端粒酶hTERT促进肿瘤细胞侵袭与转移及其机制研究

目的观察hTERT基因修饰对人骨肉瘤细胞系U-2OS生物学行为的影响。方法采用脂质体法将克隆有人全长cDNA hTERT的真核荧光质粒（pIRES2-EGFP—hTERT）转染端粒酶阴性的人骨肉瘤U-2OS细胞,经G418筛选,免疫组化和Westom Blot鉴定后,检测其端粒酶活性的改变、生长周期以及生物力学的变化。结果成功转染人真核荧光表达载体的U-2OS细胞能有效抵抗G418,并可有效表达hTERT蛋白,细胞内端粒酶活性明显增强,G,期细胞比例下降,S期细胞比例升高,并且还明显增强了对细胞外基质的粘附力。进一步采用Transwell小孔迁移实验检测发现,hTERT／U2OS侵袭能力明显增强。结论转染hTERT基因后,U-2OS细胞内可同时通过端粒酶途径延长端粒。hTERT基因修饰可促进细胞周期进程,促使细胞从01期→S期。通过替代途径延长端粒的肿瘤细胞在hTERT基因修饰后,增殖能力及侵袭能力明显增强．     

动物活体光学成像的应用进展

随着对亚细胞结构和功能、分子生理和病理、细胞间和细胞内信号通路研究的深入,人类对疾病和对生命本质的认识不断被追朔到蛋白质、基因水平.在上个世纪发展起来的CT、MRI、PFT、超声等宏观影像技术已经远不能满足对活体环境内细微生命过程的探询.组织切片和免疫染色能够部分解释一些生物现象,但是需要研究对象与活体组织的分离,所得结果与其在活体内机制难免有所偏离,甚至完全相反.荧光染料(fluorescent dye)能对多种细胞共价标记并进行活体显像,但多被限制于体外培养的细胞.     

CTL表位预测的研究进展

细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位是抗原蛋白中经抗原提呈细胞(APCs)处理,与MHC-Ⅰ类分子结合并共同被T细胞抗原受体(TCR)特异性识别从而诱导相应的CTL克隆产生免疫应答的短肽.     

CTL表位多肽疫苗抗肿瘤研究进展

以肿瘤的免疫治疗为主的肿瘤生物治疗是目前临床治疗恶性肿瘤继手术、放、化疗之后的第4种模式[1],它既可以独立地治疗肿瘤,又可与手术及放、化疗结合,具有疗效高、特异性强、副作用小等优点,尤其对于中晚期已经发生转移的恶性肿瘤而言,它具有独到的治疗作用,近年来越来越受到人们的关注.     

博爱奉献精神在输血学教育中效果的探讨

目的通过自始至终对在校检验医学生博爱奉献精神的教育,以及老师的言传身教,在潜移默化、环境熏陶、感染影响等作用下,使学生在具备良好的职业道德素质的同时,掌握扎实的专业知识和技能,培养一批乐于奉献、大爱无私的新型输血学人才。方法加强传统美德教育,建立民族自豪感。改进教学方法,提高教学质量,树立榜样等来提升学生的博爱奉献。通过期末各种测试来评价效果。结果通过对07、08、09三届学生的培养,无偿献血人数达49.1%,沟通协调能力等四项考试成绩大幅提升。与开学时比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论通过几年时间连续不断的不懈努力,学生对输血学科已有浓厚的兴趣,每次到课率几乎100%,且学生自愿无偿献血人数已明显增加,将博爱奉献精神渗透进医学教学的全过程中,着重积极正面教育对培养高素质的输血学人才很有意义。     

应用DHS治疗老年股骨粗隆间骨折46例分析

目的探讨DHS治疗股骨粗隆间骨折的手术方法,并发症及功能性恢复情况。方法对46例股骨粗隆间骨折进行DHS内固定,术后早期功能锻炼,延迟负重。结果随访1~3 a(平均2 a),按黄公怡疗效评定标准,优34例,良11例,差1例,优良率98%。结论 DHS系统是老年股骨粗隆间骨折可靠的内固定方法,可以早期进行功能锻炼。     

