pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB双价疫苗的构建及其免疫效果观察

目的 构建日本血吸虫天然分子疫苗相关靶基因的双价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/sjRPS4·CB,并观察其免疫保护效果.方法 分别以pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB为模板,设计引物扩增SjRPS4、SjCB,重叠PCR法将SjRPS4、SjCB拼接,扩增,经双酶切后与真核质粒载体pVAX1、pcDNA3.0连接,转化DH5α细胞,筛选阳性克隆;提取双价蓖组质粒、空质粒及pVAX1/SjRPS4,经左腿股四头肌注射昆明小鼠,14d后取肌肉组织切片进行间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色,证实双价重组质粒的表达;提取pVAX1/SjPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB及相应空载体,100 μg/只或等量PBS经左腿股四头肌注射昆明小鼠,4周后以(20±1)条尾蚴贴腹感染,6周后检测减虫率、减卵率.结果 PCR、EcoRⅠ/Xho Ⅰ双酶切及测序证实双价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB构建成功;肌肉组织间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色证实重组质粒能够在小鼠肌肉细胞内成功表达;与PBS组相比,pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB免疫小鼠各组间差异均有统计学意义(P<0.05),各组与相应的空质粒组相比各指标差异亦具有统计学意义(P<0.05);两种不同载体构建的舣价疫苗之间比较差异则无统计学意义(P>0.05).结论 成功构建真核双价重组质粒pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB,二者免疫昆明小鼠均可以产生比单价疫苗更好的免疫保护效果.     

苍白密螺旋体Tp0751黏附蛋白的表达、纯化及免疫反应性分析

目的 表达苍白密螺旋体(梅毒螺旋体)黏附蛋白Tp0751,纯化表达产物并进行免疫反应性分析,为探索Tp0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定基础.方法 通过生物信息学分析,去除Tp0751信号肽序列,构建原核表达体进行诱导表达;Ni亲合层析柱纯化重组蛋白,Western-印迹检测其免疫反应性.结果 成功构建了PET-28a(+)-0751原核表达载体,经表达、纯化后获得了相对分子量约为26×103的融合蛋白,其表达产物占全菌总蛋白的＞30%,并且主要可溶性形式存在;Western-印迹检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性.结论 重组表达的Tp0751黏附蛋白为可溶性蛋白,且具有良好的免疫反应性,为进一步研究其在Tp0751黏附蛋白在梅毒致病过程中的作用和其生物学功能奠定了基础.     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导抗卵免疫的初步研究

采用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及成熟虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，发现ＳＩＥＡ诱导小鼠产生显著的抗生殖及抗卵胚发育的免疫力，与对照组比较，ＳＩＥＡ免疫鼠在攻击感染后４６天，肝，肠组织内总虫卵数明显下降，成熟虫卵数和粪卵数分别降低了５９．９８％，６６．８６％和６６．９７％，粪卵下降程度与肝，肠组织中成熟虫卵的减少相一致，ＳＥＡ免疫后未呈现上述效应。     

日本血吸虫DNA疫苗联合免疫的研究进展

近年来,为解决单价重组DNA疫苗免疫保护效果较低的问题,进行了大量DNA疫苗联合免疫的研究,主要包括鸡尾酒式DNA混合疫苗、双价及多价DNA联合疫苗、佐剂等方面。研究发现在减虫率、肝减卵率等方面,联合免疫疫苗效果明显优于单价DNA疫苗效果,具有较高的研究、应用价值。     

1996—2011年湖南省汨罗市血吸虫病疫情纵向观察

摘要：目的 观察洞庭湖区湖沼型疫区采取以传染源控制为主的综合防治措施控制血吸虫病效果。 方法 收集、整理汨罗市1996—2011年血吸虫病有关疫情资料进行回顾性分析,观察实施以传染源控制为主的综合防治措施前后螺情与病情的变化。 结果 洞庭湖区湖沼型血吸虫病疫区实施人畜同步化疗为主的措施,垸外活螺平均密度、感染性钉螺密度变化不明显,维持在0.29～0.63只/0.1 m2和0.003 4～0.037 9只/0.1m2,人群患病率维持在2.13%～3.68%,耕牛感染率维持在1.10%～4.36%之间;实施以传染源控制为主的综合防治措施后垸外活螺平均密度虽有波动,但整体呈下降趋势,从0.52只/0.1 m2下降至0.18只/0.1 m2,感染性钉螺平均密度从0.003 8只/0.1m2下降至0.000 7只/0.1m2,钉螺感染率呈下降趋势,从第一阶段的0.72%以上下降到0.38%以下,人群患病率从2.86%下降至1.25%,耕牛感染率从2006年的2.87%上升到2008年的5.92%,又下降到2010年的1.70%。急性血吸虫病感染以散发为主,1996—2009年共发生急性血吸虫病49例,血吸虫病例以7～14岁组为多,男性感染率显著高于女性,学生多见,因游泳戏水感染最多,多为垸外感染,秋季和夏季为高发期,落实以传染源控制为主的综合防治措施后的2010—2011年未发生急感病例。 结论 血吸虫病以传染源控制为主的综合防治措施在洞庭湖区湖沼型疫区取得了明显的防治效果。加强在易感地带查灭阳性钉螺,减少垸外人畜活动,重视宣教,严防儿童在夏、秋季节发生血吸虫病的急性感染,适宜开展人畜同步化疗,依然是湖区血吸虫病防治的关键。     

日本血吸虫未成熟卵免疫血清抗卵胚反应的观察

目的 研究日本血吸虫未成熟卵免疫血清在抗卵胚方面的作用.方法 采用多途径免疫新西兰家兔的方法,制备日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原的免疫兔血清,通过免疫酶染色定位观察免疫血清与未成熟卵胚的反应.结果 证明未成熟卵免疫血清能特异地识别虫卵早期胚胎抗原,与未成熟虫卵卵胚出现较强的免疫反应.结论 未成熟虫卵可溶性抗原免疫产生的抗卵胚作用与未成熟虫卵胚胎抗原所诱导的保护性免疫应答有关.     

免疫金银染色法对日本血吸虫31／32KD分子抗原的定位研究

应用免疫金银染色法（ＩＧＳＳ）和免疫酶染色法（ＩＥＳ）对日本血吸虫３ｌ／３２ＫＤ分子抗原进行了比较定位研究。结果证实了日本血吸虫３１／３２ＫＤ抗原是一种肠相关抗原，并进一步验证了常规制备的单特异抗血清用于抗原分析和来源定位的可行性。     

日本血吸虫快速酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒的应用研究

目的 探讨日本血吸虫快速酶联免疫吸附试验（F-ELISA）抗体检测试剂盒检测日本血吸虫病的特异性、敏感性及与其他寄生虫病的交叉反应。方法 采用F-ELISA法检测日本血吸虫急性、慢性及晚期病人血清中抗SEA抗体和健康人、并殖吸虫、肝吸虫、囊虫及旋毛虫病患者血清中的交叉抗体。结果 检测急性、慢性及晚期血吸虫病人的敏感性分别为100%、95.19%和77.78%,检测正常人的特异性为98.46%,与并殖吸虫、肝吸虫、囊虫及旋毛虫病人的交叉反应率分别为11.63%、7.55%、0和13.33%。结论 F-ELISA检测日本血吸虫病具有敏感性高、特异性强、快速简便等优点,具有较高的现场查病和临床诊断血吸虫病的应用价值。