PI3K/AKT通路在二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究

目的 研究PI3K/AKT 信号通路在二烯丙基二硫（DADS）诱导K562 细胞凋亡中的作用。方法 用 10、20、40、80 mg/L DADS 处理K562 细胞48 h,采用吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）染色法倒置显微镜观察细胞形态学变化;AnnexinV-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率;Western blot 技术检测AKT、p-AKT、Caspases-3 蛋白的表达,并设置空白对照组和溶媒对照组。结果 DADS 作用K562 细胞48 h 后,细胞出现体积缩小、形态不规则、胞膜突出等凋亡特征。AO/EB 染色显示：随DADS 浓度增加,胞体缩小、胞核呈固缩状或圆珠状,染色质凝集,核染色呈橘红色的凋亡细胞数增多,以40 mg/L DADS 组最明显。10、20、40、80 mg/L DADS 组的凋亡率均高于对照组（P P > 0.05）;随DADS 浓度增加,p-AKT 蛋白逐渐下降、Caspases 3 蛋白逐渐升高,差异有统计学意义（P 结论 DADS 诱导K562 细胞发生凋亡,其机制可能与DADS 抑制PI3K/AKT 信号通路的表达相关。     

骨髓间充质干细胞在异基因骨髓移植中的研究进展

骨髓间充质干细胞（MSCs）是骨髓基质细胞的前体细胞,分泌多种造血相关因子,表达多种黏附因子,同时具有免疫调节功能,在造血微环境发挥重要作用。因此,利用MSCs做滋养层,体外扩增造血干细胞（HSC）,临床联合移植MSCs和HSC,提高造血重建的能力,减少或减轻移植物抗宿主病（GVHD）的发生,具有很广阔的研究前景。     

三氧化二砷诱导慢性粒细胞系K562细胞凋亡及细胞周期变化研究

目的　研究三氧化二砷 (AS2 O3 )体外对K5 6 2细胞凋亡的诱导作用 ,探讨AS2 O3 促进慢性粒细胞系K5 6 2细胞凋亡机制。方法　采用不同浓度AS2 O3 处理慢性粒细胞系K5 6 2细胞 ,观察细胞形态改变 ,细胞生长抑制检测 (MTT)分析方法检测AS2 O3 对K5 6 2细胞增殖抑制作用 ;流式细胞仪检测细胞周期变化。结果　 (1～8)× 10 -6mol/LAS2 O3 能明显诱导K5 6 2细胞凋亡。流式细胞检测表明 ,随AS2 O3 浓度增加和处理时间延长 ,S期细胞比例渐下降 ,细胞凋亡率上升 ,其作用呈浓度 时间依赖性 (P <0 .0 1)。结论　AS2 O3 可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,其作用机制可能是使细胞受阻于S期前的某个时期 ,从而诱导细胞凋亡 ,其作用呈剂量 时间性     

异常DNA甲基化在慢性髓系白血病中的临床应用

DNA甲基化是一种人体内重要的生物化学过程,即在不改变DNA序列的情况下,基因表达发生可稳定遗传的变化。DNA甲基化状态的改变与众多生物过程有着紧密的关联,涵盖细胞增殖、细胞分化、胚胎发育、免疫性疾病及肿瘤的发生和发展等诸多生理和病理活动。特别是,异常DNA甲基化在慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的发生、进程和预后中起关键作用。DNA甲基化在CML的诊断及治疗上显示出巨大潜力。深入了解DNA甲基化的具体机制,尤其是在CML患者中特定基因的DNA甲基化异常改变,有助于推动以DNA甲基化为基础的新型靶向治疗策略进入临床实践,从而有效地诊断并治疗CML患者。     

沉默 UVRAG 对白血病K562/ADM 细胞自噬及耐药性的影响

目的：探讨沉默紫外线抵抗相关基因（UVRAG）对人白血病 K562/ ADM 细胞自噬及耐药性的影响。方法 Western Blotting 检测 UVRAG 蛋白在 K562及 K562/ ADM 细胞中表达差异。特异性干扰 UVRAG 基因的 UVRAG siRNA 及 Scramble siRNA 在 LipofectamineTM2000介导下转染 K562/ ADM 细胞,CCK-8法、MDC荧光染色及 Western Blotting 分别检测 UVRAG siRNA 转染前后 K562/ ADM 细胞耐药性、自噬水平以及 P-糖蛋白（P-gp）表达的变化。结果 Western Blotting 检测显示 K562/ ADM 细胞中 UVRAG 蛋白表达明显高于K562细胞（P ﹤0.05）;与 K562/ ADM 组及 Scramble siRNA 转染组相比,UVRAG siRNA 转染组 UVRAG 蛋白表达显著下降（P ﹤0.05）,以48 h 效果最佳,提示 UVRAG siRNA 能高效沉默 K562/ ADM 细胞 UVRAG;CCK-8法显示与 K562/ ADM 组及 Scramble siRNA 转染组相比,UVRAGsiRNA 组对阿霉素敏感性显著增高,IC50值明显下降（P ﹤0.05）;MDC 染色荧光显微镜观察到 UVRAG siRNA 转染后 K562/ ADM 细胞胞浆中自噬泡明显减少;Western Blotting 显示 K562/ ADM 细胞中 Beclin-1、P-gp 表达及 P62降解明显高于 K562细胞,与K562/ ADM 细胞及 Scramble siRNA 转染组相比,UVRAG siRNA 转染组 Beclin-1、P-gp 表达及 P62降解显著降低（P 均﹤0.05）。结论 UVRAG 蛋白在 K562/ ADM 细胞中高表达,与白血病 MDR 密切相关;UVRAG siR-NA 下调 UVRAG 表达可降低 K562/ ADM 细胞耐药性,其机制可能与降低自噬水平及下调 P-gp 表达有关。     