中性粒细胞绝对数与血小板计数的比值对严重烧伤患者预后的判断价值

目的探讨烧伤患者伤后第3天外周血中中性粒细胞绝对数与血小板计数的比值（NPR）在预后判断中的作用。 方法回顾性分析安徽医科大学第一附属医院烧伤科2008年1月至2015年12月期间收治的416例成人重度及以上烧伤患者的临床治疗,收集患者伤后第3天中性粒细胞和血小板计数的化验检查结果。依患者伤后第3天NPR中位数值,将其分为高NPR（≥0.077）和低NPR（<0.077）2组,同时综合考虑2组患者性别、年龄、吸入性损伤、机械通气、早期手术、烧伤指数等资料。对观察指标值行χ²或t检验,利用Kaplan-Meier法分析严重烧伤患者住院期间生存率,带入Cox回归分析并绘制58例死亡患者受试者工作特征（ROC）曲线,分析伤后第3天NPR对判断严重烧伤患者预后的作用。 结果伤后第3天高NPR组和低NPR组在严重烧伤住院期间生存率分别为78.9%和93.2%,差异具有统计学意义（P<0.01）。Cox回归分析提示伤后第3天NPR为预测烧伤后患者死亡的独立危险因素（HR：33.353;95%CI：4.050~274.704,P<0.01）。58例死亡患者ROC曲线显示,烧伤后第3天NPR值曲线下总面积为0.742（95%CI：0.675~0.809,P<0.01）。其中伤后第3天NPR的最佳阈值为0.099（敏感度67.2%,特异度70.1%）。 结论烧伤后第3天NPR对预测严重烧伤患者的预后有较强的临床意义。     

人肝素酶蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

目的构建人肝素酶蛋白的原核表达载体,表达并纯化重组人肝素酶蛋白和制备其单克隆抗体。方法将人肝素酶cDNA隆至原核表达载体pET30a（＋）,经大肠杆菌表达、纯化后,获得的肝素酶纯化蛋白免疫小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2／0细胞融合,制备能产生肝素酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步采用Western blotting、ELISA等技术对制备的单克隆抗体进行初步鉴定。结果原核表达重组质粒在大肠杆菌中能高效表达人肝素酶蛋白,并进一步从10株杂交瘤细胞中选取了3株能稳定分泌人肝素酶单抗的杂交瘤细胞株。结论成功制备了3株人肝素酶特异性单克隆抗体。     

端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究

目的构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位（hTERT）启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用。方法将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL—Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功能检测。确定其驱动活性之后,构建一种含该启动子和GFP的第3代慢病毒表达系统,以含CMV启动子的慢病毒作为对照。采用小动物荧光成像系统体内外研究优化型hTERT启动子在肿瘤实时诊断中的作用。结果启动子功能检测发现hTERT启动子具有严格的端粒酶阳性肿瘤细胞特异性,并且具有很高的报告基因报答水平。第3代慢病毒包装系统获得了高滴度的病毒颗粒并且能高效整合报告基因之宿主细胞。体外研究表明,含有优化型hTERT启动子的慢病毒体外感染细胞后,能够在端粒酶阳性肿瘤细胞内特异表达GFP,并且能维持长达40d的报告基因表达时间。体内实验发现,感染含优化型hTERT启动子的慢病毒之后24h,端粒酶阳性活体肿瘤能够被特异性的实时观察到,并且肿瘤内的GFP信号在存活裸鼠体内维持30d,随肿瘤增大而增强。结论优化后hTERT启动子对报告基因的调控具有严格的端粒酶特异性,第3代慢病毒系统可将该启动子和报告基因整合至细胞基因组,并实现在端粒酶阳性肿瘤细胞内的特异表达。结合小动物活体光学成像系统,荷瘤裸鼠内的端粒酶阳性肿瘤能够被无创的、实时的、特异性的成像,为肿瘤的特异性早期诊断提供新的实验理论基础。     

端粒酶hTERT促进肿瘤细胞侵袭与转移及其机制研究

目的观察hTERT基因修饰对人骨肉瘤细胞系U-2OS生物学行为的影响。方法采用脂质体法将克隆有人全长cDNAhTERT的真核荧光质粒(pIRES2-EGFP-hTERT)转染端粒酶阴性的人骨肉瘤U-2OS细胞,经G418筛选,免疫组化和Westorn Blot鉴定后,检测其端粒酶活性的改变、生长周期以及生物力学的变化。结果成功转染人真核荧光表达载体的U-2OS细胞能有效抵抗G418,并可有效表达hTERT蛋白,细胞内端粒酶活性明显增强,G1期细胞比例下降,S期细胞比例升高,并且还明显增强了对细胞外基质的粘附力。进一步采用Transwell小孔迁移实验检测发现,hTERT/U2OS侵袭能力明显增强。结论转染hTERT基因后,U-2OS细胞内可同时通过端粒酶途径延长端粒。hTERT基因修饰可促进细胞周期进程,促使细胞从G1期→S期。通过替代途径延长端粒的肿瘤细胞在hTERT基因修饰后,增殖能力及侵袭能力明显增强。