保留前列腺包膜的膀胱全切除-原位回肠新膀胱术

目的 探讨保留前列腺包膜的膀胱根治性切除-原位回肠新膀胱术的手术方法及疗效.方法 2002年5月至2008年9月,对35例浸润性膀胱癌患者施行了保留前列腺包膜的膀胱根治性切除-原位回肠新膀胱术,其中开放手术22例,腹腔镜手术13例.术中保留患者的前列腺包膜、精囊、输精管、神经血管束.术后对患者进行定期随访,了解患者的生活质量、排尿情况,并检测患者的残余尿量、新膀胱压力及性功能情况等.结果 全部患者均顺利完成保留前列腺包膜和勃起神经的膀胱根治性切除一原位回肠新膀胱术.其中开放手术时间为210～330 min,平均271 min;术中出血200～800 ml,平均460 ml.腹腔镜手术时间为210～420 min,平均343 min;术中出血80～800 ml,平均377 ml.术后3个月IVU及代膀胱造影检查,显示双肾显影良好,无输尿管返流及梗阻,代膀胱充盈良好,容量约250～350 ml.术后6个月随访,所有患者均能自行排尿,2例患者有夜间尿失禁.术后71.4%(20/28)的患者保留了阴茎勃起功能.无患者出现尿道残端或前列腺包膜肿瘤复发,有2例发生盆腔淋巴结转移,1例骨转移.结论 保留前列腺包膜的膀胱根治性切除术与标准的膀胱前列腺根治性切除术相比,具有操作简单、控尿效果好、可保留勃起神经等特点,适用于对性功能要求较强、肿瘤未累及膀胱颈及前列腺的较年轻的患者.然而,其肿瘤控制效果还有待于进一步观察.     

稳定阻断前列腺癌细胞中p65的shRNA基因序列的获得及蔓病毒载体的构建

目的 获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中核因子[NF-κB(p65)]表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.方法 根据p65基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3 3条针对p65基因cds区的siRNA序列,组建shRNA对应的4对互补的单链DNA,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5'向3'顺序依次为:酶切位点(BamH Ⅰ)、干扰序列(19bp)、loop环(TTCAAGAGA)、干扰序列的反向互补序列(19 bp)、中止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoR Ⅰ).将合成的序列插入空载体pSI H1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-time聚合酶链反应(PCR)检测不同序列片段对p65的mRNA抑制效果,通过Western blot检测对p65蛋白表达的抑制效果.从而获得可以稳定高效抑制前列腺癌细胞中p65表达的shRNA序列.结果 设计的3条针对p65的序列中第3条的抑制效果最好,目的序列位于p65(NM_021975)的1096～1113,茎环序列为5'-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCA TTCAAGAGA TGACGTAAAGGGATAGGGC TTTTT G-3'.其对前列腺癌细胞株中p65的mRNA的干扰效率为59%,对其蛋白表达的抑制率为81%.转染细胞后,细胞可以稳定低表达p65.结论 成功获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中p65表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.     

mCIM与eCIM在产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌表型筛查中的价值

目的 分析改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)与乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)对产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌表型筛查的效能及应用价值.方法 收集碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)117株(实验组)、碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌50株(对照组).分别采用改良Hodge试验(MHT)、mCIM和eCIM进行表型筛查,采用...     

经尿道前列腺汽化电切术治疗高龄高危前列腺增生症56例临床分析

目的 总结经尿道前列腺汽化电切术(TUVP)对高龄高危良性前列腺增生症(BPH)的疗效和安全性.方法 对56例高龄高危BPH患者行TUVP手术.总结手术中的技巧以及手术后并发症.对比观察手术前、后国际前列腺症状评分、残余尿量、最大尿流率等指标的差异.结果 手术时间40～100 min,平均55 min;切除腺体重20～80 g,平均48.5 g;术中出血量50～150 ml,平均100 ml.平均随访12个月,患者国际前列腺症状评分由(27.5±3.0)分降至(8.9±2.9)分,残余尿量由(280±30)ml降至(28±10)ml,最大尿流率由(8.7±3.8)ml/s升至(21.2±6.7)ml/s.2例由于其他基础疾病死亡,1例出现尿道狭窄经门诊行尿道扩张后治愈.结论 TUVP可作为治疗高龄高危BPH患者安全有效的方法.     

骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质上的生长及分化***★

背景：传统方法多采用平滑肌细胞和移行上皮细胞构建组织工程膀胱，并进行支架材料的双面种植，但由于平滑肌细胞取材培养困难，且体外传代有限，双面种植较为困难。 目的：实验拟验证以骨髓间充质干细胞及膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的可行性。 设计：基础实验研究。 单位：中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心。 材料：实验于2006-03/2007-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成。实验室级别为卫生部部属医院开放实验室。1月龄SD大鼠，雌雄不限，体质量80~ 100g，由中山大学实验动物中心提供。新鲜猪膀胱取自南方医科大学动物实验中心。 方法：采用全骨髓培养连续贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，并应用流式细胞仪检测其表面抗原。采用去污剂洗涤法制备猪膀胱脱细胞基质，并测定其纯度及特性。将第3代骨髓间充质干细胞接种到膀胱脱细胞基质上，以添加25 ng/L血管内皮生长因子（VEGF165）的培养液进行体外、体内复合培养，检测其相容性。体内实验以细胞单独培养为对照，体外实验以未植入细胞的材料为对照，并模拟合适的微环境诱导骨髓间充质干细胞生长分化，分别在4，8周后取出动物体内的复合材料行组织切片检查，并进行免疫组织化学角蛋白染色，检测上皮细胞再生情况。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性。 结果：①采用全骨髓法成功培养出骨髓间充质干细胞，行流式细胞仪检测细胞表面抗原显示，传代第3代细胞CD29阳性细胞为99.43%。②制备的膀胱脱细胞基质具有良好的生物特性，镜下见均质状态的基质和细丝状的胶原纤维。体内外相容性实验表明骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的相容性，细胞生长状态良好。③4周后组织切片检查可见组织中较多炎症细胞浸润，胶原及弹性纤维排列紧密，免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、不连续的单层上皮生长，8周后可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应，胶原及弹性纤维排列紧密，免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、连续的多层上皮生长。 结论：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的生物相容性，并且在体内与周围组织有良好的生物相容性，可以作为构建组织工程膀胱的材料。     

经脐单孔腹腔镜乳头式输尿管膀胱再植术初步体会

【目的】 探讨采用自制多通道套管和常规器械经脐行腹腔镜下乳头式输尿管膀胱再植术的可行性和疗效｡【方法】 2009年4月至2009年12月对9例输尿管末端狭窄或异位开口的患者行腹腔镜输尿管膀胱再植术｡气管内全麻下经脐部切口置入自制多通道套管(用手套和两个弹性橡胶环制作而成)｡从髂血管分叉处找到并游离异常输尿管至膀胱壁段处切断,末端1 cm纵行切开外翻缝合形成乳头,输尿管内置双J管,从膀胱后顶部切口插入膀胱约1 ~ 1.5 cm,4-0可吸收线间断吻合6针,检查无渗漏后放置盆腔引流｡【结果】 全部手术均在单孔腹腔镜下成功完成,无需术中增加套管或开放手术｡平均手术时间为87 min,平均估计失血量小于30 mL,无术中并发症发生,术后1 d可起床活动,引流管､尿管､双J管分别在2 d､7 d､30 d拔除,内镜下可见输尿管乳头,术后2 ~ 3月静脉尿路造影(IVU)及膀胱尿道造影未见吻合口狭窄和反流,脐部切口美观｡【结论】 经脐单孔腹腔镜下输尿管膀胱再植术具有创伤小､美观经济､恢复快的优点｡输尿管乳头式膀胱再植法狭窄率低､抗反流效果好,镜下操作简便,值得推广应用｡     

