被动吸烟所致小鼠肺癌中Angiopoietin-3基因过表达及其意义的初步探讨

目的 初步寻找新的与肺癌相关的基因,为全面揭开肺癌发病机制、进一步诊断和治疗肺癌提供依据.方法 （1）通过基因表达芯片筛选被动吸烟致小鼠肺癌中异常表达的基因;（2）荧光实时定量PCR验证部分基因芯片结果;（3）应用western blotting分析方法检测小鼠肺组织中Angiopoietin-3（Ang-3）基因的蛋白表达量变化.结果 实时荧光定量PCR结果显示Ang-3基因的mRNA相对表达量在肺癌组（30.6544±15.2245）明显高于在正常对照组（1.0469±0.3441,P〈0.05）.Western blotting结果进一步表明吸烟导致Ang-3基因蛋白高表达（1.2724±0.1493）,尤其是在肺癌组织中（1.5901±0.1189）明显高于正常肺组织中（0.9054±0.0523）,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 Ang-3基因在被动吸烟所致小鼠肺癌的发生、发展中发挥一定的作用.     

三碘甲腺原氨酸对新生小鼠兴奋毒性脑损伤病理改变及Caspase-3和髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的 探讨腹腔注射不同剂量三碘甲腺原氨酸(T3)对新生小鼠兴奋毒性脑损伤脑组织病理改变和Caspase-3、髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响.方法 72只新生5日龄(P5)ICR小鼠随机分为PBS对照组(PBS组)、兴奋毒性脑损伤模型组(IA组)、T3低剂量治疗组(LT组)、T3中剂量治疗组(MT组)和T3高剂量治疗组(HT组).模型组及T3各剂量治疗组脑内注射鹅膏蕈氨酸建立兴奋毒性脑损伤模型,模型建立后腹腔注射3种不同剂量(2 μg·kg-1、5 μg·kg-1、10 μg·kg-1)T3共5 d干预治疗.于脑内注射后120 h(P10)、30 d(P35)各取6只小鼠处死,HE染色观察其脑组织病理改变.免疫组织化学法检测小鼠脑组织损伤区Caspase-3及MBP的表达.结果 P10时,MT组脑白质及皮质损伤较IA组均明显减轻(Pa＜0.01),HT组脑皮质损伤较IA组减轻(P＜0.05);IA组Caspase-3表达较PBS组明显增强(P＜0.001),MT组和HT组Caspase-3表达与IA组比较明显减低(P＜0.01);P10和P35时,IA组MBP表达较PBS组均明显减弱(P＜0.001),MT组和HT组MBP表达较IA组均明显增强(P＜0.05).LT组脑组织病理损伤程度及Caspase-3、MBP表达与IA组比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论 腹腔注射中剂量及高剂量T3可减轻小鼠兴奋毒性脑损伤病理损伤程度,减少细胞凋亡,促进髓鞘的形成;低剂量T3对新生小鼠兴奋毒性脑损伤程度、细胞凋亡及髓鞘形成均无影响.     

极早产儿俯卧位机械通气对呼吸功能的影响

目的 探讨极早产儿俯卧位机械通气对呼吸功能的影响。方法 83例经口气管插管机械通气极早产儿随机分为仰卧位组和俯卧位组,4例退出研究,79例完成治疗和观察（仰卧位组37例,俯卧位组42例）,以容量辅助/控制模式机械通气。俯卧位组患儿每仰卧位通气4 h行俯卧位通气2 h。分组干预之前以及分组干预后仰卧位组每6 h、俯卧位组每于转换为俯卧位后的1 h,分别记录呼吸机参数、动脉血气分析和生命体征。结果 俯卧位组FiO₂、气道峰压,平均气道压、机械通气时间低于仰卧位组,差异有统计学意义（P < 0.05）;两组潮气量、呼气末正压的差异无统计学意义（P > 0.05）;俯卧位组的PO₂/FiO₂比值高于仰卧位组,而氧合指数、呼吸频率较低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。两组PaO₂、pH、BE、心率和有创动脉血压平均压的差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 俯卧位与仰卧位交替通气能改善机械通气极早产儿的氧合功能,降低吸入氧体积分数,缩短机械通气时间。     

