肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞表位多抗原肽负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)树突状细胞(dendritic cell,DC),诱导CTL,采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大效应细胞/靶细胞(effector/target,E/T)时高出率均大于16%;其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大E/T时高出率均大于18%;其对自体淋巴细胞和DC不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应。     

DEC-205靶向的肝素酶CD4~+CD8~+T细胞表位肽纳米颗粒疫苗的抗肿瘤免疫效应研究

目的探索肝素酶CD4~+CD8~+T细胞表位肽纳米颗粒疫苗诱导CTL抗肿瘤免疫反应的可行性,并研究其抗肿瘤免疫杀伤效应。方法根据文献报道方法制备肝素酶表位肽纳米颗粒疫苗;采用流式细胞术检测DEC-205靶向的肝素酶表位纳米颗粒疫苗与树突状细胞(DC)的结合力及入胞效率;采用标准4h~(51)Cr释放实验检测负载DEC-205靶向的肝素酶纳米颗粒疫苗诱导的效应细胞对胃癌及结肠癌细胞的杀伤效率;采用ELISA CD4~+CD8~+T细胞表位DEC-205靶向纳米颗粒疫苗,其颗粒直径为(208±15.3)nm,Zeta电位为(-28.8±2.5)mV;纳米颗粒对多肽的封包率为(22±3.6)%。纳米颗粒疫苗可与树突状细胞有效结合,并可以有效进入树突状细胞内,这种结合和内吞作用随着加入的纳米颗粒的浓度增加而增加。体外杀伤实验结果显示,在效靶比为80∶1时CD4~+CD8~+表位肽纳米颗粒疫苗诱导的效应细胞对肿瘤细胞的杀伤效率可达70%,与单用CD8~+表位肽相比具有统计学意义(P0.01);T细胞增殖实验结果提示,CD4~+CD8~+表位肽组细胞的细胞增殖率显著高于单独使用CD8+表位肽组,细胞因子检测结果提示CD~4+CD8~+表位肽组细胞培养上清中IL-2、IL-12、IFN-γ浓度显著高于单独使用CD8~+表位肽组(P0.01)。结论采用DEC-205靶向PLGA颗粒包裹CD4~+CD8~+表位肽能够更加有效递送抗原信息,能更加有效地诱导CTL反应杀伤肿瘤细胞,本研究为TAA为基础的肿瘤免疫治疗提供一种新的方式。     

早期肠内营养联合针灸对急性胰腺炎的疗效观察

目的：通过观察早期肠内营养联合针灸治疗急性胰腺炎（Acute Pancreatitis,AP）及早期肠内营养加西医基础治疗AP,比较两组患者住院时间、腹痛缓解时间、胃肠减压时间、血淀粉酶（Serum Amylase,SAMY）恢复时间,研究早期肠内营养联合针灸对AP患者的疗效。方法：研究纳入明确诊断为脂源性AP（轻中度）患者60例,按1∶1比例分为两组,一组给予早期肠内营养联合西医基础常规治疗,即早期肠内营养组（对照组）,一组在对照组基础上予针灸治疗,即早期肠内营养联合针灸组（试验组）,比较两组患者住院时间、腹痛缓解时间、胃肠减压时间、血SAMY恢复时间、综合疗效。结果：试验组住院时间为（7.3±2.2）d,对照组住院时间为（8.6±2.7）d,P <0.05,差异有统计学意义。试验组胃肠减压时间为（4.6±0.6）d,对照组胃肠减压时间为（5.2±0.8）d,P <0.05,差异有统计学意义。试验组腹痛缓解时间为（6.3±1.4）d,对照组腹痛缓解时间为（6.4±1.5）d,P> 0.05,差异无统计学意义。试验组SAMY恢复时间为（4.2±1.2）d,对照组SAM...     

肝素酶CTL表位负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(Hpa)多肽疫苗体外能否诱发肝素酶特异性CTL反应,为肝素酶多肽疫苗的临床应用提供理论依据。方法5条HLA-A2限制性肝素酶抗原表位[Hpa(525-533)(PAFSYSFFV)、Hpa(353-361)(PLLSDTFAA)、Hpa(277-285)(KMLKSFLKA)、Hpa(400-408)(PLPDYWLSL)、Hpa(405-413)(WLSLLFKKL)]分别负载正常人外周血来源(PBMC)的树突状细胞(DC),诱导肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应,采用ELISPOT方法检测肝素酶表位肽负载的DC疫苗刺激的效应细胞IFN-γ的释放。结果5条肝素酶多肽表位中,只有Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)体外可以诱导肝素酶表位特异性CTL反应,对Hpa阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有明显的杀伤效应,对HLA-A2阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但对转染了HLA-A2的HepG2细胞和转染了肝素酶质粒的MCF-7细胞恢复杀伤效应,对自体淋巴细胞不具有杀伤效应,进一步研究表明,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)表位肽可以促进CTL细胞IFN-γ的释放。结论人肝素酶特异性抗原表位Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)不仅能激发机体特异性的抗肿瘤效应,而且还能诱导一个非特异性抗肿瘤的良性循环,这种肝素酶多肽疫苗具有广谱、高效、特异、安全的优点,为肝素酶表位多肽疫苗的临床应用提供了理论依据。     