大鼠骨髓间充质干细胞分泌多种造血相关因子的研究

目的:初步探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)分离培养的方法及检测其所表达的多种细胞因子。方法:采用全骨髓贴壁法和单克隆培养法分离培养大鼠骨髓MSC,间接免疫荧光法鉴定其生物学特性,RT-PCR方法检测多种细胞因子的表达。结果:成功分离出大鼠骨髓MSC,CD44表达率为92.3%,CD45表达率为6.9%;RT-PCR分析示有干细胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子(TGF-β1)的表达,不表达白介素-3(IL-3)。结论:成功从大鼠骨髓中分离培养出MSC,并分泌多种造血相关因子,这可能揭示了其促造血功能的部分分子基础。     

大蒜素对 Jurkat 细胞 CXCR4表达的影响

目的：探讨大蒜素对体外培养的 Jurkat 细胞中 CXCR4启动子活性的影响。方法：克隆人 CXCR4启动子序列,构建报告载体 PgL4.17- CXCR4,转染 Jurkat 细胞,G418筛选分组后,大蒜处理分高、中、低浓度3组（40μg/ ml、20μg/ ml、10μg/ ml）,以未做任何处理的转染细胞作为对照组,以注射用水处理的转染细胞作为注射水对照组,各组处理24h 后,在相应的条件下进行荧光素酶活性测定。结果：成功构建了含人 CXCR4启动子序列的 PgL4.17- CXCR4报告载体,6组荧光素酶活性比较,差异有统计学意义（P <0.001）,其中大蒜素处理组荧光素酶活性均低于对照组（P <0.001）。结论：大蒜素能降低 CXCR4启动子的表达,有效抑制体外培养的 Jurkat 细胞中的 CXCR4启动子活性。     

特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓巨核细胞和血小板功能的变化

原发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)是小儿时期常见的一种出血性疾病，认为与自身免疫有关。在应用免疫抑制剂或大剂量丙种球蛋白后，绝大多数患儿血小板可有不同程度的增高，临床症状消失或改善。我们对32例ITP患儿治疗前后血小板的功能、骨髓中巨核细胞数量及T淋巴细胞亚群的变化进行了分析，报告如下。     

C-jun在二烯丙基二硫诱导白血病细胞K562凋亡过程中的作用

目的探讨c-jun在二烯丙基二硫(DADS)诱导白血病细胞K562凋亡中的作用及机制。方法通过RT-PCR检测caspase3 mRNA的表达变化,观察DADS诱导K562细胞凋亡作用;RT-PCR从mRNA水平检测c-jun在DADS诱导K562细胞凋亡过程中的表达变化;免疫组化染色从蛋白水平检测p-c-jun(ser73)在DADS诱导K562细胞凋亡中的表达变化。结果 1)随DADS作用时间延长,caspase3的表达越来越强;2)在mRNA水平,DADS作用K562细胞3 h后,随DADS作用时间的延长,c-jun mRNA表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);3)在蛋白水平,DADS作用K562细胞24 h后,p-c-jun(ser73)的表达增加(P<0.05)。结论 DADS诱导K562细胞凋亡呈时间依赖性,其机制可能与c-jun的ser73位点磷酸化有关。     

黄芪甲甙对大鼠骨髓间充质干细胞多种造血相关因子表达的影响

背景:黄芪甲甙是中药黄芪的主要有效成分,能促进骨髓间充质干细胞的增殖及诱导分化,但涉及具体作用机制的报道较少.目的:探讨中药黄芪甲甙对大鼠骨髓间充质干细胞造血相关因子表达的影响.方法:全骨髓贴壁法和单克隆培养法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,接种于96孔板中,加药组分别用25,50,100,200 g/L黄芪甲甙100 μL孵育72 h,对照组仅加等量DMEM-LG培养液.间接免疫荧光法鉴定其生物学特性,MTT法检测黄芪甲甙对骨髓间充质干细胞增殖的影响,RT-PCR法检测黄芪甲甙干预后骨髓间充质干细胞造血相关因子的表达.结果与结论:第3代骨髓间充质于细胞高表达CD44,低表达造血细胞表面标志CD45.与对照组比较,黄芪甲甙呈时间及剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞的增殖,以200g/L黄芪甲甙干预72 h促增殖作用最强(P＜0.05).与对照组比较,加药组骨髓间充质干细胞SCF的表达显著增加(P＜0.01),TPO,GM-CSF,TGF-β1等细胞因子的表达无明显变化(P＞0.05),不表达自细胞介索3.黄芪甲甙可促进骨髓间充质干细胞的体外增殖,可能与其诱导骨髓间充质干细胞分泌SCF有关.