超声微泡靶向破坏转染shRNA沉默Survivin表达诱导裸鼠宫颈癌移植瘤凋亡的研究

目的 通过超声微泡靶向破坏(UTMD)对靶向存活素的短发夹状重组质粒(Survivin-shRNA)进行转染,探讨其凋亡诱导效应、增殖抑制作用及其安全性.方法 将荷人宫颈癌(Hela)裸鼠随机分为三组:质粒+超声辐照(P+US)组,注入质粒溶液后予以超声辐照;质粒+微泡+超声辐照(P+UTMD)组,注入质粒/微泡复合物后辐照;对照组,不予任何处理.对组织样本行组织学检查,采用免疫组化SABC法检测移植瘤增殖细胞核抗原(PCNA)、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Ki-67、核干细胞因子(NS)、p53蛋白在各组肿瘤标本中的表达.结果 P+UTMD组的PCNA、Ki-67、Bcl-2、Survivin及NS蛋白表达下降,而Bax、Caspase-3、p53蛋白表达明显增加,与对照组及P+US组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 UTMD联合Survivin-shRNA能有效沉默Survivin基因表达,具有抑制增殖和促分化的作用,并诱发细胞凋亡,无明显副作用,为癌症基因疗法提供一种高效、无创、有前景的新方法.     

超声辐照联合微泡转染短发卡状重组质粒诱导裸鼠宫颈癌移植瘤凋亡的研究

目的探讨超声辐照联合微泡对靶向存活素的短发卡状重组质粒（survivin—shRNA）的转染增效作用及其安全性,分析其凋亡诱导效应和增殖抑制作用。方法将荷人宫颈癌（Hela）裸鼠18只随机分为3组,每组6只。1组：质粒＋超声辐照组,注入质粒溶液后予以超声辐照;2组：质粒＋微泡＋超声辐照组,注入质粒及微泡复合物后辐照;对照组：不予任何处理。对组织样本行冰冻切片、组织学检查、转染率检测。采用免疫组化SABC法检测移植瘤增殖细胞核抗原（PCNA）及survivin蛋白在各组肿瘤标本中的表达,测定凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）。结果2组的移植瘤内荧光表达率显著高于对照组、1组（P〈0．01）;裸鼠其他器官组织中未观察到基因表达,且未观察到明显的组织损伤;PCNA及survivin蛋白表达下降,AI明显升高,PI明显减少,与对照组及1组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论超声辐照联合微泡能显著增强基因转染效率,无明显副作用,联合Survivin—shRNA能明显诱导裸鼠体内肿瘤凋亡,抑制细胞增殖。     

TPGS修饰的青蒿琥酯脂质体及其代谢产物在大鼠体内组织分布研究

青蒿琥酯作为一种抗疟药物被广泛使用,制成脂质体可以改变其生物利用度差的特点,同时其在体内的组织分布可能改变,因此需对TPGS修饰的青蒿琥酯脂质体(ARS-TPGS-Lipo)在大鼠体内的组织分布进行研究。采用薄膜水化法制备ARS-TPGS-Lipo和青蒿琥酯脂质体(ARS-Lipo),同时建立LC-MS/MS检测大鼠组织中青蒿琥酯(ARS)和双氢青蒿素(DHA)含量的方法,并测定大鼠尾静脉注射ARS-TPGS-Lipo,ARS-Lipo和ARS注射液(5 mg·kg~(-1))后不同时间点的组织药物浓度。实验结果显示该方法适用于分析生物样品中的ARS和DHA的含量。ARS-TPGS-Lipo,ARS-Lipo和ARS组中的ARS及其代谢产物DHA在大鼠的组织中分布差异较大,使用TPGS修饰后的青蒿琥酯脂质体中的药物浓度在肝脏中浓度最高,且有显著性差异。ARS经注射给药后1 h内快速消除;ARS-Lipo组测得的ARS和DHA在肝、脾中的浓度较高;而ARS-TPGS-Lipo组中测得的ARS和DHA仅在肝脏中的浓度显著提高(P0.05)。     

