FADH2-依赖型卤化酶阳性放线菌1076的筛选、分类鉴定及其代谢产物的结构研究

目的 筛选FADH2-卤化酶阳性菌株发现天然卤化物.方法 设计新的简并引物对200株放线菌基因组卤化酶基因扩增以筛选阳性菌株,并进行比对分析;对阳性菌株进行分类鉴定,对其代谢产物进行HPLC-MS分析.结果 筛选得到到51株阳性菌,其中一株与恩拉霉素的同源性为99％.对该编号为1076的菌株进行的分类鉴定结果,确定为Streptomyces macrosporeus.对其代谢产物进行的HPLC-MS分析显示,其代谢产物与恩拉霉素同质.结论 卤化酶阳性菌株1076属于S.macrosporeus的一个菌株,是新的恩拉霉素产生菌.     

反义RNA靶序列对大肠杆菌ftsZ基因沉默效果的影响

目的筛选出能够有效引起大肠杆菌ftsZ基因沉默的反义RNA片段。方法利用携带paired termini结构的质粒模仿天然asRNA的二级结构表达稳定的反义RNA,通过平板生长表象观察、菌体形态变化及液体培养生长速率变化考察了不同反义靶序列对大肠杆菌ftsZ基因沉默效果的影响。结果 ftsZ1、ftsZ4和ftsZ5 3个反义RNA片段可有效引起相关基因沉默。结论获得的ftsZ1、ftsZ4和ftsZ5 3个反义RNA片段可进一步用于ftsZ特异性酶抑制剂的超敏全细胞模型构建。     

依替米星对斑马鱼细菌感染过程中中性粒细胞增殖及功能的影响

目的 中性粒细胞作为机体对抗细菌感染时的第一道免疫防线,发挥了重要的防御功能。本文探索依替米星在治疗斑马鱼感染过程中,对中性粒细胞增殖和功能的影响。方法 采用斑马鱼胚胎心包腔内注射方法,考察不同细菌负载量对斑马鱼生存率的影响,建立感染模型;通过考察斑马鱼生存率及体内细菌清除情况,确定依替米星的体内治疗浓度;将表达红色荧光蛋白的大肠埃希菌与绿色荧光标记中性粒细胞的转基因斑马鱼Tg(mpx:GFP)结合,通过苏丹黑染色观察中性粒细胞的颗粒,通过多色荧光成像和细胞计数观察细菌与中性粒细胞的动态变化,并统计分析依替米星对中性粒细胞的增殖、趋化及脱颗粒的影响。结果 通过心包腔注射大肠埃希菌1000 CFU/胚胎,建立斑马鱼感染模型;确定依替米星治疗浓度为4 mmol/L,该浓度下感染斑马鱼24 hpi的生存率显著提高,体内的活菌数及细菌荧光强度显著降低,趋化因子IL-8转录水平是感染组的1/3,心包腔部位中性粒细胞“+++”等级的斑马鱼占比是感染组的1/4,体内总中性粒细胞数量和脱颗粒比例占比略有下降,但不显著。结论依替米星在斑马鱼感染过程中,可有效清除心包腔部位的细菌,提高斑马鱼生存率,并且显...     

miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖-凋亡的影响

目的探讨miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。方法RT-qPCR检测21例卵巢癌组织及对应癌旁正常卵巢组织中miR-146a表达;将miR-146a模拟物和miR-146a阴性对照转染到卵巢癌SKOV3细胞中,RT-qPCR检测转染后SKOV3细胞中miR-146a的表达;CCK8检测转染后miR-146a对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染后miR-146a对细胞凋亡的影响;Western blot检测SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的表达。结果 miR-146a在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织;转染miR-146a模拟物能显著提高SKOV3细胞miR-146a的表达量,显著降低SKOV3细胞的增殖能力,提高SKOV3细胞的凋亡率,抑制SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的蛋白表达(P0.01)。结论 miR-146a在卵巢癌癌组织低表达,转染miR-146a模拟物能抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。     

放线菌1161代谢产物分离纯化及其菌种鉴定

本文对放线菌1161粗提物进行抗菌活性检测,并利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析该菌株代谢产物,然后对其代谢产物1161-S8和1161-S9进行分离,最后对该菌株进行分类鉴定。结果表明,该菌株代谢产物对Bacillus subtilis、Sarcina lutea、Staphylococcus aureus、methicillin-resistant Staphylo-coccus aureus(MRSA)、vancomycin-resistant Enterococcus faecalis(VRE)均显示出较强的抗菌活性;UPLC-MS/MS分析其粗提物显示可能为结构相似的一系列的化合物,通过质谱氢谱和碳谱数据判断1161-S8和1161-S9分别为阿扎霉素F4和阿扎霉素F5。同时结合该菌株培养特性、生理生化特性、16SrRNA序列比对与系统进化分析,将其初步鉴定为Streptomyces malaysiensis,是阿扎霉素新的产生菌。     