腹腔镜下肾癌根治术

目的 探讨经腹入路腹腔镜下肾癌根治术的手术方法。方法 38例肾癌患者施行了手术，患者采用全侧卧位，用3—4个套管针，镜下切开侧腹膜显露肾周筋膜前面，在肾动静脉根部分别用线结扎及钛夹钳夹后切断，低位切断输尿管，沿肾筋膜外完整切除肾脏及肿瘤，清扫肾门旁、腹主动脉及下腔静脉旁淋巴结，小切口取出肾脏。结果 手术时间75～250min，平均110min；出血50～300ml。均未输血。术后恢复良好，疼痛较轻，无明显并发症。结论 经腹入路腹腔镜下肾癌根治术，术中暴露良好，便于肾动静脉处理及淋巴结清扫，肾筋膜外切除肾脏完整取出符合肿瘤治疗原则，可减少种植转移。     

芳基三氮烯甲氧嘧啶选择性抗小鼠Lewis肺癌转移的作用

本实验对比研究了芳香三氮烯甲氧嘧啶(ATMP)和环磷酰胺(CY)对小鼠Lewis肺癌的作用。ATMP在不影响原发瘤生长的同时,可明显减少自发性转移的发生,而CY对原发瘤及转移瘤都有抑制作用。³H-TdR部分参入实验证明,ATMP对Lewis肺癌的细胞毒作用很弱。ATMP对人工转移无影响;提前给药不影响自发性转移;不改变小鼠腹腔巨噬细胞Fc受体的活力。上述实验提示,ATMP具有选择性的抗转移作用,其作用环节可能是抑制肿瘤细胞从原发部位的脱落以致不能进入血液循环。     

氮烯咪胺类似物的抗肿瘤作用

抗癌三氮烯化合物氮烯咪胺(DTIC)由于化学性质不稳定等缺点,使其应用受限制。本所合成了一系列芳基三氮烯化合物,其中3号化合物(T_3)不仅化学性质稳定~[1],而且还有一定的药理活性,我们研究了T_3的抗癌和毒性作用,并与DTIC进行了初步比较。     

p65基因序列shRNA慢病毒载体构建及其作用功能的初步研究

Objective To obtain shRNA sequences that can stably block the expression of Nuclear Factor kappa- B (p65) in the prostate cancer cell line LNCaP and construct the lentivirus vector.And validate the gene function of p65 in the cell line. Methods According to p65 genetic information, we design siRNA1, siRNA2, siRNA3 those three siRNA sequences targeting the ods area of p65 gene and then form the corresponding four pairs of complementary single strand DNA of shRNA, including the sense strand and the antisense strand. The synthetic shRNA sequence was inserted into the empty pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector, and after transfecting the prostate cancer cells , the inhibitory effect of p65 mRNA by different sequences was detected through real-time PCR, and the inhibitory effect of p65 protein expression was detected by Western-blotting. Thus we can obtain highly effective shRNA sequences in the inhibition of p65 in prostate cancer cells. MTT, flow cytometry, transwell were chosen to test the cell growth, migration and invasive power in vitro to compare the difference of the experimental group, control group and negative group. Results The third shRNA sequence had the best inhibitory effect and the inhibitory effect of p65 mRNA in prostate cancer cell line was 59 % and the protein was 81%. It's position locates in p65 (NM_021975 ) 1096-1113 and it's stemloop sequence is 5'-GATCCGCCCTATCCCTTTACGTCATTCAAGAGATGACGTAAAGGGATAGGGCTTTTTG-3'. After transfecting, the prostate cancer cell line had the low expression of p65 stably. Through MTT, we got the growth curve, which showed that the growth ability of experimental group was significantly decreased compared with the control group and the Logarithmic growth didn't appear in the first 96 hours. Flow cytometry test displayed that the percentage of G0-G1-phase cells in experimental group was 61.49%, and the control group was 44.89%, idle group was 41.52%, which was increasing oberviously. The S-phase cells in the experimental group was 28.58%, compared with the 47.36% and 46. 10% diminished. The results of transwell showed that the experimental group had 16. 5000±6. 62076 cells and the other two groups had 45. 6333 13. 54159 and 36. 8333±5. 68412 cells, which showed the invasive power of experimental group was significantly declined(P＜0.05).Conclusions It's successful to obtain shRNA sequences that can stably block the expression of p65 in the prostate cancer cell line LNCaP and construct the lentivirus vector. p65 can positively regulates the biological behavior of prostate cancer LNCaP cell line in the cell growth, migration and invasive power.