超声靶向微泡破裂法介导RNA干扰沉默survivin基因对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的:通过超声靶向微泡破裂(ultrasound targeted microbubble destruction ,UTMD)法介导基因转染,观察RNA干扰对宫颈癌HeLa细胞survivin基因的沉默效应和诱导细胞凋亡的作用.方法:构建靶向survivin基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,将其和微泡共同处理后加入HeLa细胞并予以超声辐照,以空白细胞、单纯质粒、单纯超声辐照、质粒+超声辐照和质粒+Lipofectamine转染作为对照;采用荧光显微镜和FCM法评估基因转染效率,同时对超声辐照参数进行优化;应用FCM法和Hoechst染色及DNA ladder分析法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测survivin mRNA水平的变化.结果:经酶切鉴定及测序分析证实重组质粒构建成功.HeLa细胞采用UTMD处理后,基因转染率显著增加(P＜0.01),并在超声强度为1.0 W/cm2、辐照3 min的条件下最为显著(P＜0.01).PT-PCR检测结果显示,质粒与微泡共同作用加超声辐照组的survivin mRNA抑制率为(83.33±2.73)%,均显著高于各对照组(P＜0.01);FCM法检测结果显示,该组细胞的凋亡率同样显著高于各对照组(P＜0.01);Hoechst染色及DNA ladder检测结果显示,只有经脂质体或UTMD转染处理后的细胞中可检测到明显的细胞凋亡形态及凋亡梯带,其余各组均未检测到明显凋亡.结论:UTMD可有效增强表达质粒的转染效率,是一种新的、有应用前景的非病毒基因转移体系.UTMD介导RNA干扰沉默survivin基因可诱导明显的细胞凋亡,为肿瘤基因治疗及研究提供了新的方法.     

米氮平与舍曲林治疗老年抑郁症对照研究

目的比较米氮平与舍曲林治疗老年抑郁症的疗效和安全性。方法将96例老年抑郁症患者随机分为米氮平组和舍曲林组,分别给予米氮平和舍曲林治疗,疗程6周。采用汉密尔顿抑郁量表及副反应量表评定疗效和不良反应。结果米氮平组和舍曲林组显效率分别为79.1%和72.92%,两组间疗效差异无显著性(P>0.05),但米氮平组起效快,副反应轻。结论米氮平是一种安全有效的新一代抗抑郁药,适于老年抑郁症患者。     

软坚清脉颗粒中5 种主要成分的含量测定

目的建立软坚清脉颗粒中香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素含量的高 效液相测定方法,并比较其水解前后5 种成分含量的变化。方法采用Diamonsil Plus C18 色谱柱（250 mm × 4.6 mm,5 μm）;以0.2%磷酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱;流速：1.0 mL·min-1;柱温：35 ℃;检 测波长：360 nm。结果软坚清脉颗粒中香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素在 一定浓度范围内呈良好的线性关系,r 均大于0.999 6,未水解样品的平均加样回收率为97.60%~101.2%;水解 样品的平均加样回收率为97.55%~98.66%,两样品的RSD < 3.2%,在24 h 内稳定性良好,经水解处理后,槲 皮素、山柰酚、异鼠李素3 种成分含量显著增加。结论该方法的准确度高、重复性好,可为软坚清脉颗粒的 质量控制提供参考。     

浅谈临床教学环境与临床教师行为素质

21世纪的实用型人才必须具备必要的理论知识,较强的实践技能,良好的职业素质。如何培养适应社会需求的合格高级护理人才取决于护理教学的两个重要环节：理论教学——课堂;临床教学——医院。临床教学：理论和实践相结合,培养学生的动手能力,创新能力的重要场所;护士的榜样作用对学生产生积极的影响,培养专业化的思维方式,有利于护士角色的形成,帮助学生从实践中探索规律总结经验,也是让学生获得能力的过程。临床学习过程是知识态度行为的转变过程,也是学生向护士转变的过程。