HCCR-2干扰真核表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

目的构建HCCR-2干扰真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系。方法人工合成HCCR-2基因干扰序列并定向插入到RNAi真核表达载体pGenesil-1,通过测序鉴定。将干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。RT-PCR检测筛选克隆HCCR-2 mRNA的表达水平。结果测序表明HCCR-2干扰序列及读框完全正确,干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。RT-PCR结果显示RNAi-H1、RNAi-H3序列对HCCR-2 mRNA有较好的抑制效果。结论成功构建了HCCR-2干扰真核表达载体,HCCR-2干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系的建立为进一步研究HCCR-2在肝癌细胞中的作用奠定了基础。     

强生VITROS 5600全自动生化免疫分析仪生化检测项目正确度评价

目的利用患者样本通过方法学比对实验,评估对强生VITROS 5600全自动生化免疫分析仪15个生化检测项目相对于Siemens ADVIA 1650全自动生化分析仪检测结果的正确度。方法参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）EP9-A2文件,以Siemens ADVIA 1650作为比较仪器,强生Vitros 5600作为实验仪器,选用患者样本在两台仪器上分别测定钾（K）、钠（Na）、氯（Cl）、钙（Ca）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酸激酶（CK）、胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TRIG）、直接高密度脂蛋白（dHDL）、尿素（UREA）、肌酐（CREA）、尿酸（URIC）、葡萄糖（GLU）,并对检测结果进行线性回归分析、预期偏倚95%可信区间计算,以美国临床实验室修正法规（CLIA＇88）允许总误差的1/2作为可接受标准,判断两比对检测系统的相对偏倚是否属临床可接受水平,由此评估强生Vitros 5600检测结果的正确度。结果 K在医学决定水平为7.5mmol/L,Tp在75g/L、Crea在40.0μmol/L处,其检测结果的预期偏倚大于可接受偏倚,不能被临床接受;其余检测项目在其相应的医学决定水平处检测结果的相对偏倚属临床可接受水平。结论除K、Tp、Crea（医学决定水平分别为7.5mmol/L、75g/L、40.0μmol/L处）的正确度需做进一步评估外,强生VITROS 5600全自动生化免疫分析仪其它12个常规生检测项目的正确度基本符合质量要求。     

Solitaire支架半释放保护技术联合局部溶栓治疗重型颅内静脉窦血栓形成临床研究

目的:探索Solitaire支架半释放保护(Solitaire stent-retriever half-release protection,SHARP)技术联合局部溶栓治疗重型颅内静脉窦血栓形成(Cerebral venous sinus thrombosis,CVST)临床价值。方法:整理我院2016年4月至2020年4月收治的143例重型CVST患者的临床资料,按照其治疗方案,将接受抗凝+局部溶栓治疗的74例患者纳入对照组,将接受抗凝+局部溶栓+SHARP技术取栓治疗的69例患者纳入研究组。对比两组患者溶栓治疗时间、住院时间、血管再通情况、并发症发生情况,以及治疗前后Glasgow昏迷量表(Glasgow coma scale,GCS)、Glasgow结局量表(Glasgow outcome scale,GOS)、改良Rankin量表(Modified rankin scale,mRS)评分,凝血纤溶功能变化,并根据治疗后6个月mRS评分评价患者预后。结果:研究组溶栓治疗时间低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组血管再通率为95.65%,高于对照组的77.0...     

小切口非扩髓交锁髓内针治疗肱骨干骨折

笔者自2003年2月—2009年8月应用带锁髓内针治疗肱骨干骨折42例疗效满意。1临床资料1.1一般资料:本组42例,男29例,女13例,左侧12例,右侧30例。年龄16～67岁,平均25.5岁。受伤原因:交通事故22例,摔伤18例,其它伤2例,     

端粒酶活性调控研究进展

端粒（telomere）是存在于染色体末端的一种特殊结构,人和其它脊椎动物的端粒DNA均为（5’-TTAGGG-3’）n,大小5～20kb。每次细胞有丝分裂后,端粒都会缩短,缩短到一定程度后细胞就不可避免的发生衰老死亡。     

小鼠肝素酶H-2Kb限制性CTL表位预测及其MHC-I亲和力分析

目的预测肿瘤转移相关基因肝素酶的CTL表位,为探索基于肝素酶的抗原表位的免疫治疗奠定基础。方法利用基于超基序、量化基序结合人工神经网络方案开发的H-2Kb限制性CTL表位预测软件,对小鼠肝素酶蛋白的CTL表位进行预测,然后人工合成相关待测表位肽,再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力进行检测。结果采用机算机网络系统,预测了5条小鼠肝素酶抗原表位,即mHpa234-241（LGEDFVEL）,mHpa351-358（FAAGFMWL）,mHpa519~526（FSYGFFVI）,mHpa386-393（VDENFEPL）,mHpa398-405（LSLLFKKL）,MHC亲合力实验表明,与阴性对照肽对比,随着预测肽浓度增加,H-2Kb的表达逐渐增加,与MHC-Ⅰ类分子的亲和力亦逐渐增强,当预测肽浓度达到30μmol/L时,其荧光系数（FI）均大于1.5。结论通过计算机软件预测到的5条小鼠肝素酶CTL表位与MHC-Ⅰ类分子均有较高的结合亲和力,为该表位的下一步体内鉴定及基于小鼠肝素酶抗原表位的肿瘤免疫治疗奠定基础。