果

目的 观察康复新液联合西帕依固龈液治疗固定正畸早期牙龈炎的临床效果。方法 选取2018年2月—2019年2月长沙市口腔医院口腔科接诊因固定正畸患早期牙龈炎患者100例为研究对象,以就诊单双号将患者分为联合组和单药组,每组50例。单药组采用西帕依固龈液治疗,联合组采用康复新液联合西帕依固龈液治疗,2组治疗时长均为30 d。比较2组治疗前后临床指标(牙龈指数、龈沟出血指数、牙菌斑指数)评分,治疗总有效率。结果 治疗30 d后,2组牙龈指数、龈沟出血指数、牙菌斑指数评分均较治疗前下降,且联合组低于单药组(P均<0.01);联合组患者治疗总有效率为98.00%,高于单药组的78.00%(χ²=9.470,P=0.002)。结论 固定正畸早期牙龈炎患者采用康复新液联合西帕依固龈液治疗效果显著,治疗后可显著改善口腔健康水平,缓解疾病症状反应,临床治疗效果良好,具有较高临床应用价值。     

葛根素对缺氧诱导PC12细胞神经损伤及JNK/MAPK信号通路的影响

目的 探讨葛根素对缺氧诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞PC12细胞神经损伤及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法 体外培养PC12细胞，50 ng/ml神经生长因子(NGF)诱导分化，对高分化的PC12细胞进行缺氧处理，再对缺氧诱导的PC12细胞进行不同浓度(0.1、1.0、10.0μmol/L)葛根素处理，将细胞分为对照组，缺氧组，0.1、1.0、10.0μmol/L葛根素组，葛根素+JNK通路激活剂茴香霉素(AC)组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞活力；流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况；2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测各组PC12细胞活性氧(ROS)水平；试剂盒检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平；Western印迹检测各组凋亡蛋白JNK/MAPK信号通路相关蛋白表达情况。结果 低分化PC12细胞多呈椭圆形，聚集成小团簇状；高分化PC12细胞长出类似神经元样突起，培养一段时间后，细胞体积增大突起增多增长，形成网络。与对照组比较，缺氧组PC12细胞活力、SOD水平显著降低，细胞...     

网络药理学结合 GEO 芯片技术探讨黄芎方治疗缺血性脑卒中的作用机制及实验验证

目的 基于GEO芯片联合网络药理学方法探讨黄芎方治疗缺血性脑卒中的作用机制，并构建脑缺血/再灌注（I/R）大鼠模型验证黄芎方药效和核心靶点。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）数据库及文献检索，获得黄芎方的主要活性成分，通过 Swiss Target Prediction数据库检索其相应的靶点。通过 R软件 limma包对 GEO平台缺血性脑卒中患者数据集 GSE16561 进行差异基因分析。利用 Venny 2.1.0 进行黄芎方成分靶点和缺血性脑卒中差异基因靶点交集靶点分析，采用DAVID数据库对交集靶点进行基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。采用 Cytoscape 3.9.0 软件构建成分-靶点-通路网络并筛选核心成分，通过 STRING 数据库与 Cytoscape 3.9.0 软件构建蛋白质相互作用（PPI）网络并筛选核心靶点基因。利用PyMOL软件对度值排名靠前的成分和靶点基因进行分子对接。通过single sample Gene Set Enrichment Analysis（ssGSEA）进行免疫浸润分析。采用线栓法制备 I/R 大鼠模型，除假手术组外（n＝21），将69只大鼠随机分为模型组、黄芎方组（3.6 g·kg^-1）组、阿司匹林（9 mg·kg^-1）组。黄芎方组和阿司匹林组每日ig给药1次，假手术组和模型组ig给予等量生理盐水，持续7 d。采用Longa分级评分法对大鼠进行神经行为评分，TTC染色测定大鼠脑梗死体积，免疫组织化学染色法检测离子钙接头蛋白分子1（Iba1）阳性表达，ELISA法检测脑组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）的表达，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测大鼠脑组织Toll样受体4（TLR4）、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、缺氧诱导因子1A（HIF1A）、髓过氧化物酶（MPO）、基质金属蛋白酶9（MMP9）的mRNA表达。结果 通过TCMSP数据库和文献检索共筛选得到黄芎方的有效活性成分35个，成分靶点754个，缺血性脑卒中基因芯片差异表达基因677个，交集靶点56个。GO富集分析表明，黄芎方治疗缺血性脑卒中与细胞对炎症反应、脂多糖反应和环氧化酶途径等生物学过程相关。KEGG 通路分析显示，主要涉及包括代谢途径、中性粒细胞胞外诱捕网形成、HIF-1 信号传导途径等通路。筛选出 5 个核心成分 α -细辛醚、3，4，5-三甲氧基肉桂酸、β-细辛醚、异阿魏酸、阿魏酸，5个核心靶点TLR4、STAT3、HIF1A、MPO、MMP9。分子对接结果显示，5个核心成分与5个核心靶点具有稳定的结合能力。免疫浸润分析表明，核心靶点基因与中性粒细胞、激活B细胞、自然杀伤细胞、肥大细胞等关系密切。体内实验结果显示，黄芎方显著降低I/R大鼠的神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织病理学损伤、脑组织炎症因子的表达，在脑组织中验证了黄芎方对5个核心靶点基因mRNA表达的调节作用。结论 黄芎方可能通过多成分、多靶点、多通路治疗缺血性脑卒中，其可能通过TLR4、STAT3、HIF1A、MPO和MMP9核心靶点发挥治疗作用。