1例后腹膜胚胎性横纹肌肉瘤患儿术后化疗致Ⅳ度骨髓抑制的护理

横纹肌肉瘤（RMs）起源于向横纹肌分化的原始间叶细胞,是由不同分化程度的横纹肌细胞组成的软组织恶性肿瘤。其组织形态有3种变异型,即胚胎型、腺泡型和多形型[1]。而胚胎性横纹肌肉瘤（ERMS）是起源于未分化中胚层的复发率高、生存率低的高度恶性软组织肉瘤,多发生于3～12岁儿童,好发于头颈（约47％）及泌尿生殖系统（约28％）,而在右胆道、后腹膜、盆腔、腹膜等部位少见。ERMS的治疗包括全身治疗和局部治疗。     

氨基糖苷类抗生素作用机制研究进展

氨基糖苷类抗生素作为一种杀菌性抗菌药物,具有抗菌谱广、杀菌完全等特点,其作用机制主要是通过抑制细菌蛋白质的合成而杀死细菌。随着新技术、新方法的应用,杀菌性抗生素普遍性地通过产生羟基自由基杀死细菌及其他作用途径也被挖掘。本文简要综述氨基糖苷类抗生素的作用机制,并对新型氨基糖苷类抗生素的开发进行展望。     

2016~2017年阜阳市HbsAg阴性HBVDNA阳性无偿献血者人群特征分析

目的:了解阜阳市HbsAg阴性HBV DNA阳性无偿献血者人群分布特征。方法:2016~2017年阜阳市无偿献血者血液标本经2种ELISA试剂检测,无反应性的标本采用6混样核酸反应实验检测,反应性结果进行拆分,确定最终阳性样本。结果:无偿献血者中HbsAg阴性HBV DNA阳性献血者共100人,其中男性献血者阳性率与女性献血者无明显差异(P>0.05);初次献血者阳性率明显高于重复献血者(P<0.05);按年龄统计分成5个年龄段,各年龄段阳性率存在明显差异(P<0.05),且随着年龄增加,阳性率随之增长。结论:核酸检测有效降低了HBV经输血传播的风险,HbsAg阴性HBV DNA阳性无偿献血者分布存在一定的流行病学特征,针对易感人群应有相应预防措施。     

具有糖基转移抑制活性的抗生素研究进展

细菌细胞壁的骨架肽聚糖的生物合成过程在抗生素治疗中具有重要地位.随着细菌耐药性日益严重,糖基转移过程成为新型抗生素极有潜力的靶标.近年来,糖基转移酶的三维结构的确定,酶与抑制剂复合物结构及其相互作用的详细阐述,都为筛选和研究抑制糖基转移活性的新型抗生素提供了新的突破点.文中依照作用机制的不同,依次论述了直接抑制糖基转移酶活性的抗生素--默诺霉素及其类似物、万古霉素疏水衍生物,和作用于底物脂Ⅱ的抗生素--万古霉素和替考拉宁、雷莫拉宁、硫醚抗生素及一些推测的底物结合物,就其近年的研究进展做一综述.     

基于反义RNA技术的FabI抑制剂筛选模型的构建

目的基于反义RNA沉默技术构建针对细菌FabI的超敏全细胞筛选模型,用于筛选FabI抑制剂。方法以Escherichia coli基因组DNA为模板,PCR扩增fabI基因的–74~86bp核苷酸序列,反向插入携带paired termini结构的反义质粒pHN678中,得到重组质粒pHNF,再转化至E.coli中,得到反义工程菌E.coli/pHNF;通过平板表型观察对反义工程菌进行筛选;考察了IPTG浓度对筛选模型的影响,确定96孔板抗菌筛选模型的条件,并用三氯生作为阳性对照、氨苄西林和浅蓝菌素作为阴性对照对该模型进行评价。结果获得了针对fabI的反义工程菌,确定了最适IPTG浓度为40μmol/L,成功构建了FabI特异性酶抑制剂的超敏全细胞筛选模型,并验证了其可行性。应用该筛选模型对5847个内生真菌次级代谢产物进行活性筛选,初筛阳性率约为9.7%,经复筛后获得8份阳性样品。结论成功建立了基于反义RNA沉默技术的FabI超敏全细胞筛选模型,并利用该模型筛选到8份阳性样品。